التحسين والانتشار في الجسم الحي لخلايا CellTrace Far Red (CT-FR) الملطخة بالزرد T-ALL

للبدء ، اجمع مرة واحدة 10 إلى قوة ستة أسماك الزرد ذات العلامات الفلورية ، خلايا T-ALL في أنابيب الطرد المركزي الدقيقة 1.5 ملليلتر. أجهزة الطرد المركزي الخلايا عند 2،500 G لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية وإعادة تعليق الحبيبات في ملليلتر واحد من 0.9 XPBS. ضع 250 ميكرولترا من تعليق الخلية في أنبوب طرد مركزي دقيق.

ثم أضف 250 ميكرولترا من 0.9 XPBS لرفع مستوى الصوت إلى 500 ميكرولتر. أضف الحجم المطلوب من محلول مخزون الصبغة CT-FR واحتضانه لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية ، للحماية من الضوء. أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 2،500 غرام لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.

أضف 500 ميكرولتر من وسائط الأسماك لإزالة الصبغة الزائدة وأجهزة الطرد المركزي مرة أخرى قبل تعليق الحبيبات في 25 ميكرولتر من وسائط الأسماك. تلطيخ الخلايا مع تريبان الأزرق وفحصها تحت المجهر للتأكد من صلاحيتها. باستخدام تركيز CT-FR الأمثل ، قم بتلطيخ خلايا الزرد وترك بعض الخلايا السرطانية غير ملوثة.

باستخدام حقنة هاملتون الدقيقة ، قم بحقن خمسة ميكرولترات من تعليق الخلايا الملطخة وغير الملوثة في التجويف داخل الصفاق لسمك الزرد المخدر.