تلقيح الخلايا السرطانية في الفئران من خلال تقنيات دقيقة لوضع العلامات والحقن

بعد تخدير وإزالة شعر الفأر ، ضعه على وسادة تدفئة ملفوفة في حصيرة جراحية من الأوتوكلاف. قم بتصويب الجسم بلطف ورفع الجلد على طول العمود الفقري. استخدم علامة جراحية لرسم نقطة واحدة على جانب واحد من الماوس في وسط جلد الخيام.

بعد زراعة BXPC ، خط خلايا سرطان البنكرياس البشري لمدة أسبوعين. أخرج القارورة من الحاضنة وضعها في خزانة السلامة البيولوجية. نضح الوسط وغسل الخلايا بخمسة ملليلتر من برنامج تلفزيوني.

أضف خمسة ملليلتر من عامل تفكك الخلايا في القارورة واحتضانها عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ست إلى سبع دقائق. نقل تعليق الخلية إلى أنبوب 15 ملليلتر وأجهزة الطرد المركزي في 500 غرام لمدة خمس دقائق. بعد إزالة المادة الطافية ، أعد تعليق الخلايا في وسائط نمو كاملة.

باستخدام مقياس الدم الخلوي ، حدد تركيز الخلية وعدد الخلايا الكلي. معلق جهاز طرد مركزي 1.5 ملليلتر يحتوي على 250،000 خلية لكل فأر يتم تلقيحه عند 500 جرام لمدة خمس دقائق. بعد إزالة المادة الطافية ، أعد تعليق الحبيبات في 10 ميكرولتر من PBS لكل فأر ليتم تلقيحها ووضع الأنبوب على الجليد.

باستخدام أطراف ماصة مبردة ، أضف غشاء قاعدي قابل للذوبان في الأنبوب. قم بتحميل إبرة الأنسولين المبردة عيار 29 مع 20 ميكرولتر من تعليق الخلية ووضع المحقنة على الثلج. أدخل الإبرة حوالي سنتيمتر واحد إلى النقطة المحددة على الماوس وحرك الإبرة تحت الجلد حتى تصل إلى المعلم ، مع الجانب المائل من الإبرة لأعلى.

حقن 20 ميكرولتر من تعليق الخلية وانتظر لمدة 45 ثانية قبل إزالة المحقنة. بعد إزالة الفأر من التخدير ، انتظر حتى يصبح متنقلا قبل العودة إلى قفصه المنزلي.