إعداد كرويات 3D Coculture تحاكي البنكرياس سرطان الغدة الأقنية Desmoplasia لاختبار العلاج

للبدء ، احصل على زراعة خلايا PANC-1 واغسل الخلايا بتسعة ملليلتر من محلول ملح هانك المتوازن بزيادات ثلاث ملليلترات. احتضان الخلايا مع ملليلتر من التربسين لمدة 10 دقائق. لتحييد التعليق ، أضف ثلاثة ملليلتر من DMEM مع 10٪ FBS.

بعد غسل الخلايا سبع مرات بزيادات وسائط ملليلتر واحدة ، اجمع كل قسمة محايدة في أنبوب سعة 15 ملليلتر. وبالمثل ، احصل على الخلايا النجمية البنكرياسية البشرية التربسينية ، أو HPaSteC ، باستخدام محلول تحييد التربسين ووسائط الخلايا النجمية. امزج الكمية المطلوبة من كل من معلقات الخلايا في 11 ملليلتر من DMEM مع 10٪ FBS لتجنب تكوين الزبد.

قم بتوزيع 100 ميكرولتر من مزيج تعليق الخلايا برفق في طبق المزرعة واحتضانه عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون. في اليوم الثالث ، أضف 50 ميكرولترا من DMEM مع 10٪ FBS إلى كل بئر على طول جانب البئر. في اليوم 10 أو 11 ، قم باستنشاق الوسائط المستهلكة دون إزعاج المحلول بالقرب من الهالة وأضف 100 ميكرولتر من الوسائط الطازجة على طول جانب كل بئر.

في اليوم 14 أو 17 ، باستخدام ماصة ملليلتر واحد ، قم بإزالة الوسائط من كل بئر حتى يتم الوصول إلى الهالة. قم بمحاذاة اللوحة على خلفية الغطاء لتحديد موقع الأجسام الكروية في الأسفل. ماصة بلطف حوالي 50 ميكرولتر من الوسائط بالقرب من الأجسام الكروية لإزعاجها للتجميع.

تم العثور على الكرويات التي تم الحصول عليها في اليوم 14 لتنمو إلى متوسط حجم 0.048 ملليمتر مكعب.