تلطيخ الزيت الأحمر O لتصور تراكم قطرات الدهون داخل الخلايا في خلايا HepG2

لبدء زراعة البذور المزروعة بين عشية وضحاها من Hep G2 في DMEM في ستة آبار صفيحة. زراعة الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. بعد الحضانة ، أضف ملليلترين من وسط زراعة الخلايا الذي يحتوي على حمض الأوليك إلى كل بئر.

احتضان الخلايا لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية. في اليوم التالي ، قم بإزالة وسط الثقافة وغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS. أضف ملليلترا واحدا من الزيت الأحمر O مثبت إلى كل بئر واحتضنه لمدة 30 دقيقة.

تخلص من المثبت واغسل الخلايا مرتين بالماء المقطر. أضف ملليلتر واحد من 60٪ من الأيزوبروبانول إلى كل بئر واحتضنه لمدة 30 ثانية. بعد التخلص من الأيزوبروبانول ، أضف ملليلترا واحدا من محلول البقع الأحمر الطازج واحتضنه لمدة 20 دقيقة.

الآن ، أضف ملليلتر واحد من 60٪ من الأيزوبروبانول واحتضنه لمدة 30 ثانية. اغسل الخلايا خمس مرات بالماء لإزالة الصبغة الزائدة. بعد التصوير المجهري ، راقب الخلايا المغطاة بالماء المقطر على جهاز الكمبيوتر.

بعد التصوير ، أخرج الماء من الطبق واتركه حتى يجف. أضف ملليلترين من الأيزوبروبانول إلى كل بئر ورج الطبق على شاكر مداري لمدة 10 دقائق. انقل 100 ميكرولتر من تعليق الخلية إلى صفيحة 96 بئر مع 16 بئرا في كل مجموعة.

على قارئ الصفيحة الدقيقة عند 510 نانومتر ، قم بقياس الكثافة الضوئية لحساب محتوى الدهون. بالمقارنة مع الخلايا الضابطة ، أظهرت خلايا Hep G2 المعالجة بحمض الأوليك زيادة في كثافة التلوين الأحمر ، مما يشير إلى تكوين قطرات دهنية أعلى. زادت قطرات الدهون والدهون في خلايا Hep G2 مع ارتفاع تركيزات حمض الأوليك.