للبدء ، خذ عيون الخنازير الموضوعة في دورق سعة لتر واحد. امسك مقلة العين بالملاقط وقم بإزالة أنسجة العين الزائدة بالمقص في صفيحة بتري معقمة. لجرح الظهارة ، أمسك مقلة العين باستخدام مناديل معقمة خالية من النسالة وقم بتمييز مركز القرنية بتريفين بحجم ستة ملليمترات.
ثم باستخدام مشرط صغير أو شفرة حلاقة ناعمة ذات زاوية ، اكشط الخلايا الظهارية برفق داخل الدائرة التي تحمل علامة تريفين. قم بإزالة جميع بقايا الخلية مع ضمان بقاء الغشاء القاعدي سليما. بعد ذلك ، نظف منطقة الجرح بمسحات قطنية.
باستخدام مشرط ومقص ، قم بتشريح مقلة العين عن طريق القطع على طول حواف القرنية الصلبة. ثم اشطف القرنيات في دورق معقم سعة 500 مل يحتوي على PBS. بعد ذلك ، ضع القرنيات المقطوعة رأسا على عقب في قالب معقم.
املأ تجويف القرنية البطانية بحد أدنى من الوسط الأساسي ، أو MEM ، يحتوي على 1٪ من الاغاروز الذي يتم الحفاظ عليه عند 48 درجة مئوية. الآن ، اقلب القرنيات وانقلها إلى طبق 35 ملم. أضف ملليلترين من MEM مع أو بدون عامل الاختبار بالتنقيط إلى سطح القرنية المركزية ، مما يضمن تغطية منطقة الملتحمة القصوية مع ترك الظهارة معرضة للهواء.
ثم ضع أطباق الاستزراع في حاضنة مرطبة بنسبة 5٪ من ثاني أكسيد الكربون عند 37 درجة مئوية. بعد 40 ساعة من الجرح ، قم بتلطيخ القرنيات المزروعة المصابة بمحلول تلطيخ ريتشاردسون. اغسل القرنيات الملطخة باستخدام PBS قبل تصويرها.
ثم استخدم نفس حجم التريفين لتمييز الجرح الأصلي ، وباستخدام مشرط صغير ، اكشط الخلايا الظهارية داخل الدوائر المحددة. قم بإزالة الخلايا المجمعة ونقلها إلى أنبوب طرد مركزي مبرد مسبقا. كانت مساحة الجرح المتبقية أكبر بشكل ملحوظ في القرنيات المعالجة بالنيبافيناك 0.1٪ مقارنة بتلك التي عولجت بالبرومفيناك 0.09٪ والكيتورولاك 0.45٪ أظهرت القرنيات المعالجة ب LL-37 عند 0.2 و 0.5 ميكروغرام لكل مليلتر تسارعا بشكل ملحوظ في التئام الجروح في ظل ظروف ارتفاع الجلوكوز مقارنة بالقرنيات غير المعالجة.
