تصوير ثنائي الفوتون لطعم رئة الفأر لدراسة الديناميات الخلوية والتفاعلات في الوقت الفعلي

للبدء ، ضع فأرا منبيبا مع بضع صدر مفتوح على لوحة قاعدة غرفة التصوير مع توجيه الصدر الأيسر المفتوح لأعلى. باستخدام الشريط الحريري ، قم بتأمين الماوس على وجهه وكفوفه الأمامية وذيله. ضع الغراء على الجانب السفلي من زجاج الغطاء المتصل باللوحة العلوية.

بعد ذلك ، قم بخفض اللوحة العلوية حتى يلامس زجاج الغطاء الرئة ، مما يسمح للغراء بلمس سطح الرئة. امسك غطاء الزجاج على الرئة. قم بتضخيم الرئة لمدة ثانية إلى ثانيتين ، بحيث تلتصق منطقة الغراء بالأنسجة المحيطة.

ضع صمولة الإبهام فوق كل مسمار وقم بتأمين اللوحة العلوية. لتصوير الفوتون مرتين ، ضع غرفة التصوير بأكملها بالماوس على مرحلة المجهر. استخدم مرشحات ثنائية اللون لفصل الإشارات عن مراسل GFP ، ونقاط Q ، والكولاجين يولد إشارة SHG.

بعد ذلك ، اضبط ليزر نبض الفيمتو ثانية من التيتانيوم على طول موجة إثارة يبلغ 890 نانومتر بأقل طاقة ممكنة. ضع ملليلترا واحدا من الماء على زجاج الغطاء على اللوحة العلوية. الآن خفض هدف الغمر في الماء في الماء والتركيز على سطح الرئة.

قم بتشغيل سخان لوحة القاعدة ، مع الحفاظ على درجة الحرارة بين 35 إلى 37 درجة مئوية. احصل على مكدسات الصور باستخدام برنامج الاستحواذ الذي تختاره. في 24 ساعة بعد الزرع ، كان هناك المزيد من العدلات في الرئة مقارنة بساعتين بعد الزرع.