لبدء الاستزراع خمس مرات 10 إلى خلايا DF-1 الخامسة لكل بئر في صفيحة ستة آبار مع DMEM مع 10٪ FBS. عندما تصل الخلايا إلى التقاء 80٪ ، تخلص من المصل الذي يحتوي على وسط زراعة الخلايا. بعد غسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني ، أضف ملليلتر من وسط زراعة الخلايا الخالية من المصل ، متبوعا بمحلول فيروس IBDV إلى كل بئر.
بعد ساعة واحدة من امتصاص الفيروس ، اغسل الخلايا باستخدام برنامج تلفزيوني ثلاث مرات واحتضنها لمدة 24 ساعة مع ملليلتر من DMEM المكمل ب 2٪ FBS. أضف 500 ميكرولتر من التربسين لكل بئر ، متبوعا بملليلتر من DMEM مع 10٪ FBS بعد دقيقة واحدة. أجهزة الطرد المركزي الخلايا وإزالة طاف بعناية.
بعد تعليق بيليه الخلية في PBS ، قم بدامة الأنبوب برفق لمدة ثلاث ثوان وطرد مركزي الخلايا كما هو موضح سابقا. باستخدام مقياس الدم تحت المجهر ، عد الخلايا لإعادة تعليقها في حجم مناسب من التدفق الخلوي تلطيخ العازلة ودوامة التعليق. أضف 100 ميكرولتر من التعليق أحادي الخلية إلى أنبوب بوليسترين مستدير القاع سعة خمسة ملليلترات.
احتضان الخلايا المصابة بفيروس IBDV وخلايا التحكم الوهمية بميكروغرام واحد من الأجسام المضادة المناسبة على الجليد لمدة 30 دقيقة في الظلام. أنبوب دوامة بلطف كل 10 دقائق. اغسل الخلايا بملليلتر واحد من محلول تلطيخ قياس التدفق الخلوي وأجهزة الطرد المركزي للأنبوب.
بعد التخلص من المادة الطافية ، أعد تعليق الحبيبات في 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت لتلطيخ قياس التدفق الخلوي. ثم احتضان الخلايا مع 10 ميكروغرام لكل ملليلتر من يوديد البروبيديوم لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة في الظلام. وأضف 400 ميكرولتر من المخزن المؤقت لتلطيخ قياس التدفق الخلوي لمقايسة قياس التدفق الخلوي.
قم بإجراء قياس التدفق الخلوي باستخدام أنبوب التحكم الفارغ متبوعا بالأنابيب الملطخة المفردة لضبط معلمات الجهد والتعويض قبل تشغيل جميع العينات. أشار قياس التدفق الخلوي إلى أن عددا كبيرا من الخلايا كانت إيجابية للشظايا الطرفية N من الدجاج Gasdermin E بعد الإصابة بفيروس IBV ، في حين أن الشظايا الطرفية C للدجاج المشقوق Gasdermin E كانت بالكاد قابلة للاكتشاف عن طريق قياس التدفق الخلوي باستخدام تلطيخ مستضد سطح الغشاء. كان عدد شظايا N-terminal من الدجاج Gasdermin E وخلايا البروبيديوم يوديد المزدوجة الإيجابية في الخلايا المصابة بفيروس IBDV أكبر بكثير من عدد الضوابط المصابة الوهمية ، مما يشير إلى أن هذا الجزء من الخلايا المصابة بفيروس IBDV كان يخضع لداء البيروبتوس.
