تحضير الجسيمات النانوية للشيتوزان/dsRNA لتداخل الحمض النووي الريبي القائم على التغذية في ديدان القز

للبدء ، امزج 0.1 من أسيتات الصوديوم المولار و 0.1 حمض الخليك المولي في الماء منزوع الأيونات عند درجة الحموضة 4.5. ثم قم بإعداد 100 مللي مولار كبريتات الصوديوم في الماء منزوع الأيونات في درجة حرارة الغرفة. قم بوزن الكيتوزان التجاري لتحضير محلول بوزن 0.02٪ من حيث الحجم وإذابته في المخزن المؤقت المحضر 100 مللي مولار من أسيتات الصوديوم.

ثم قم بإذابة 20 ميكروغراما من الحمض النووي الريبي المزدوج الذي تقطعت به السبل أو dsRNA في 50 ميكرولترا من الماء الخالي من النوكلياز. أضف هذا المحلول إلى 50 ميكرولتر من المخزن المؤقت لكبريتات الصوديوم لعمل محلول dsRNA سعة 100 ميكرولتر. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من محلول الشيتوزان المحضر إلى 100 ميكرولتر لكل من محلول dsRNA و 50 مللي مولار من كبريتات الصوديوم.

بعد الخلط ، سخني المحاليل على حرارة 55 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة. قم بدوامة الخليط على الفور بسرعة عالية لمدة 30 ثانية لتسهيل تكوين الجسيمات النانوية. الطرد المركزي الخليط على حرارة 13 ، 000 جم في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق للحصول على حبيبات بيضاء.

انقل المادة الطافية إلى أنبوب جديد سعة 1.5 ملليلتر واترك الحبيبات تجف في الهواء في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. باستخدام مقياس الطيف الضوئي للحجم الصغير ، حدد تركيز dsRNA في المادة الطافية. لحساب النسبة المئوية ل dsRNA المغلفة ، اقسم الكمية المتبقية في المادة الطافية على الكمية الأولية من dsRNA.