استخراج الحمض النووي من عينات البلغم البشري للكشف السريع عن مسببات الأمراض البكتيرية باستخدام شريحة الموائع الدقيقة

للبدء ، قم بتنظيف تجويف الفم والأسنان بالماء النظيف. اطلب من المرضى الذين لديهم أطقم أسنان إزالتها. اطلب من المريض السعال بقوة لطرد البلغم التنفسي العميق في وعاء البلغم.

لاستخراج الحمض النووي ، أضف حجما مناسبا من 10٪ هيدروكسيد الصوديوم إلى العينة بناء على لزوجتها. دوامة التعليق لمدة 15 ثانية ، ثم احتضانه عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لتسييل العينة. بعد ذلك ، ماصة ملليلتر واحد من العينة المسالة في أنبوب طرد مركزي 1.5 ملليلتر.

أجهزة الطرد المركزي العينة في 15،777 G لمدة خمس دقائق في درجتين إلى ست درجات مئوية. ثم ماصة من طاف للتخلص منه. الآن ، أضف ملليلترا واحدا من محلول الغسيل إلى الأنبوب ، وقم بدوامة لرفع الراسب من قاع الأنبوب.

بعد التسريب المركزي والتخلص من المادة الطافية كما كان من قبل ، ماصة 100 ميكرولتر من محلول استخراج الحمض النووي إلى البليت. باستخدام ماصة ، نضح واخلط الراسب جيدا مع المحلول. انقل السائل وترسب معا في أنبوب استخلاص الحمض النووي.

ضع الأنبوب في خلاط دوامة بسرعة متوسطة لمدة خمس دقائق. ثم انقل الأنبوب إلى حمام معدني عند درجة حرارة ثابتة تبلغ 100 درجة مئوية لمدة خمس دقائق. أخيرا ، قم بطرد العينات عند 15،777 جم لمدة خمس دقائق عند درجتين إلى ست درجات مئوية قبل إجراء مزيد من التجارب.