عزل الخلايا الظهارية لسطح المبيض الأولي البشري للحصول على العضيات لدراسات الأنسجة في المختبر

للبدء ، انقل المبايض البشرية إلى المختبر في كلوريد الصوديوم 0.9٪ ، أو محلول ملحي معقم مماثل على الجليد. اشطف المبايض بمحلول ملحي طازج وبارد في طبق بتري. انقل كل مبيض إلى أنبوب مخروطي سعة 50 مليلتر ، وأضف ملليلترتين إلى ثلاثة ملليلترات من وسط الهضم لتغطية المبيض.

ضع الأنبوب في حمام من الخرز ، خفف على حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. ثم انقل المبيض بعناية إلى طبق بتري مقاس 60 ملم يحتوي على 10 مل من وسط التجميع. باستخدام مكشطة الخلية ، قم بجرجير سطح المبيض الذي يحتوي على الخلايا الظهارية لسطح المبيض البشري برفق.

اغسل الكاشطة في الوسط قبل الكشط مرتين أخريين على الأقل. انقل الخلايا الظهارية لسطح المبيض البشري في وسط التجميع إلى أنبوب سعة 15 مل. قم بتدوير الخلايا عند 240 جم لمدة خمس دقائق.

إذا أظهرت الحبيبات لونا أحمر يدل على التلوث بخلايا الدم الحمراء, أعد تعليق الحبيبات في مليلتر واحد من المخزن المؤقت لتحلل خلايا الدم الحمراء. ثم أضف أربعة ملليلتر من PBS مع الكالسيوم والمغنيسيوم ، وجهاز الطرد المركزي عند 240 جم لمدة خمس دقائق. الحفاظ على حبيبات الخلايا الظهارية لسطح المبيض البشري بالتبريد لاستخدامها في المستقبل.