للبدء ، احصل على حمض الفوليك أو الأعلاف التي تعاني من نقص الكولين من مصنعي أغذية القوارض التجارية. يحتوي النظام الغذائي الخاص على 0.3 ملليغرام لكل كيلوغرام من حمض الفوليك ، أو 300 ملليغرام لكل كيلوغرام من الكولين بواسطة طرطرات. الحفاظ على أنثى الفأر على هذا النظام الغذائي الخاص لمدة أربعة إلى ستة أسابيع.
في وقت لاحق ، عندما يتم فطام النسل من الأم ، ضعه على نظام غذائي يعاني من نقص حمض الفوليك أو الكولين بالإضافة إلى نظام غذائي للسيطرة. بعد القتل الرحيم للنسل ، اجمع عينة الدم وأنسجة الكبد للتحليل الكيميائي الحيوي. أضف الدم إلى أنبوب مغلف ب EDTA وطرد مركزي الأنبوب لعزل بلازما الدم لتحديد تركيز مستقلبات الكربون الواحد.
بعد ذلك ، انقل عينات أنسجة الكبد المقطوعة إلى أنبوب تخزين بالتبريد للتجميد المفاجئ. لم تظهر الأوزان الأساسية والأسبوعية لإناث الفئران على الوجبات الغذائية الضابطة أو الكولين أو التي تعاني من نقص حمض الفوليك خلال الأسابيع الأربعة التي سبقت التزاوج أي فرق كبير. كانت تركيزات مستقلب الكربون الواحد للأمهات منخفضة قليلا في بلازما الفئران الخاضعة لنظام غذائي يعاني من نقص حمض الفوليك مقارنة بالفئران الضابطة.