ابدأ بإعادة تعليق كسور الميتوكوندريا التي تم الحصول عليها من مزارع خلايا الثدييات أو الأنسجة في مخزن العينة الأزرق الأصلي للحصول على تركيز بروتين يبلغ حوالي 10 ملليغرام لكل ملليلتر. لإذابة أغشية الميتوكوندريا ، أضف الديجيتونين للحصول على نسبة أربعة جرامات من الديجيتونين لكل جرام من بروتين الميتوكوندريا. تخلط عن طريق ماصة لطيفة ، واحتضانها على الجليد لمدة خمس دقائق.
أجهزة الطرد المركزي التعليق في microfuge في 20،000 G لمدة 25 دقيقة عند أربع درجات مئوية لإزالة المواد غير القابلة للذوبان. اجمع المادة الطافية في أنبوب جديد ، ثم أضف 5٪ Coomassie blue G-250 ، أي ما يعادل ثلث حجم إعادة التعليق الأولي ، واخلطه عن طريق الماصة. أضف الكاثود البارد عازلة في الغرفة العلوية لجهاز الرحلان الكهربائي وعازلة الأنود في الغرفة السفلية.
قم بتحميل 30 إلى 100 ميكروغرام من بروتين الميتوكوندريا في الآبار على هلام بولي أكريلاميد. بعد الكهربائي ، ضع الجل في صندوق بلاستيكي. أضف كمية كافية من محلول فحص نشاط الهلام المناسب لتغطية الجل ، واحتضانه في درجة حرارة الغرفة مع اهتزاز لطيف ، والحماية من الضوء.
عندما يتم تطوير النطاقات المناسبة ، قم بإزالة محلول الفحص. اغسل الجل مرتين بالماء المقطر قبل تثبيته بنسبة 40٪ ميثانول و 10٪ حمض الخليك لمدة 30 دقيقة. كشف تحليل فحص نشاط الهلام عن أنماط تجميع فائقة التعقيد متميزة في الفئران والخلايا البشرية.
لوحظ المركب الحر 1 في خلايا الفئران ، في حين أنه لم يكن من الممكن اكتشافه في الميتوكوندريا البشرية. كانت الأنماط المعقدة 4 متشابهة في خطوط الخلايا البشرية ، ولكنها اختلفت في خطوط خلايا الفئران بسبب متغير متحور من SCAF1.
