تقييم سلامة الحاجز الظهاري للطبقات أحادية 2D المشتقة من العضوية باستخدام مقايسة نفاذية الخلايا

للبدء ، استرجع اللوحة التي تحتوي على إدخالات ثقافة الخلية مع أحاديات 2D المشتقة من العضوية من الحاضنة. قم بإزالة وسائط الاستزراع أحادية الطبقة من كل من الغرف القمية والقاعدية لإدخالات زراعة الخلايا المراد تقييمها. اغسل الغرف القمية والقاعدية برفق مرتين باستخدام 200 و 500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني تم تسخينه مسبقا.

قم بإزالة محلول الغسيل من الغرفة القمية وقم بتطبيق 200 ميكرولتر من 0.5 ملليغرام لكل ملليلتر أربعة كيلودالتون FITC-dextran التتبع في PBS إلى الغرفة القمية لإدراج ثقافة الخلية. احتضان اللوحة في حاضنة مرطبة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 20 دقيقة. ثم قم بأخذ عينة من 50 ميكرولترا من الغرفة القاعدية للوحة المحتضنة المكونة من 24 بئرا ونقلها إلى صفيحة 96 بئرا متوافقة مع قارئ الصفيحة الدقيقة.

استبدل 50 ميكرولترا من PBS الطازج في الغرفة القاعدية للبئر الذي تم أخذ عينات منه. باستخدام قارئ الصفائح الدقيقة الذي تمت معايرته مسبقا ، قم على الفور بقياس شدة التألق بطول موجة إثارة يبلغ 495 نانومتر وطول موجة انبعاث يبلغ 535 نانومتر.