للبدء ، ضع قيثارة بلاتينية في قارب وزن بالقرب من منصة MEA. ثم قم بتغطية القيثارة بحوالي ثلاثة ملليلتر من aCSF لتقليل ميولها الكارهة للماء. استخدم المقص لتقليم حوالي 1.5 بوصة من الطرف الضيق لماصة النقل.
بعد ذلك ، استخدم الماصة المعدلة لجمع شريحة دماغية من غرفة الاحتفاظ بالشريحة. قم بتوزيع شريحة الدماغ وأي محلول في الماصة برفق في بئر الشريحة. لوضع الشريحة بشكل صحيح ، استخدم فرشاة رسم ناعمة لإنشاء تيار في المحلول يدفع شريحة الدماغ إلى أقطاب التسجيل.
باستخدام الملقط ، ضع القيثارة برفق فوق شريحة الدماغ مع الخيوط لأسفل للضغط على الشريحة على أقطاب التسجيل. قم بتوجيه القيثارة بحيث يكون الجانب بدون إطار متجها نحو إبرة التدفق ولا يتصل إطار القيثارة بأي من أقطاب التسجيل. الآن خذ ماصة تجاهل وإزالة aCSF الزائدة.
ثم خذ منديلا مضادا للكهرباء الساكنة ، وقم بلف زاوية لإنشاء طرف ، واستخدمه لامتصاص السائل الدماغي النخاعي المتبقي المحيط بأقطاب التسجيل دون لمس أقطاب التسجيل أو شريحة الدماغ أو القيثارة. باستخدام ماصة aCSF معينة ، أضف بسرعة حوالي ملليلتر من aCSF الكربوجيني لتغطية شريحة الدماغ. املأ البئر بحوالي ثلاثة ملليلتر من aCSF المكرب حتى تمتلئ ثلاثة أرباع تقريبا.
ثم استخدم مجهرا أو كاميرا لالتقاط صورة عالية الدقة لشريحة الدماغ على شريحة MEA. ضع أنابيب التدفق الداخلة والخارجة في دورق مملوء ب aCSF. ضع إبرة التدفق بالقرب من قاع بئر الشريحة ، خارج أقطاب التسجيل مباشرة.
ثم ضع إبرة التدفق الخارجي بالقرب من الجزء العلوي من بئر الرقاقة ، باتجاه الحافة ، بحيث يرتفع السائل تقريبا إلى حافة بئر الرقاقة ، حوالي أربعة ملليلتر. الآن اضبط تدفق التروية على خمسة ملليلترات في الدقيقة وتدفق التروية إلى سبعة ملليلتر في الدقيقة. قم بتشغيل التدفق الداخل والخارج.
قم بإزالة إبرة التدفق من بئر الشريحة حتى تبدأ في إخراج المحلول بدلا من الهواء. بعد ذلك ، ضع الإبرة مرة أخرى داخل الشريحة جيدا. ثم استخدم سخان المحلول للحفاظ على المحلول عند درجة الحرارة الفسيولوجية أو بالقرب منها ، حوالي 34 إلى 37 درجة مئوية.
دع السائل الدماغي الشوكي يتدفق على شريحة الدماغ لمدة 10 دقائق. بعد انقضاء 10 دقائق ، حرك أنبوب التدفق إلى الدورق المهمل. ثم حرك أنبوب التدفق إلى الكأس الزجاجية التي تحتوي على المحلول المؤيد للاختلاج.
اسمح ل aCSF غير المتشنج بإخراجه من نظام التروية إلى الدورق المهمل لمدة 10 دقائق. وأخيرا، انقل أنبوب التدفق إلى الكأس الزجاجية التي تحتوي على المحلول المؤيد للاختلاج واتركه يدور حتى تنتهي التجربة. لوحظ نشاط قوي يشبه النوبات الكهربية بشكل متكرر في مناطق القشرة المخية الحديثة تحت كل من نماذج المغنيسيوم الصفرية و 4-aminopyridine.
أظهرت مناطق الحصين تباينا أكبر بين شرائح الدماغ ، حيث أظهر بعضها نشاطا يشبه النوبات والبعض الآخر يظهر إفرازات عابرة. أظهر نشاط القشرة المخية الحديثة في ظل نموذج المغنيسيوم الصفري طاقة أعلى في نطاقات تردد متعددة مقارنة بنموذج 4-aminopyridine. أظهر نشاط الحصين في نموذج المغنيسيوم الصفري قوة أعلى في نطاقات تردد جاما العالية مقارنة بالقشرة المخية الحديثة وكلا منطقتي الدماغ في نموذج 4-aminopyridine.
