فحص هجرة جرح الخدش للخلايا البطانية الوريدية السرية البشرية (HUVECs) للتحقيق في تكوين الأوعية في المختبر

للبدء ، قم بزرع 100 ميكرولتر من خلايا HUVEC في آبار صفيحة بئر 96. ضع اللوحة في حاضنة زراعة الخلايا عند 37 درجة مئوية تحت 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ست ساعات لتسهيل استقرار الخلايا. بعد ذلك ، استبدل الوسط في كل بئر ب 100 ميكرولتر من الوسط القاعدي لنمو الخلايا البطانية ، يحتوي على 2٪ FBS ، واحتضانه مرة أخرى.

في اليوم التالي ، ضع اللوحة في أداة صنع الجروح 96 بئرا. اضغط لأسفل على ذراع الجهاز لإحداث خدش. ارفع غطاء أداة صانع الجروح بعناية قبل تحرير الرافعة لمنع الخدش المزدوج.

اغسل الآبار مرتين ب 200 ميكرولتر من الوسط القاعدي لنمو الخلايا البطانية المكمل ب FBS. بعد التأكد من إزالة الحطام بالكامل ، ماصة 100 ميكرولتر من حلول التحفيز أو التحكم المعدة في كل بئر. استخدم مجهر التصوير بالخلايا الحية للحصول على صور كل ساعة لمدة 24 ساعة.

أظهر التحكم الإيجابي ترحيلا ناجحا في المنطقة الأصلية المخدوشة. كان ينظر إلى المشكلات الفنية على أنها نمو غير مكتمل للخلايا أو خدش مزدوج أو موجات في حدود الخدش. واعتبرت الزيادة بنسبة 25٪ في مسافة الجرح النسبية هي الأمثل.

يشير الفصل غير الصحيح بين عناصر التحكم الإيجابية والسلبية إلى نطاق ديناميكي منخفض.