تأثير تركيزات حمض الأوليك على إجمالي مستويات الدهون الثلاثية في طاف الخلايا HepG2

للبدء ، قم بموازنة مجموعة الدهون الثلاثية الكلية في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة. اجمع المادة الطافية لخلايا Hep G2 المزروعة بين عشية وضحاها وأجهزة الطرد المركزي عند 1،570 جم لمدة 10 دقائق. تعيين معيار واختبار عينات الآبار.

أضف 50 ميكرولترا من حمض الأوليك إلى الآبار القياسية المصنفة. بالإضافة إلى الآبار الفارغة والقياسية ، أضف 10 ميكرولتر من زراعة الخلايا إلى آبار العينات. ثم أضف 40 ميكرولترا من عينة مخففة إلى كل بئر.

أضف الآن 100 ميكرولتر من الأجسام المضادة للكشف ، بيروكسيداز فجل الحصان إلى كل بئر. ختم بغشاء صفيحة واحتضانه عند 37 درجة مئوية في فرن بدرجة حرارة ثابتة. بعد ساعة واحدة ، تخلص من المادة الطافية وجففها على ورق خال من الغبار.

أضف محلول الغسيل إلى كل بئر واحتضنه في درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقة واحدة. الآن ، أضف 50 ميكرولترا من الركيزة A و 50 ميكرولترا من الركيزة B إلى كل بئر. تخلط بلطف وتحتضن لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية.

أضف 50 ميكرولترا من محلول الإنهاء ، وفي غضون 15 دقيقة ، قم بقياس الكثافة الضوئية عند 450 نانومتر. ارسم تركيز المعيار على طول المحور x وقيمة الامتصاص المقابلة على طول المحور Y. إجراء الانحدار الخطي واستخلاص معادلة المنحنى لحساب قيمة تركيز كل عينة.

بالمقارنة مع المجموعة الضابطة ، أدت معالجة خلايا Hep G2 بتركيزات متفاوتة من حمض الأوليك إلى زيادة كبيرة في إجمالي محتوى الدهون الثلاثية في الطاف الطافي للخلية.