تجربة تطور درجة الحرارة باستخدام Sulfolobus acidocldarius

للبدء ، استخدم مجموعات السلفولوبوس أسيدوكالداريوس التي تم إحياؤها. أضف BBM plus لتخفيف الثقافات إلى OD600 من 0.01. حجم ماصة مناسب من كل من الثقافات السبع إلى ثلاثة أنابيب منفصلة مثقوبة 2 ملليلتر.

أغلق الأنابيب بغشاء قابل للتنفس ، ثم ضع كل مجموعة من سبعة مجموعات أسلاف في خلاطات حرارية منفصلة. اضبط كل خلاط حراري على درجة الحرارة المطلوبة و 400 دورة في الدقيقة لبدء تجربة التطور. بعد 48 ساعة ، انقل 15 ميكرولترا من كل من مزارع نقل الصفر إلى 1.5 ملليلتر من وسط BBM plus الدافئ الموجود في أنبوب مثقوب سعة 2 ملليلتر يسمى نقل واحد.

أغلق الأنابيب بغشاء نافذ قبل وضعها مرة أخرى في مواضع عشوائية في الخلاطات الحرارية المعنية. قم بقياس OD600 للانتقال صفر في مقياس الطيف الضوئي القائم على اللوحة لإكمال النقل الأول. كرر نقل الثقافة وقياس الكثافة البصرية كل يومين لإجراء عمليات النقل حتى يتم الوصول إلى العدد المطلوب من التحويلات.

قم بإعداد مخزون الجلسرين من السكان بعد كل 10 عمليات نقل وعلى النقل النهائي ، وقم بتسمية الأنبوب بمعرف مجموعة الأجداد ورقم النقل. يجب ضبط الخلاطات الحرارية على درجات حرارة ثابتة تبلغ 75 درجة مئوية و 65 درجة مئوية. سيتم تقليل الخلاط الحراري الثالث تدريجيا لمراقبة الاستجابة للتغيير التدريجي.