للبدء ، انقل خمسة ملليلتر من طاف الثقافة المحمضة من الزائفة الزنجارية إلى أنبوب بولي بروبيلين سعة 50 ملليلتر. أضف خمسة ملليلترات من خليط الكلوروفورم والميثانول في هذا الأنبوب. اقلب الأنبوب ثلاث مرات لمدة 30 ثانية لتحريك المحلول وخلطه.
اترك الأنبوب دون انعكاس لمدة دقيقتين بين كل تحريض. قم بطرد الأنبوب لمدة 10 دقائق عند 3000 جم عند أربع درجات مئوية ، ثم انقل المرحلة العضوية إلى أنبوب نظيف. اترك الأنبوب في غطاء الاستخراج حتى يجف.
بعد ذلك ، استخدم ماصة سعة 10 ميكرولتر لتطبيق خمسة ميكرولترات من العينات على لوحة TLC. لتحضير الطور السائل ، اخلطي 26 ملليلترا من الكلوروفورم ، وستة ملليلتر من الميثانول ، و 0.8 ملليلتر من حمض الأسيتيك 20٪. ضع مزيج المذيب في حجرة TLC مغلقة لمدة 10 دقائق على الأقل لتشبعه.
انقل لوحة TLC إلى الغرفة ، وتجنب ملامسة نقاط تطبيق العينة. اترك لوحة TLC في الغرفة المغلقة حتى يصل المذيب إلى سنتيمتر واحد قبل حافة اللوحة. في هذه المرحلة ، قم بإزالة اللوحة واتركها تجف.
للكشف عن وجود rhamnolipids ، رش محلول ألفا نفثول على اللوحة في شفاط الاستخراج ، ثم ضع صفيحة رش في فرن على حرارة 85 درجة مئوية لعدة دقائق حتى تظهر العلامة الوردية لدهون الرامنوليبيد. تنتج جميع سلالات الزائفة الزنجارية الثلاثة كميات مختلفة من الأحادي والثنائي رامنوليبيد.
