للبدء ، قم باستئصال كرات العين للفأر القتل الرحيم وقم بتجانس العينين في عازلة مثلجة. الطرد المركزي التجانس عند 16 ، 000 جم لمدة 15 دقيقة عند أربع درجات مئوية. تخلص من المادة الطافية التي تحتوي على بروتينات قابلة للذوبان في الماء والملوثات الأخرى.
ثم قم بإعادة تعليق وحل الغشاء المحبب وبروتينات الغشاء في مخزن مؤقت لمدة ساعة واحدة عند أربع درجات مئوية على منصة دوارة. بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي لجزء الغشاء القابل للذوبان لمدة ساعة واحدة عند 16،000 جم عند أربع درجات مئوية. امزج المادة الطافية مع 30 إلى 50 ميكرولترا من حبات الأجسام المضادة Rho1D4 ، وحبات الأجسام المضادة للجلوبولين المناعي G الفارغة في عينتين مستقلتين منفصلتين واحتضانها لمدة ساعة واحدة عند أربع درجات مئوية على منصة دوارة.
باستخدام حامل مغناطيسي ، افصل المنسدلة عن طريق جمع الخرز. تخلص من المادة الطافية واغسل الخرزات بمحلول ملحي مرتفع ومنخفض يحتوي على بروبان Bis-tris وكلوريد الصوديوم و N-dodecyl-beta-D-maltoside. لتصفية بروتين الرودوبسين ، قم باحتضان الخرزات لمدة خمس إلى 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة باستخدام مخزن مؤقت سعة 65 ميكرولتر من التركيبة المحددة.
ثم باستخدام ذراع كوارتز مستطيل الصغر 50 ميكرولتر بفتحة ملليمترين وطول مسار 10 ملم ، قم بتحليل المصف للامتصاص من 200 نانومتر إلى 800 نانومتر في إعداد مسح سريع باستخدام مقياس الطيف الضوئي. للتحقق من صحة الجودة وتحديدها ، قم بتعريض الشفط للضوء الساطع لمدة دقيقة واحدة. ثم كرر قياس الامتصاص.
اطرح الامتصاص الفارغ واحسب نسبة الأطياف الماصة التي تم تحليلها. ثم ارسم الأطياف الماصة المطروحة الفارغة ، واحسب قيمة opsin الحرة. بعد ذلك ، باستخدام قانون بير لامبرت ، احسب تركيز رودوبسين ، ثم احسب تركيز opsin الخالي من الترابط ، وقم بتقدير الفرق في تركيز apo-opsin ، والأوبسين الخالي من الترابط من حيث الكمية والنسبة المئوية.
