إزالة الخلايا الميتة من الورم المنفصل لتسلسل الخلية الواحدة

للبدء ، احصل على عينة أنسجة الورم المهضومة وقمل خلايا الدم الحمراء. أجهزة الطرد المركزي العينة عند 450G لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. بعد إزالة الوسائط ، أعد تعليق الحبيبات في ملليلتر واحد من وسائط العزل.

بعد تكرار الطرد المركزي ، أعد تعليق الحبيبات في 100 ميكرولتر من وسائط العزل. انقل 100 ميكرولتر من العينة إلى بئر أنبوب شريط PCR سعة 0.2 ملليلتر. في غطاء السلامة الحيوية ، أضف 10 ميكرولتر من كل من كوكتيل الملحق V وكوكتيل اختيار البيوتين إلى العينة.

ماصة خلط الحل واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة أربع دقائق. بعد ذلك ، دوامة الجسيمات المغناطيسية المغلفة ديكستران لمدة 30 ثانية. امزج 20 ميكرولترا من الخرز و 60 ميكرولترا من وسائط العزل مع العينة.

بعد ثلاث دقائق ، ضع الأنبوب الشريطي على فاصل مغناطيسي 10x Genomics على الإعداد العالي لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم انقل السائل من أنبوب الشريط دون إزعاج الخرز إلى أنبوب طرد مركزي صغير جديد منخفض الارتباط سعة 1.5 ملليلتر. قم بطرد الأنبوب كما هو موضح سابقا ، وأعد تعليق الحبيبات في حجم مناسب من وسائط PMI الخاصة بنا بناء على حجم الحبيبات.

أخيرا ، عد الخلايا في مقياس الدم. بعد إزالة الخلايا الميتة ، كان عدد الخلايا الحية 4.9 في 10 أس 5 لكل ملليلتر ، مع صلاحية أعلى من 90٪