نود أن نعترف مصادر تمويلنا : معهد كاليفورنيا للطب التجديدي السريرية زميل المنحة التدريب (AN) ، المؤسسة الوطنية للعلوم (MW) ، ايرين Perstein جائزة (TCM) ، الكلية الاميركية للجراحين (TCM) ، جمعية طب الأطفال الأمريكية الجراحية ( الطب الصيني التقليدي) ، ومارس من الدايمات (TCM).

1. إعداد حقن الماصات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معايرة مجتذب ماصة مثل هذا الفصل بين ماصة الزجاج يحدث في غضون 15 ثانية (انظر تعليمات الشركة الصانعة فيما يتعلق المعايرة). سوف ماصة لديها تفتق حيث يفصل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع نهاية ماصة مثل هذه المسافة من بداية تفتق إلى نهاية ماصة غير ل1.04cm 1.05cm. طول ماصة يتناسب عكسيا مع عيار فتحة ماصة. أن ندرك أن صنع أطول ماصة النتائج أيضا في الطرف الأضعف التي هي أكثر عرضة للكسر خلال الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخطوة المقبلة في جعل ماصة هو خلق شطبة السلس شحذ طرف على عجلة الماس شحذ. في وقت قطع ماصة إلى الحجم المناسب ، وغالبا ما ماصة فواصل مع شطبة الطبيعية في طرفها الذي يجب أن تستخدم عند وضع ماصة على عجلة القيادة. أثناء هذه العملية ، فمن المهم للراحة بلطف ماصة على عجلة وشحذ دوريا إعادة تقييم للتأكد من ماصة لمس تزال عجلة (كما شطبة يصبح أكثر سلاسة ، سوف تفقد الاتصال مع شحذ عجلة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة في شطبة ناعمة ، لا بد من شحذ غيض ماصة (الشكل 1). رفع ماصة بحيث لم يعد لمس عجلة شحذ ، تناوب عليها من قبل في اتجاه عقارب الساعة 10-50 درجة ، ووضع الظهر ماصة على عجلة دوارة شحذ لمدة 10 ثواني ~. سحب ماصة من العجلة وشحذ الآن فحص الحافة. هذه الخطوة تحتاج عادة إلى تكرارها مع تعديلات صغيرة عدة لإنشاء حافة حادة. إذا وضعت على حافته ماصة لفترة طويلة جدا ، هو أكثر عرضة لتطوير سطح متفاوتة (الشكل 1). بعد الانتهاء من جانب واحد ، يمكنك أن تنتقل إلى شحذ حافة المعاكس بتكرار الخطوات المذكورة أعلاه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام علامة دائمة لرسم خط كفافي كل 4mm بدءا حيث تفتق يبدأ من ماصة. هذه الخطوط الفاصلة تتوافق مع حجم 5uL. </li></ol> 2. زرع في الرحم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد إعداد المادة عن طريق الحقن (الخلايا على سبيل المثال ، فيروس ، الخ) يمكنك إعداد للحقن. نستخدم microinjector متصلة الهواء المضغوط مع الإعدادات التالية : (ضبط الضغط : 60-80 رطل المدخلات ، وملء 40 رطل ، وضخ 8-12 رطل في البوصة المربعة ، والتوازن 0 رطل في البوصة المربعة ، وعقد 0 رطل ؛ الوقت حقن 100 مللي ثانية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة لتعقيم الحقن ، وتنظيفه مرتين مع EtOH 70 ٪ تليها مرتين مع 1X PBS العقيمة. كما غيض من ماصة لا يزال هشا للغاية ، ونحن لا ننصح التعقيم وماصات الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن إما أن يتم ذلك باستخدام حقن loupes التكبير 2.5X - الإصدار 3.5x أو مجهر تشريح. إعداد منطقتك الداخلي ببطانية الاحتباس الحراري ، والإضاءة ، والأدوات الجراحية اللازمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الحوامل الماوس (نستخدم isoflurane والأكسجين تسليمها عن طريق وحدة التخدير تدفق مستمر). ضع الماوس على وسادة التدفئة في موقف ضعيف ويلصق كل طرف مع الشريط لتأمين الماوس في المكان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقطع الفراء. ثم ، وارتداء القفازات الجراحية المعقمة ، الإعدادية في البطن مع 10 ٪ بوفيدون اليود ، تليها الكحول ، وحقن مسكنة من هذا القبيل كما البوبرينورفين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق 1cm في أسفل البطن (الجانب الأكثر أدنى من شق ينبغي حوالي 1cm متفوقة على