mOrange-Nano Recruitment to disiLID Giant Unilamellar Vesicles (GUVs) لتوليد أنماط البروتين

للبدء ، خذ أنبوب GUVs التي تم حصادها حديثا. أضف محلول الستربتافيدين واتركه لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ثم أضف ميكرومولار واحد من b-disiLID إلى محلول GUV.

قم بتغطية العينة بورق الألمنيوم واحتفظ بها في الظلام. قم بمعالجة غرفة سفلية زجاجية صغيرة ذات 18 بئرا مع 150 ميكرولتر من محلول BSA لمدة 10 دقائق. ثم قم بإزالة محلول BSA وغسل الآبار ثلاث مرات ب 150 ميكرولتر من الماء.

بعد ذلك ، أضف 145 ميكرولترا من 200 نانومولار mOrange-nano في المخزن المؤقت إلى البئر. أضف خمسة ميكرولترات من GUVs مزينة ب b-disiLID إلى المحلول. قم بتغطية العينة بورق الألمنيوم وانتظر حوالي 15 دقيقة حتى تستقر الحويصلات.

بعد ذلك ، ضع الشريحة الصغيرة تحت المجهر متحد البؤر. إثارة العينة عند 552 نانومتر لتصور mOrange. وعند 638 نانومتر ل DID في أغشية GUV.

فشلت mOrange-nano GUVs في إظهار التألق في الظلام. أظهرت كثافة mOrange التي تم قياسها كميا في غشاء GUV توظيفا سريعا وفعالا للبروتين مع قابلية عكسية كاملة.