للبدء ، ضع حصة من الجسيمات الشحمية في حمام مائي في درجة حرارة الغرفة لإذابة الحويصلات. قم بموازنة الطارد مسبقا مزودا بفلتر مع Buffer A.ثم مرر الجسيمات الشحمية المذابة إلى الطارد 13 مرة. جمع الجسيمات الشحمية المبثوقة في أنبوب بلاستيكي ، وتقليل الحجم الميت.
بعد ذلك ، ماصة ملليلتر واحد من محلول الجسيمات الشحمية المخففة في كوفيت شفاف. قم بقياس كثافته البصرية الأولية عند 540 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي. أضف 50 ميكرولترا من 10٪ Triton X-100 إلى الجسيمات الشحمية.
عندما يصل المحلول إلى أقصى كثافة بصرية ، قم بمعايرته مقابل Triton X-100 حتى يتم الحصول على كثافة بصرية تبلغ 60٪ تشبع. صب الحويصلات غير المستقرة بالمنظفات مرة أخرى في الأنبوب البلاستيكي. بعد ذلك ، أضف بروتين الغشاء المنقى إلى الجسيمات الشحمية غير المستقرة حتى يتم الحصول على النسبة المطلوبة من 400 إلى 1.
قم بتقطيع العينات عند أربع درجات مئوية لمدة 15 دقيقة. ثم أضف 200 ملليغرام من حبات البوليسترين غير المبللة لإزالة المنظف. الآن قم بتأمين عمود تدفق الجاذبية الفارغ 10 ملليلتر فوق أنبوب فائق التمركز فارغ سعة 6.5 ملليلتر موضوع على الجليد.
صب العينة في عمود تدفق الجاذبية وجمع البروتينات في أنبوب الطرد المركزي الفائق. أضف 0.5 ملليلتر من المخزن المؤقت أ إلى الخرزات. جمع المرشح في أنبوب الطرد المركزي الفائق.
بعد ذلك ضع الجسيمات الشحمية في جهاز طرد مركزي فائق لتركيزها. بعد التخلص من المادة الطافية ، أعد تعليق البروتيوليبوزومات المحببة في حجم إجمالي قدره 200 ميكرولتر من Buffer A.قسم الحجم النهائي للجسيمات البروتينية إلى ثلاث قسامات. أدت الكميات المنخفضة من Triton X-100 في البداية إلى زيادة الامتصاص عند 540 نانومتر.
أدت الإضافة الإضافية إلى الذوبان الجزئي للحويصلات. في Rsol لدينا ، كانت الجسيمات الشحمية قابلة للذوبان تماما.
