تنقية وتحليل خلايا الفئران الساذجة CD4 ⁺ T باستخدام الاختيار السلبي القائم على الخرز المغناطيسي

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

300 Views

•

02:16 min

•

October 25th, 2024

DOI :

10.3791/201961-v

October 25th, 2024

•

Haofei Wang*¹, Xu Liu*¹, Wei Huang¹, Xiaojing Wu¹, Ying Tang¹, Mingzhu Zheng¹^,², Haibo Qiu¹, Yingzi Huang¹

¹Jiangsu Provincial Key Laboratory of Critical Care Medicine, Department of Critical Care Medicine, Zhongda Hospital, School of Medicine, Southeast University, ²Department of Pathogenic Biology and Immunology, Jiangsu Provincial Key Laboratory of Critical Care Medicine, School of Medicine, Southeast University

* These authors contributed equally

Transcript

للبدء ، قم بإعداد تعليق وحيد الخلية الطحال للفأر مع واحد في 10 أس ثماني خلايا لكل مليلتر بحجم 0.1 إلى 2 ملليلتر. أضف 50 ميكرولتر من مصل الفئران إلى العينة. انقل العينة إلى أنبوب دائري القاع من البوليسترين سعة خمسة ملليلترات.

أضف 50 ميكرولترا من كوكتيل العزل إلى العينة. تخلط جيدا وتحتضن لمدة 7.5 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. أضف الآن 50 ميكرولتر لكل ملليلتر من كوكتيل النضوب.

تخلط جيدا وتحتضن لمدة 2.5 دقيقة. وفي الوقت نفسه ، دوامة الخرز المغناطيسي لضمان التشتت حتى. أضف 75 ميكرولترا من الخرز المغناطيسي إلى العينة.

تخلط جيدا وتحتضن لمدة 2.5 دقيقة. قم بتعبئة العينة باستخدام RPMI 1640 متوسط إلى حجم نهائي يبلغ 2.5 ملليلتر واخلطه عدة مرات. ثم ضع الأنبوب في المغناطيس لمدة 2.5 دقيقة.

التقط المغناطيس واقلبه بالأنبوب بحركة واحدة مستمرة ، صب تعليق الخلية المخصب في أنبوب جديد. تحديد رقم الخلية باستخدام مقياس الدم. إجراء تحليل التدفق الخلوي للخلايا التائية الساذجة CD الأربعة الإيجابية قبل وبعد العزل.

بعد البوابات ، انقل تعليق الخلية إلى أنبوب طرد مركزي جديد. أجهزة الطرد المركزي في 400G لمدة خمس دقائق وتجاهل طاف. أعد تعليق الحبيبات في 200 إلى 500 ميكرولتر من متوسط RPMI 1640 المكمل ب 10٪ FBS.

لكل ملليلتر واحد من ثقافة الخلايا ، أضف اثنين ميكرولتر من كوكتيل تنشيط الكريات البيض واخلطها. استزرع الخلايا في حاضنة ثاني أكسيد الكربون عند 37 درجة مئوية مع رطوبة مشبعة لمدة أربع إلى ست ساعات.

Explore More Videos

From the series

تمايز الخلايا Th17 من الخلايا التائية CD4 ⁺ الساذجة باستخدام قياس التدفق الخلوي