تحضير العينة الفيروسية والمزيج الرئيسي لتفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي لقياس رقم نسخة الجينوم الفيروسي بدقة

لبدء دوامة الفيروس المرتبط ب Adeno أو عينة AAV وأجهزة الطرد المركزي لضمان بقاء كل السائل في قاع الأنبوب. أضف 45 ميكرولترا من محلول يحتوي على DNase I إلى أنبوب شريط أنبوبي رباعي سعة 0.2 ملليلتر. انقل خمسة ميكرولترات من عينة AAV إلى الأنبوب الذي يحتوي على محلول DNase.

بعد الدوامة ، قم بطرد العينة لفترة وجيزة لضمان بقاء كل السائل في القاع. باستخدام جهاز تدوير حراري ، احتضان العينات لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية ، ثم قم بتبريدها إلى أربع درجات مئوية. بعد ذلك ، قم بإعداد التخفيف المناسب لعينة DNase المعالجة في مخزن مؤقت لتخفيف AAV في شريط أنبوب PCR ثمانية جديد 0.2 ملليلتر.

بعد التخفيف التسلسلي ، دوامة العينات وأجهزة الطرد المركزي لضمان بقاء كل السائل في القاع. اجمع بين مسبار البادئات الأمامي والخلفي ddPCR Supermix و DNase's-Free Water بالأحجام المطلوبة. دوامة المزيج الرئيسي وأجهزة الطرد المركزي لفترة وجيزة الأنبوب.

ثم انقل 19.8 ميكرولترا من المزيج الرئيسي إلى كل أنبوب على شريط أنبوب PCR ثمانية سعة 0.2 ملليلتر.