استخراج الأنسجة الدهنية البربخية للفأر وعزل الخلايا الجذعية لقياس التدفق الخلوي والتوصيف الوظيفي

للبدء ، ضع فأرا يتم قتله رحيما على لوح الفلين بحيث يكون الجانب البطني متجها لأعلى. باستخدام الملقط ، ارفع الجلد المحلوق في وسط البطن وقم بعمل شق بمقص معقم. قطع الجلد مفتوحا لفصله عن الصفاق.

ثم ارفع الطبقة البريتونية وقطعها. باستخدام مجموعة جديدة من الملقط والمقص المعقم ، أمسك برفق ، وارفع ، وقطع الأنسجة الدهنية البربخية بأكملها الموجودة فوق الخصيتين. ضع الدهون المستأصلة في أنبوب مخروطي معقم سعة 50 ملليلتر يحتوي على وسط قاعدي على الثلج.

بعد ذلك ، اغسل أنسجة البربخ باستخدام برنامج تلفزيوني. باستخدام ملاقط معقمة ، انقل الأنسجة الدهنية البربخية إلى أنبوب يحتوي على 15 إلى 20 مل من محلول الهضم. قطع الأنسجة إلى شظايا بمقص معقم.

ثم احتضان شظايا الأنسجة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. تمييع العينة في حجم متساو من الوسط القاعدي لتعطيل كولاجيناز. أجهزة الطرد المركزي التعليق عند 250 G لمدة 10 دقائق عند أربع درجات مئوية.

بعد التخلص من المادة الطافية ، أعد تعليق الحبيبات في ملليلتر واحد من الوسط القاعدي. بعد ذلك ، انظر إلى بئر صفيحة من ستة آبار تحتوي على ثلاثة ملليلتر من الوسط القاعدي مع خلايا معزولة. احتضان الخلايا بين عشية وضحاها عند 37 درجة مئوية مع 5 ٪ ثاني أكسيد الكربون.

في اليوم التالي ، أضف ثلاثة ملليلتر من الوسط القاعدي إلى الخلايا المغسولة ب PBS. أظهرت الخلايا المستخرجة من الأنسجة الدهنية تطابقات مورفولوجيا الخلايا الجذعية الوسيطة.