للبدء ، ضع ذبابة الفاكهة السليمة والمتدهورة صور عين الذبابة في نفس المجلد. التأكد من تسمية الملفات بشكل مناسب لتحديد المجموعات التجريبية والتمييز بين الذكور والإناث. افتح برنامج Ilastik.
انقر فوق إنشاء مشروع جديد. ثم من مهام سير العمل الأخرى، حدد حساب كثافة الخلايا وحدد موقعا لحفظ ملف المشروع. بالتسلسل ، انقر فوق 1.
أدخل البيانات وأضف جديدا وأضف صورا منفصلة لاختيار الصورة القياسية. ثم انقر فوق 2. تحديد الميزة وتحديد الميزات.
اختر المزيد من قيم سيجما لزيادة الحساسية. انقر فوق 3. العد وتعيين قيمة سيجما المقدمة إلى 5.00.
باستخدام أداة المقدمة، ضع علامة على 50 أو أكثر من الأوماتيديا الفردية على الصورة القياسية. انقر فوق 3. العد مرة أخرى واستخدم أداة الخلفية لتمييز المنطقة خارج الأوماتيديا.
ارسم خطوطا خضراء في شكل شبكي حول ommatidia. انقر فوق 4. Density Export واختر Export Settings (إعدادات تصدير الصورة) لضبط إعدادات الصورة.
ثم انقر فوق معلومات ملف الإخراج وحدد تنسيق tiff لمزيد من التحليل في Flynotyper. انقر فوق 5. معالجة الدفعات ، وحدد ملفات البيانات الأولية ، وحدد جميع صور الذبابة التجريبية ليتم تحليلها.
تظهر قائمة الصور المستوردة المراد تحليلها ضمن تحديد ملفات البيانات الأولية. انقر فوق معالجة جميع الملفات في الجزء السفلي من 5. قسم معالجة الدفعات.
بعد اكتمال البرنامج للمعالجة ، تحقق من المجلد الذي يحتوي على صور عين الذبابة التجريبية. تأكد من وجود الصور السوداء المسماة ، احتمالات اسم العينة الخاصة بك. في ImageJ، افتح ملف tiff الذي تم إنشاؤه بواسطة Ilastik.
استخدم أداة تحديد المستطيل لعمل مستطيل حول العين. حدد Control X أو Control C لاقتصاص المنطقة وانتظر ظهور مربع أسود على شكل مخطط مستطيل. بالتسلسل، انقر فوق ملف، وجديد، وحافظة داخلية لفتح عين الذبابة المقصوصة.
لحفظ عين الذبابة المقطوعة بتنسيق JPEG ، انقر فوق ملف وحفظ باسم و JPEG. في ImageJ ، انقر فوق الإضافات و Flynotyper. ضمن الأنماط الجينية، حدد إضافة الأنماط الجينية وافتح المجلد الذي يحتوي على صور عين الذبابة المقطوعة.
ضع علامة في المجهر الضوئي والمربعات عموديا. ثم ضمن رتبة Ommatidia بواسطة ، حدد المربعات الاستقرار والمسافة إلى المركز. بالنسبة لعدد ommatidia المصنفة التي تم النظر فيها ، قم بتعيين المدخلات على أنها 200.
انقر فوق تشغيل وانتظر حتى تظهر نتائج التحليل. انسخ والصق نموذج الملف و P-score في برنامج إحصائي لمزيد من التحليل. أظهرت صور العين ذبابة الفاكهة التي تمت معالجتها باستخدام Ilastik وتحليلها تحت ضوء الحلقة أنماطا أوماتيدية أكثر وضوحا مقارنة بتلك التي لا تحتوي على ضوء حلقي مما يعزز التقييم النوعي.
أشار تحليل Flynotyper إلى درجات نمطية أعلى بشكل ملحوظ في عيون الذبابة المتدهورة بشكل معتدل وشديد مقارنة بالعيون غير المتدهورة. عندما لم يتم استخدام Ilastik ، كانت درجات P بين العيون غير المتدهورة والمتدهورة بشكل معتدل متشابهة.
