معالجة مزارع الإشريكية القولونية باستخدام ثيوفين سلفوناميدات لتقييم قمع استشعار النصاب

للبدء ، احصل على مرق Lysogeny أو وسط LB وأضف المضادات الحيوية إلى الوسط. Aliquot خمسة ملليلتر من الوسط في أنابيب اختبار معقمة مع أغطية. قم بتلقيح الوسائط بسلالات الإشريكية القولونية التي تعبر عن البلازميدات المأخوذة من مخزون المجمد واحتضان الثقافة في شاكر طوال الليل.

بعد ذلك ، قم بإعداد محلول سلفوناميد ثيوفين 10 مللي مولار في DMSO ودوامة لخلطها جيدا. تمييع الظهر الثقافات 1 إلى 100 مرة في 10 ملليلتر من الوسائط التي اتخذت في أنابيب مخروطية 15 ملليلتر. دوامة لفترة وجيزة لخلط.

أضف الثقافات إلى الآبار المناسبة للوحة 96 بئرا. بعد الخلط ، قم بإعداد سلسلة تخفيف من الصفوف A إلى E ، مع نقل 50 ميكرولترا من المحلول في كل مرة. غطي اللوحة بشريط صغير يسهل اختراقه واحتضانه.

بعد إزالة الشريط ، باستخدام قارئ لوحة ، اقرأ الكثافة البصرية عند 600 نانومتر GFP و mCherry. أخيرا ، قم بتسجيل البيانات ورسمها على أنها مضان طبيعي لكل خلية. وتشير البيانات المتعلقة بمركبات السلفوناميد 3-ثيوفين إلى أن المركبين 1A و3B كان كل منهما مثبطا ل LuxR/HapR بدرجات مختلفة، في حين أن 2B لم يكن له أي نشاط.