تصميم PCR التمهيدي لاستنساخ جين فيروس متلازمة الخنازير التناسلية والجهاز التنفسي

للبدء ، افتح البرنامج وحدد خيار إنشاء ملف DNA جديد. قم بإعداد تسلسل جين PRRSV من NCBI وانقر فوق حسنا لإنشاء ملفات التسلسل. تحليل التسلسل ووضع علامة على تقاطعات الشظية.

حدد جميع التقاطعات قبل تصميم بادئات التسلسل المحددة للشظايا. ثم انقر فوق التمهيدي واختر إضافة التمهيدي. الصق التسلسل المحدد وأضف تتابعات متداخلة من المتجه إلى النيوكليوتيدات الأولية الخمسة الأولى من التمهيدي.

قم بتسمية التمهيدي الأمامي وانقر فوق إضافة التمهيدي إلى القالب لدمج التمهيدي المصمم في القالب. ثم قم بتمييز تقاطعات الأجزاء وصمم التمهيدي للتسلسل المحدد العكسي للشظايا. مرة أخرى ، انتقل إلى التمهيدي وحدد إضافة التمهيدي.

أدخل التسلسل المحدد. أضف موقع القطع إلى النيوكليوتيدات الخمسة الأولى من النيوكليوتيدات. أيضا ، قم بتضمين 20 إلى 40 زوجا أساسيا من تسلسلات المتجهات المتدلية إلى النوكليوتيدات الخمسة الأولى من موقع التقييد.

قم بتسمية التمهيدي العكسي وحدد إضافة التمهيدي إلى القالب. بعد ذلك ، قم بإعداد ستة تفاعلات PCR فردية باستخدام الأجزاء الستة وأزواج التمهيدي المصممة. قم بتشغيل PCR باتباع بروتوكول من ثلاث خطوات كما هو موضح هنا.

بعد الانتهاء من تفاعل البوليميراز المتسلسل ، ماصة ميكرولتر واحد من ستة مخزن مؤقت لتحميل xDNA مع خمسة ميكرولترات من منتج PCR. مزيج وأجهزة الطرد المركزي لفترة وجيزة. تحليل العينات باستخدام 1٪ هلام الاغاروز الكهربائي.

لبناء جين كامل الطول ، تم تضخيم أجزاء من PRRSV باستخدام ستة تفاعلات PCR. تم تأكيد أحجام الشظايا بواسطة الرحلان الكهربائي هلام الأغاروز.