SW1222 تصنيع عضوي لسرطان القولون والمستقيم مشتق من خط الخلية في مصفوفة ببتيد ذاتية التجميع فائقة القصر

للبدء ، ماصة 10 ميكرولتر قطرات من محلول الببتيد 2X في مراكز الآبار في لوحة 24 بئر. بعد الحضانة ، ماصة 10 ميكرولتر من 2X PBS في كل بئر. استخدم طرف الماصة لخلط المحلول برفق ، واترك قطرات الجل تستقر لمدة 20 دقيقة على الأقل ، مع التأكد من أن القطرات سليمة.

بعد ذلك ، ماصة 2.5 ملليلتر من 0.0125 ٪ التربسين EDTA في قارورة تحتوي على 2 مليون SW1222 خلايا سرطان القولون والمستقيم الغدية البشرية. احتضان الخلايا مع التربسين عند 37 درجة مئوية لمدة خمس إلى 10 دقائق حتى تنفصل عن القارورة. أضف خمسة ملليلتر من الوسط الكامل لتعطيل التربسين.

ثم قم بتصفية تعليق الخلية باستخدام مصفاة خلية 30 ميكرومتر. باستخدام ماصة صغيرة سعة 10 ميكرولتر ، قم بحقن ميكرولتر من تعليق الخلية في كل قطرة ببتيد. زرع 800 خلية من خط خلايا SW1222 في كل بئر لمدة أربعة أيام.

احتضان القطرات لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية تحت 5٪ ثاني أكسيد الكربون. ثم أضف 0.5 ملليلتر من الوسط المكمل لكل بئر. لإعداد عنصر التحكم ، قم بتخفيف مخزون التحكم في مصفوفة الغشاء القاعدي باستخدام وسيط مكمل.

قم بتحميل تعليق الخلية في محلول الطابق السفلي الغشائي المخفف. ماصة 20 ميكرولتر من مصفوفة الغشاء القاعدي المخفف في كل بئر مع الخلايا. احتضان الخلايا لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية.

بعد أن تصلب القطرات ، أضف 0.5 ملليلتر من الوسط الكامل. تخيل الخلايا باستخدام مجهر برايت فيلد في الأيام الأول والرابع والسابع لتقييم نمو الكائنات العضوية. أظهر تصوير برايت فيلد للخلايا لمدة أسبوع أن مجموعات الخلايا الصغيرة كانت تتجمع في عضويات.

كان للعضويات المشتقة من SW1222 المستزرعة في الهلاميات المائية الببتيد مورفولوجيا مستديرة ذات مظهر خفيف. يشير المظهر الداكن إلى كثافة أعلى غير مرغوب فيها كما رأينا في مستعمرات الببتيد P في اليوم السابع.