للبدء ، ضع الماوس الرحيم في وضع ضعيف على المقعد النظيف. قطع على طول خط الوسط من بطن الفأر وفصل هياكل البطن طبقة بطبقة. باستخدام ملاقط ، افتح بلطف الثرب والمعدة الأكبر.
ثم اسحب الطحال برفق مع الرباط المعدي الطحال وافصله بصراحة عن الأنسجة والأربطة المحيطة للحصول على طحال سليم. ضع مرشح خلية 70 ميكرون في طبق مزرعة معقم 100 ملم. أضف الطحال إلى مصفاة الخلية وسحقها بمكبس حقنة.
أضف خمسة إلى ثمانية ملليلتر من سائل التنظيف المتجانس لدفع الخلايا الطحالية عبر المرشح إلى طبق الاستزراع. قم بطرد مركزي للمرشح عند 450 جم لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة وتخلص من المادة الطافية. أعد تعليق الحبيبات باستخدام مخفف العينة المزود بمجموعة فصل الخلايا الليمفاوية.
بعد عد الخلايا على مقياس الدم ، اضبط تركيز الخلية على 2 × 10 إلى قوة ثماني خلايا لكل ملليلتر. في أنبوب الطرد المركزي ، خذ نفس الكمية من محلول فصل الخلايا الليمفاوية مثل تعليق الخلية المفردة للأنسجة. ماصة بعناية تعليق الخلية الواحدة على سطح محلول فصل الخلايا الليمفاوية وأجهزة الطرد المركزي عند 800 جرام لمدة 30 دقيقة عند 25 درجة مئوية.
بعد الطرد المركزي ، لاحظ الطبقات الأربع في الأنبوب من أعلى إلى أسفل. باستخدام ماصة ، ارسم بعناية طبقة الخلايا الليمفاوية البيضاء اللبنية الحلقية في أنبوب آخر. أضف 10 ملليلتر من محلول التنظيف إلى الأنبوب لخلط الخلايا.
أجهزة الطرد المركزي تعليق الخلية في 250g لمدة خمس دقائق. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات في 10 ملليلتر من وسط RPMI 1640 لعد الخلايا.