بعد زراعة الخلايا البطانية في صفيحة البئر 96 ، قم بإزالتها من الحاضنة وتأكيد الالتقاء باستخدام مجهر مقلوب. حرك اللوحة في الحوض لإزالة الوسائط الكاملة ، وامسح الجزء العلوي من اللوحة بمنشفة ورقية. أضف المخزن المؤقت لمقايسة HBSS HEPES بالإضافة إلى محلول البروبينسيد إلى خزان مذيب ماصة متعدد القنوات سعة 50 ملليلتر.
باستخدام ماصة متعددة القنوات ، أضف 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت للفحص إلى كل بئر واترك الخلايا تجلس لمدة خمس دقائق. ثم قم بنفض الغبار عن اللوحة لإزالة المخزن المؤقت للفحص. أضف مخزن مؤقت للتنزيل إلى خزان مذيب ماصة منفصل متعدد القنوات سعة 50 ملليلتر.
باستخدام ماصة متعددة القنوات ، أضف 50 ميكرولترا من المخزن المؤقت لتحميل الصبغة إلى كل بئر من لوحة الفحص. احتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 45 دقيقة. بعد الحضانة ، راقب اللوحة تحت المجهر الفلوري لتأكيد امتصاص الصبغة.
حرك اللوحة لإزالة محلول الصبغة. اغسل الخلايا مرتين باستخدام 50 ميكرولترا من المخزن المؤقت لفحص HBSS HEPES بالإضافة إلى محلول البروبينسيد في كل بئر. حرك اللوحة لإزالة المخزن المؤقت للفحص.
أضف 92 ميكرولترا من المخزن المؤقت لفحص HBSS HEPES إلى كل بئر ، ومرة أخرى ، اعرض الخلايا باستخدام مجهر مضان لضمان إزالة الصبغة الزائدة بالكامل وأن الخلايا تظل ملتصقة. باستخدام ماصة متعددة القنوات ، أضف ميكرولتر من المحاليل المضادة والمركبة إلى الآبار المناسبة. بعد تشغيل قارئ اللوحة ، اضبط درجة الحرارة على 37 درجة مئوية واحتضان اللوحة لمدة 15 دقيقة.
قم بقياس مضان الخلفية في العمودين الأول والثاني ، وقم بإجراء خمس عمليات مسح لكل بئر. أخرج اللوحة من قارئ اللوحة ، ثم من شريط PCR المكون من 8 أنابيب ، وأضف بسرعة ستة ميكرولترات من محلول ناهض باستخدام ماصة متعددة القنوات لكل بئر في العمودين الأول والثاني. قم بقياس التغير في التألق حيث يحدث تحرك الكالسيوم في الخلايا.
قم بإجراء 20 عملية مسح لكل بئر. أظهر فحص تعبئة الكالسيوم مع الخلايا البطانية أن آبار التحكم الإيجابية التي لا تحتوي على مضادات أظهرت زيادة سريعة في التألق. أظهرت الآبار ذات التركيزات العالية من المضادات تغيرا طفيفا في التألق ، على غرار آبار التحكم السلبي التي لا تحتوي على ناهض.
