للبدء ، قم بإزالة خلايا CD34 + من دم الحبل السري المبردة من الفريزر. قم بإذابة الخلايا في حمام مائي قبل نقلها إلى أنبوب سعة 50 مل. أثناء هز الأنبوب بالتنقيط ، أضف 10 أضعاف حجم خلايا IMDM الدافئ مسبقا الذي يحتوي على 50٪ FBS و 0.1 ملليغرام لكل مليلتر DNase إلى الأنبوب.
الطرد المركزي معلق الخلية عند 500 جم لمدة خمس دقائق. أعد تعليق الحبيبات في 20 إلى 40 ميكرولتر من PBS التي تحتوي على البنسلين والستربتومايسين. قم بتخزين الخلايا على الثلج حتى الاستخدام.
قم بإعداد حقنة سعة ثلاثة ملليلتر بإبرة قياس 27 نصف بوصة. قم بإعداد حقنة أنسولين سعة 0.5 ملليلتر بإبرة قياس 29 مقاس 12.7 ملم تحتوي على معلق خلية CD34 + من دم الحبل السري. بعد ذلك ، قم بإعداد حقنة أنسولين سعة مليلتر واحد بإبرة قياس 29 بوصة 0.5 بوصة مع 100 ميكرولتر من البوبرينورفين.
انقل الفأر المخدر إلى مخروط الأنف وقم بإجراء قرصة إصبع القدم للتأكد من استعداده للحقن. ضع الماوس على ظهره وثني رجليه الخلفيتين. لتأمين الأرجل الخلفية، ضع إبهام اليد غير المهيمنة على القدم، والإصبع الأوسط على الورك، والسبابة على السطح الخارجي لعظم الفخذ.
نتف الشعر برفق من حول الرضفة وامسح المنطقة بمسحة كحولية. الآن باستخدام حقنة ثلاثة ملليلتر بإبرة قياس 27 نصف بوصة ، قم بحفر ثقب برفق عبر الجلد باتجاه عظم الفخذ. بمجرد أن تصبح الإبرة في العظم ، قم بتدويرها في اتجاه عقارب الساعة حتى تصبح الإبرة بأكملها في العظم.
قم بإزالة الإبرة باستخدام دوران عكس اتجاه عقارب الساعة حتى منتصف الطريق. امسح حول الإبرة بمسحة كحولية واستمر في تدوير الإبرة عكس اتجاه عقارب الساعة لإزالتها بالكامل. بعد ذلك ، أدخل حقنة الأنسولين سعة 0.5 مل التي تحتوي على تعليق خلوي في عمود الفخذ.
بمجرد أن تصبح الإبرة في العظم ، حرر قبضة الساق وحقن 25 ميكرولترا من التعليق برفق في عظم الفخذ. أخيرا ، قم بحقن البوبرينورفين تحت الجلد وأعد الفأر إلى قفصه المنزلي ، مما يسمح له بالتعافي من التخدير.