introitus). شق الجلد واللفافة و. يجب الحرص على عدم إيذاء أعضاء البطن (الأمعاء والمثانة) والتي هي على الفور تحت طبقة رقيقة من اللفافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام قطعة قطن ، وتمتد برفق لفافة وتسليم الرحم الحامل من خلال شق. احصاء عدد الأجنة التي يتم أولا تحديد المبيضين الأيمن والأيسر للتأكد من تصور الرحم بأكمله. مكان الرحم مرة أخرى في تجويف البطن قبل المتابعة بحيث تظل دافئة الأجنة أثناء التحضير للحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع حجم مناسب من المواد اللازمة لعدد من الأجنة كنت تخطط لحقن. بينما شغل الإبرة مع عينتك ، فمن المهم للحفاظ على الحافة submersed ماصة لتجنب الشفط عينتك في أنابيب microinjector. منذ الخلايا عادة في حجم صغير ، ونحن عادة مكان لهم في microfuge الصغيرة (مثلا : 0.5mL) أنبوب أو مباشرة على قطعة من Parafilm لتكون قادرة على ملء الإبرة دون كسر غيض ماصة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد بلطف كل الجنين والتعرف على جزء من الجنين كنت تخطط لحقن (الكبد على سبيل المثال ، التجويف البريتوني ، الساق ، الخ). مع الإبهام والسبابة ، يجب تثبيت الجنين داخل التجويف الذي يحيط بالجنين بحيث لا تدور في حين يتم تنفيذ عملية الحقن. من المهم الاستمرار على الجنين بحزم كاف لتحقيق الاستقرار في ذلك حتى الآن بما فيه الكفاية بلطف لتجنب الإضرار بها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج ماصة بعناية من خلال الرحم ، سلى ، وجلد الجنين ، وإلى الجهاز الهدف. إذا ماصة حاد ، ينبغي أن يمر بسهولة من خلال هذه الأنسجة. إذا غيض ماصة غير مملة ، كنت واي<html> ليرة لبنانية خيام إشعار الرحم والأغشية الأمنيوسي. حقن حجم المطلوب في كل الجنين. لا بد من أن يكون ثابتا تحركاتك خلال وقت الإدراج ، والحقن ، والانسحاب من ماصة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم حقن حجم المطلوب ، سحب ماصة بعناية. إذا فعلت بشكل صحيح ، يجب أن المواد التي لم يتسرب من التجويف الذي يحيط بالجنين أو الرحم. إذا تم إنشاء حفرة كبيرة في السلى ، والتي يمكن للمرء أن يتعرف عن تسرب السائل الذي يحيط بالجنين ، ثم يعرض للخطر بقاء. أخيرا ، من أجل الدراسات التي تنطوي على حصاد ما بعد الولادة ، يجب على جميع الأجنة تلقي حقن مثالية من الناحية الفنية ، حيث لا يوجد وسيلة لتمييز الأجنة وحقن uninjected بعد الولادة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كنت تنفذ عمليات الحقن في كبد الجنين ، قد ترى في بعض الأحيان الدم في الطرف ماصة بعد سحب هذا ، فإنه يؤكد كنت في الموضع الصحيح ، وينبغي ألا تؤثر على بقاء. إذا كان أداء الحقن داخل الصفاق ، وتهدف أقل قليلا من كبد الجنين. لحقن العضلي ، قد وضع الجنين لتحديد الورك والفخذ وحقن العضلة الألوية. أخيرا ، من أجل حقن داخل البطيني ، فمن السهل أن نرى خيوط الاكليلية لتوجيه ماصة للهدف المناسب. لهذه الحقن ، ويطلب من ماصات عيار أكبر قليلا لاختراق الجمجمة دون كسر ماصة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل ، بعناية مكان الرحم مرة أخرى إلى تجويف البطن. تأكد من عدم الملتوية على نفسها أو حول إمداد الأوعية الدموية. تقديم برنامج تلفزيوني من 1mL 1X العقيمة في التجويف البريتوني الأم لاستبدال أي السوائل التي فقدت أثناء العملية. إغلاق شق في 2 طبقات مع خياطة مضفر امتصاص 5-0 (مثلا : Vicryl). أولا إغلاق اللفافة دون إصابة الأمعاء أو المثانة الكامنة ، ومن ثم إغلاق الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في هذا الوقت ، يمكن أن تدار بعد الإجراء أدوية لتسكين الألم. عودة إلى حقن كل أنثى في قفص الفردية الخاصة ، ووضع القفص على بطانية الاحتباس الحراري. رصد الماوس حتى يصبح في وضع مستقيم. وضع الفراش في قفص ووضع الماوس في منطقة