تعرض خلايا Caco-2 لمستقلبات المبيدات من كالس الجزر المعالج بالمبيدات لدراسة السمية الخلوية

تابع إجراء اختبار التعرض. بمجرد حصاد عدد كاف من الخلايا لنفس الشيء ، انقر برفق على جدار القارورة الذي يحتوي على الخلايا لتوزيعها بشكل موحد ونقل معلقات الخلية إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 ملليلتر. تمييع تعليق الخلية مع DMEM في تركيبة مع قياس الخلايا لتحقيق كثافة الخلية المطلوبة.

اضغط برفق على جدار القارورة لضمان توزيع موحد للخلايا. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من PBS إلى الآبار الخارجية للوحة البئر 96 لمنع وسط الاستزراع من التبخر بسبب تأثير الحافة. أضف 100 ميكرولتر من تعليق الخلية إلى الآبار اليسرى للوحة واتركها ترتاح لمدة 10 دقائق.

احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 48 ساعة. بعد إزالة لوحة البئر 96 من الحاضنة ، تخلص من وسط الاستزراع. لإنشاء مجموعة مستقلب مبيدات الآفات ، أضف 100 ميكرولتر من مختلف محاليل التعرض لبقايا المبيدات المحضرة إلى كل بئر معين.

ثم أضف 100 ميكرولتر من مختلف محاليل التعرض للمبيدات الأم المحضرة إلى كل بئر معين للمقارنة لإنشاء مجموعة أصل من مبيدات الآفات. لإعداد عنصر تحكم فارغ ، أضف 100 ميكرولتر من DMEM تحتوي على 0.3٪ DMSO إلى كل بئر معين. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 24 ساعة.