التنميط الجيني في نفس اليوم لأجنة الفئران المعزولة

بعد عزل كيس الصفار الحشوي من جنين الفأر ، تابع هضم كل كيس صفار في تفاعل بوليميراز متسلسل من ثمانية شرائط أو أنبوب PCR. باستخدام ماصة P20 ، أضف 19.3 ميكرولترا من محلول تحلل الحمض النووي لقالب PCR ، و 0.7 ميكرولتر من 0.2 ميكروغرام لكل مليلتر بروتيناز K لكل عينة كيس صفار. دوامة العينة لمدة 10 ثوان.

وباستخدام جهاز طرد مركزي صغير مع محول شريطي ، قم بتدوير العينات عند 1000 جرام لمدة 10 ثوان. ضع أنبوب PCR المكون من ثمانية شرائط في كتلة حرارة 85 درجة مئوية لمدة 45 دقيقة أثناء الدوامة لمدة خمس ثوان كل خمس دقائق. بعد 45 دقيقة ، قم بتدوير شريط الأنبوب لأسفل مرة أخرى عند 1000 جم لمدة 10 ثوان قبل متابعة تفاعل البوليميراز المتسلسل لتحديد الهوية الجينية المطلوبة.

لإجراء تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل للتنميط الجيني Cre ، قم بإعداد مزيج رئيسي ل PCR يحتوي على المكونات المعروضة لكل أنبوب PCR بثمانية شرائط لكل كيس صفار. تابع تشغيل برنامج تضخيم الدورة الحرارية PCR باستخدام الدورة المعروضة. ثم قم بتشغيل منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل على جل أغاروز 1٪ لاستخلاص استنتاجات التنميط الجيني.

قم بتخزين عينات كيس الصفار المهضومة المتبقية في مجمد بدرجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر للتخزين طويل الأجل. عندما تم فصل منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل على هلام الأغاروز ، شوهدت أحجام الشظايا المتوقعة ل LoxP والأليلات من النوع البري ، بالإضافة إلى أليل Cre.