للبدء ، ضع الكولاجين ، وهيدروكسيد الصوديوم ، والماء المعقم عالي النقاء ، و 10 مرات PBS ، وأنبوب طرد مركزي دقيق واحد ، وحمض الهيالورونيك الميثاكريليت ، وبادئ الصورة على الجليد. ثم ضع إدخالات ثقافة الأنسجة في اللوحة وقم بتسميتها لتحضير ثلاثة ملليغرام لكل مليلتر من محلول الكولاجين ، امزج بين الكولاجين عالي التركيز ، وهيدروكسيد الصوديوم العادي ، والماء عالي النقاء ، و 10 مرات PBS.
أضف مكونات إلى أنبوب الطرد المركزي الدقيق وحافظ على طرف الماصة مغمورا عند الخلط لمنع تكوين الفقاعات. بعد ذلك ، خلايا الطرد المركزي عند 200 جم لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم قم بإزالة الوسائط الزائدة برفق من أعلى كل محلول حالة خلية، مع ترك حجم الوسائط المطلوبة للحالة.
ضع هذه الحلول على الجليد. أضف الحجم المحسوب لمحلول الكولاجين إلى كل محلول حالة خلية. بعد ذلك ، أضف الحجم المحسوب لحمض الهيالورونيك الميثاكريلاتي 1٪ ، متبوعا ب 17 ملليغرام لكل مليلتر LAP في كل محلول حالة خلية.
امزج كل أنبوب حالة واحدا تلو الآخر مع الحفاظ على طرف الماصة مغمورا لتجنب تكوين الفقاعات وأضف 100 إلى 150 ميكرولتر إلى كل إدخال لزراعة الأنسجة. الآن قم بتشغيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية 385 نانومتر بتيار مستمر. لربط كل هلام بالصور ، قم بتعريض كل بئر للأشعة فوق البنفسجية لمدة 45 ثانية ، واحدة تلو الأخرى.
ثم ضع اللوحة على حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 إلى 45 دقيقة لربط الكولاجين. باستخدام وسط قاعدي نجمي بنسبة 0.5٪ وحجمين بالحجم و 1٪ حجم B27 بدون فيتامين أ ، ضع رأس ضغط السائل على المواد الهلامية. أضف وسائط إلى لوحة البئر وإدخالات زراعة الأنسجة لصافي التدفق الصفري.
ضع الطبق على حرارة 37 درجة مئوية ، 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 18 ساعة على الأقل أو حتى خمسة أيام.
