عزل الخلايا أحادية النواة من الدم الكامل للحصول على خلايا شبيهة بالخلايا الدبقية الصغيرة المستحثة لأبحاث الدماغ

للبدء ، ضع 15 ملليلترا من وسط تدرج الكثافة في أنبوب طرد مركزي سعة 15 ملليلتر وقم بتدويره عند 1،000 جم لمدة دقيقة واحدة عند 20 درجة مئوية. اقلب الأنبوب الذي يحتوي على دم بشري تم جمعه في الهيبارين ، وباستخدام ملاقط معقمة بالنار ، قم بإزالة الغطاء من أنبوب جمع الدم. قم بتوزيع حوالي 10 إلى 15 ملليلتر من الدم على وسط تدرج الكثافة في الأنبوب.

اضبط مستوى تباطؤ جهاز الطرد المركزي على واحد وجهاز طرد مركزي الأنبوب بالدم عند 1،000 جم لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. قم بإزالة الطبقة العليا من البلازما حتى سنتيمتر واحد فوق معطف بافي. صب المادة الطافية المتبقية من أنبوب الطرد المركزي في أنبوب طرد مركزي آخر يحتوي على 10 ملليلتر من PBS.

إعادة ضبط مستوى تباطؤ أجهزة الطرد المركزي إلى ثلاثة وأجهزة الطرد المركزي للأنبوب باستخدام PBS والمادة الطافية. نضح المادة الطافية واضغط برفق على الأنبوب لفك الحبيبات. بعد ذلك ، قم بدمج 13 ملليلتر من وسط العزل في أنبوب الطرد المركزي واغسل الجدار الداخلي لجمع الخلايا بشكل صحيح.

باستخدام ملاقط معقمة بالنار ، ضع مصفاة خلية 100 ميكرومتر على الأنبوب المخروطي سعة 15 ملليلتر. ثم قم بتصفية تعليق الخلية من خلال مصفاة الخلية في الأنبوب المخروطي سعة 15 ملليلتر. قم بتوزيع كميات متساوية من معلق الخلية في أنبوبين مخروطيين سعة 15 ملليلتر.

تعداد الخلايا لحساب التركيز المناسب للمخزن المؤقت للعزل. بيليه الخلايا في 250 غرام لمدة 10 دقائق في أربع درجات مئوية. بعد إزالة المادة الطافية ، أضف الكمية المناسبة من المخزن المؤقت للعزل والماصة حوالي 20 مرة لتخفيف الحبيبات.