للبدء ، ضع الماوس الأنثوي التجريبي على منصة عمل. داخل الصفاق ، قم بإعطاء 7.5 وحدة دولية من موجهة الغدد التناسلية في مصل الفرس الحامل حوالي الساعة 8:00 مساء في اليوم الأول. بعد 48 ساعة ، يتم حقن 7.5 وحدة دولية من موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية.
قسم غطاء طبق زراعة الخلايا إلى نصفين علويين وسفليين. في النصف العلوي ، ضع أربع إلى ست قطرات من خمسة ميكرولتر لكل منها من PVP لوضع المنوية. أضف 8 إلى 10 قطرات من خمسة ميكرولتر لكل منها من وسط M2 في النصف السفلي لإجراء الحقن المجهري.
قم بتغطية القطرات المتوسطة PVP و M2 بحوالي ثلاثة ملليلتر من الزيت المعدني. بعد عزل الذيل البربخي عن الفأر الذكر القتل الرحيم ، امسحه برفق على شاش معقم. اقطع البربخ الذيل واضغط برفق ، باستخدام ملقط لتحرير المنوية ، وجمعها في أنابيب سائل بوق بشرية متوازنة مسبقا.
اشطف الذيل البربخي في وسط سائل البوق البشري الدافئ مسبقا. ضع الأنبوب مكشوفا عند 37 درجة مئوية و 5٪ حاضنة ثاني أكسيد الكربون لسعة المنوية. في اليوم الرابع بعد حقن موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية ، ضع أنثى الفأر القتل رحيم تحت مجهر تشريح.
باستخدام إبرة قياس 25 ، قم بتمزيق أمبولة قناة البيض لإطلاق العديد من مجمعات البويضات الركامية. بعد السعة ، صوتنة 100 ميكرولتر من المنوية لمدة خمس ثوان لفصل الرؤوس عن ذيولها. املأ إبرة المعالجة الدقيقة بسائل التشغيل ، مع التأكد من أن الجزء المملوء يبلغ 0.5 سم داخل الإبرة.
قم بتثبيت الإبرة على الذراع الأيمن للمناور الدقيق وقم بتثبيتها عن طريق شد غطاء الإمساك. ثم قم بتركيب ماصة مسطحة الرأس على الذراع الأيسر للمناور الدقيق. ضع إبرة الحقن والماصة المثبتة في مجال رؤية المجهر.
تحت مجهر الاستقطاب ، حدد موضع مغزل الطور داخل البويضة للتأكد من أن جهاز المغزل ليس على جانب الحقن. عند ملامسة إبرة الحقن مع المنطقة الشفافة ، قم بتنشيط نبضات بيزو بكثافة خمسة وتردد واحد ، مما يؤدي إلى حدوث ثقب في المنطقة الشفافة والسماح لإبرة الحقن بالمرور. باستخدام نبضات بيزو ذات الشدة الأولى والتردد الأول ، قم بإنشاء مسام صغيرة في غشاء البلازما ، مما يضمن حقن رأس المنوية في الأوبلازم.
باستخدام ملقط غير رضحي ، قم بإخراج المبايض وقنوات البيض والرحم بعناية من أنثى الفأر الحامل الزائفة المخدرة. قم بعمل شق صغير بزاوية تصاعدية باستخدام طرف إبرة حقنة على جدار الرحم أسفل تقاطع الرحم ، وتجنب الأوعية الدموية. أدخل قناة البيض برفق من ملليمترين إلى ثلاثة ملليمترات من خلال الفتحة الصغيرة.
باستخدام طريقة الحقن المجهري ، تم تحقيق معدل إخصاب بنسبة 89.57٪ في الفئران ، مع تقدم 87.38٪ من البيضة الملقحة إلى مرحلة الجنين المكون من خليتين في غضون 24 ساعة بعد الحقن المجهري. لوحظ معدل ولادة الجراء الأحياء بعد نقل الأجنة عند 42.5٪ لم يكن هناك تذبذب كبير في مستويات الجلوكوز في الدم العشوائية بين الفئران المولودة بشكل طبيعي والفئران المجهرية. ومع ذلك ، أظهرت ذكور الفئران المجهرية باستمرار مستويات مرتفعة من الجلوكوز في الدم أثناء الصيام ، مما يشير إلى ضعف توازن الجلوكوز.
في اختبارات تحمل الجلوكوز ، لوحظت اختلافات كبيرة في مستويات الجلوكوز في الدم بين ذكور الحقن المجهري والفئران الضابطة ، بينما لم يلاحظ أي فرق في إناث الفئران. في تتبع وزن الجسم ، أظهر كل من الفئران من الذكور والإناث في الحقن المجهري نمطا ظاهريا زائدا للوزن مقارنة بالضوابط.
