التسلل الزراعي لأوراق النبات لدراسة توطين البروتين البلازموديزمي

للبدء ، قم بزراعة بذور Nicotiana benthamiana في تربة رطبة داخل غرفة بيئة خاضعة للرقابة عند 23 درجة مئوية ، مع الحفاظ على 16 ساعة من الضوء ، تليها ثماني ساعات من الظلام. بعد نقل الشتلات البالغة من العمر أسبوعين إلى أواني أكبر ، قم بزراعة النباتات في نفس الظروف لمدة أربعة إلى خمسة أسابيع لإعدادها لتجارب التسلل الزراعي. قم بربط البكتيريا الزراعية بخلايا Mephasins EHA105 التي تحتوي على ناقلات مرغوبة على ألواح أجار LB واحتضانها عند 28 درجة مئوية.

بعد يومين ، انقل مستعمرة واحدة من الطبق إلى ملليلتر من مرق LB واحتضانها طوال الليل عند 28 درجة مئوية مع التحريض عند 250 دورة في الدقيقة. بعد ذلك ، قم بإزالة ملليلتر واحد من الثقافة الليلية وأضف أربعة ملليلتر من مرق LB الطازج لإعادة الزراعة لمدة ساعة واحدة في ظل نفس الظروف. بيليه الخلايا عن طريق الطرد المركزي.

بعد ذلك ، حدد عدد خلايا التعليق البكتيري عند 600 نانومتر واضبط الكثافة البصرية على 0.1 أو 0.2 باستخدام المخزن المؤقت للتسلل. احتضان التعليق البكتيري في درجة حرارة الغرفة لمدة ثلاث ساعات مع التحريض لطيف. بعد ذلك ، تسلل إلى السطح المحوري للأوراق الموسعة بالكامل من نباتات مختلفة باستخدام حقنة خالية من الإبر سعة ملليلتر واحد.

ضع علامة على المنطقة المخترقة ، والتي ستظهر أغمق من الأنسجة المحيطة غير المخترقة ، بقلم مقاوم للماء.