للبدء ، خذ عينات خزعة المريء مغمورة في وسط خال من مصل الخلايا الكيراتينية ، أو KSFM. استبدل KSFM بمليلتر واحد من Dispase I واحتضان الخزعات لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، باستخدام ماصة 1،000 ميكرولتر ، قم بنضح Dispase دون لمس الخزعات أو حبيبات حطام الخلية.
ثم اشطف الخزعات باستخدام DPBS. بعد الطرد المركزي للخزعات ، استخدم ماصة 1،000 ميكرولتر لاستنشاق المادة الطافية. بعد ذلك ، أضف 500 ميكرولتر من التربسين-EDTA إلى الخزعات واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق أثناء الهز عند 800 دورة في الدقيقة.
بعد ذلك ، قم بإجراء سحب متكرر حتى يتم الحصول على تعليق أحادي الخلية. باستخدام رأس المكبس المطاطي لحقنة السل ، قم بتصفية الخلايا من خلال مصفاة خلية 70 ميكرومتر. بعد ذلك ، اغسل المصفاة باثنين إلى أربعة ملليلتر من مثبطات التربسين لفول الصويا.
بعد ذلك ، قم بتصفية الخلايا من خلال مصفاة خلية 35 ميكرومتر مع غطاء إضافي على أنبوب بوليسترين مستدير القاع سعة خمسة ملليلترات. بعد الطرد المركزي لتعليق الخلية ، استخدم ماصة 1،000 ميكرولتر لاستنشاق المادة الطافية. أعد تعليق حبيبات الخلية في مصفوفة هيدروجيل استخراج الغشاء القاعدي وشكل قطرات 40 ميكرولتر في لوحة زراعة الخلايا المعلقة الدافئة مسبقا.
بعد ذلك ، احتضن اللوحة بدون وسيط لمدة 20 إلى 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية لضمان تصلب قطرات مستخلص الغشاء القاعدي. أضف KSFM قبل التسخين مع 10 أضراس دقيقة من Y27632. في اليوم التاسع ، لوحظت بنية متعددة الطبقات تشبه البصل في قلب كيراتيني متزايد في وسط العضو العضوي.
