استعد للتصوير باستخدام مجهر متحد البؤر بعد يومين من نقل الخلايا العصبية الحصين الأولية. قم بتسخين ملحق غرفة الخلية الحية 60x ذاتي وزيت العدسة إلى 37 درجة مئوية وقم بموازنة الغرفة إلى 5٪ CO2. باستخدام قطع العين ، حدد الخلايا العصبية المنقولة في القناة التي تحتوي على بروتين الشحن.
بعد ذلك ، انقر فوق المسح الضوئي لتصوير الخلايا العصبية وتحديد الجزء الأولي من محور عصبي لقناة SCI-5. اضبط مجال الرؤية على مربع مستطيل مساحته 32 × 128 بكسل وانقله لتصوير منطقة من المحور العصبي ، من 50 إلى 150 ميكرون بعيدة عن القطعة الابتدائية المحورية. سجل اتجاه نقل البضائع واتجاه عائد الاستثمار ، ثم اضغط على حفظ باسم لحفظه كملف.
لاحظ أن النقاط الموجودة في المربع ستظهر في الأعلى واليمين في الصور اللاحقة. سجل جانب الصورة الأقرب إلى جسم الخلية والجانب الأقرب إلى الطرف المحوري لضمان الاتجاه الصحيح للغيبوبة Polyline. اضبط طاقة الليزر 561 على 1.40 ، والثقب على 7.8 ، والحجم على 128 بكسل مربع ، والسرعة على 32 إطارا في الثانية.
اضبط الكسب لتصور نقل حويصلات البضائع الفردية دون أن تحجبها إشارة الخلفية. حدد رسم عائد استثمار مستطيل من القائمة المنسدلة عائد الاستثمار وارسم عائد الاستثمار بحيث يغطي مجال الرؤية بالكامل. ثم انقر بزر الماوس الأيمن وحدد استخدام كتحفيز ROI S1. ثم في علامة التبويب إعداد ND ، انقر فوق الحصول على صورة لجمع الصورة المرجعية للتحفيز المسبق.
ثم اضبط التحفيز على ROI S1 ، والفاصل الزمني دون تأخير ، ومدة 1.64 ثانية ، والحلقات على سبعة. ثم انقر فوق الحصول على صورة لجمع الصورة المرجعية بعد التحفيز. حدد الانتظار ، بدون اكتساب ، دقيقتان لتوفير فترة استرداد للبضائع الفلورية لإعادة ملء عائد الاستثمار المبيض.
حدد الفاصل الزمني للاكتساب ، بدون تأخير ، المدة خمس دقائق ، الحلقات ، 8 ، 615. انقر فوق الزر "تطبيق إعدادات التحفيز" في علامة التبويب إعداد ND ، متبوعا ب Run Now. أيضا جمع أشرطة الفيديو النقل من اثنين من الخلايا العصبية لتحليلها.
أعد تعيين مجال الرؤية إلى الصورة بأكملها ثم اجمع صورة للخلية العصبية الكاملة في قنوات 561 و 647 مع تضمين مربع عائد الاستثمار. سجل إحداثيات XY حيث تم التقاط الصورة لتأكيد ما بعد التثبيت لتعبير البروتين. تم إجراء تصوير الخلايا الحية لخلية عصبية منقولة تعبر عن بروتين الشحن mAPL's Synaptophysin باستخدام هذا البروتوكول.
كما تم تسمية المجال الخارجي للفاسين العصبي في الجزء الأولي من Axon. تم إجراء تصوير نقل البضائع في المنطقة المحورية ذات الاهتمام. أكد المزيد من تحليل التألق المناعي بعد التصوير التعبير المشترك لبروتين تاو و mAPL Synaptophysin.
