قياس التدفق الخلوي لخلايا نخاع عظم الفأر الملطخة ب Hoechst للكشف الفعال عن السكان الجانبيين باستخدام ليزر عالي الطاقة 375 نانومتر و 405 نانومتر

للبدء ، قم بتلطيخ خلايا نخاع عظم الفئران باستخدام Hoechst 33342. بالنسبة لقياس التدفق الخلوي ، قم بتشغيل البرنامج المطلوب ، ثم حدد توحيد مراقبة الجودة. أدخل مراقبة الجودة أو أنبوب عينة QC FluoroSphere في حامل الأنبوب قبل تحديد البدء لبدء إجراء مراقبة الجودة.

لإنشاء تجربة جديدة ، انقر فوق تجربة جديدة في قائمة ملف وحدد مسار الملف واحفظ التجربة. ثم حدد تعيين القناة في قائمة الإعدادات. حدد خانة اختيار إشارة القناة، وأضف اسم الكاشف في عمود التسمية.

بعد ذلك ، انقر فوق أيقونة مخططات الألوان الزائفة في منطقة المؤامرة لإنشاء المؤامات. انقر فوق إضافة أنبوب في شاشة أنبوب الاختبار لإنشاء أنابيب عينة جديدة وتغيير أسمائها. ثم حدد تشغيل لتحميل العينة وعرض المخططات وإنشاء البوابات.

اضبط إعدادات الكسب والحد وحدد تسجيل لحفظ البيانات. لتصميم منطق إعداد البوابة، انقر فوق المحور x لتحديد FSEW، وانقر فوق المحور y لتحديد FSEA. حدد Polygon Gate لرسم البوابة A لوضع دائرة حول الخلية الفردية واستبعاد الخلايا الملتصقة.

بالنسبة للمؤامرة الثانية ، انقر فوق المحور x لتحديد FSEA ، وانقر فوق المحور y لتحديد SSEA. حدد Polygon Gate لرسم البوابة B لفصل الخلايا غير المجزأة واستبعاد الحطام الخلوي. بالنسبة للمؤامرة الثالثة، انقر فوق المحور x لتحديد PIA، وانقر فوق المحور y لتحديد SSEA.

بعد رسم البوابة B ، حدد الخلايا الحية التي تظهر يوديد البروبيديوم السلبي وارسم البوابة C للحصول على الخلايا الحية. بالنسبة للمخطط الرابع ثنائي الأبعاد، انقر فوق المحور x لتحديد Hoechst Red، وانقر فوق المحور y لتحديد Hoechst Blue. انقر بزر الماوس الأيمن فوق المخطط وحدد خاصية من القائمة المنسدلة.

حدد التنسيق الخطي لكل من المحور x والمحور y وارسم البوابة لخلايا السكان الجانبية. استخدم ليزر 355 نانومتر و 405 نانومتر في وقت واحد للكشف عن كل من خلايا التحكم والخلايا التجريبية. الحصول على إشارات الفلورسنت عند القنوات 690 × 50 و 450 × 50 نانومتر المقابلة لليزرين.

راقب التحفيز الفعال لصبغة Hoechst 33342 باستخدام ليزر 355 و 405 نانومتر لتصور الخلايا السكانية الجانبية الواضحة. بالنسبة لنفس العينات ، استخدم ليزر 375 نانومتر و 405 نانومتر للكشف عن الخلايا. أثار الليزر 355 نانومتر صبغة Hoechst 33342 بشكل فعال ، مما أدى إلى ملاحظة واضحة لخلايا SP لنخاع العظام.

تم العثور على خلايا SP لنفس العينات التي تم اكتشافها بواسطة الليزر 355 نانومتر والليزر 405 نانومتر متطابقة بشكل أساسي. أثار كل من الليزر 375 نانومتر و 405 نانومتر بشكل فعال Hoechst 33342 للحصول على خلايا SP.