هادئة من الماوس المرفق حيث انه لا ينبغي ان ينزعج (أي عدم تنظيف القفص) حتى عدة أيام بعد الولادة. والتقليل من أي ضغط إضافي للحيوان تقليل فرص العمل قبل الأوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بمجرد الانتهاء من حقن نظيفة ماصة الخاص مرتين مع 1X PBS معقمة وEtOH مع 70 ٪ مرة واحدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ينبغي التقيد الإناث حقن يومية لضمان انهم يتماثلون للشفاء من الإجراء دون صعوبة. ينبغي رصد شق للعلامات ، والتهاب تورم ، وفصل الجرح ، وغيرها من العدوى. يمكن إعطاء المسكنات بعد العملية حسب الحاجة. </li></ol> 3. ممثل النتائج : بقاء الأجنة حقن لمدة التسليم هي العامل الرئيسي الذي يحد من تحقيق النجاح مع هذه التقنية. اعتمادا على حقن المواد وسلالة تستخدم الماوس ، يمكن أن تختلف معدلات البقاء على قيد الحياة. بصفة عامة ، ينبغي أن حقن الخلايا المكونة للدم في البرية من نوع الفئران في E14 ينتج ما لا يقل عن 50 ٪ يعيشون المولد الجراء. ارتفاع معدلات البقاء على قيد الحياة ممكنة بالاعتماد على الجوانب الفنية على حد سواء من الحقن ، وكذلك الخصائص لدى الفئران التي حقنت. التقليل من الصدمة إلى الرحم والأغشية السلوية هو الجانب الأكثر أهمية التقنية لهذا البروتوكول. حادة ، وذات العيار الصغير ماصات الصدمات في الرحم نتيجة الحد الأدنى من خلال الحقن. نحن لا نوصي باستخدام إبر الحقن وفقا لمعايير الكفاءة من الإبر الجاهزة كبير جدا وسيؤدي في حفرة كبيرة في الرحم. وضعت اليد حقن الزجاج الماصات هي إلا إبر عيار الصغيرة التي يمكن استخدامها في عمليات الحقن في الرحم. تقنية جراحية دقيقة ودقيقة ، بما في ذلك التعامل مع طيف من الرحم ومخدر قصير أمر حاسم أيضا من أجل تحقيق النتائج المثلى. يمكن أن خصائص معينة من الفئران المستفيدة مثل الخلفية الوراثية ، وعمر الحمل ، وحجم القمامة تؤثر أيضا على البقاء على قيد الحياة. سلالات معينة من الفئران هم أكثر عرضة للعمالة المبكرة وفقدان الحمل اعتمادا على خلفيتهم الجينية. الحيوانات المعدلة وراثيا 15 بعيوب العضلات أو الاعصاب يمكن أن يكون ضعف القدرة على تقديم الأجنة عن طريق المهبل بعد خضوعه لالبطن خط الوسط 8 إناث الحوامل وهذه قد تتطلب التسليم من قبل قيصرية. وقد وجدنا أيضا أن عمر الحمل في وقت الحقن يمكن أن تؤثر على قدرتها على البقاء. الأجنة التي تقل أعمارهم عن 12 يوما الجنينية وانخفاض معدلات البقاء على قيد الحياة من كبار السن الأجنة. أخيرا ، وجدنا أن حجم القمامة كبيرة (&gt; 10 الأجنة) تميل إلى أن ارتفاع معدلات سقوط الجنين بعد الحقن. الاهتمام بالجوانب التقنية على حد سواء من هذه التقنية والخصائص التي تنفرد بها الفئران يمكن حقنها تعظيم بقاء الأجنة المحقونة. ve_content &quot;&gt; وعندما يتم تنفيذ هذه الأساليب بشكل صحيح ، يمكن للمرء أن يتوقع أن تتعرض الأجنة لجميع المواد المحقونة. مماثلة لوضع ما بعد الولادة ، إلا أن التنفيذ الناجح للخلايا أو الفيروسات في الرحم لا يؤدي دائما في engraftment الخلية المانحة أو الجين التعبير ، على التوالي. engraftment للخلايا الجذعية ، على سبيل المثال ، تعتمد على عدة عوامل مثل جرعة ومصدر للخلايا المزروعة. وبالمثل ، فإن نجاح تنبيغ الفيروسية ، في جزء منه ، والتي تحددها نوع من ناقلات الفيروسية المستخدمة. يجب على المرء فهم العوامل العديدة التي تؤثر البقاء الجرو ، engraftment الخلوية ، وتنبيغ الفيروسية لتحقيق النجاح مع هذا البروتوكول. <img src="/files/ftp_upload/2303/2303fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. مخطط تصور سليم لشحذ ماصات الحقن (الخطوة 1.4)

<ol>
	<li>Flake, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+X-linked+severe+combined+immunodeficiency+by+in+utero+transplantation+of+paternal+bone+marrow.">Treatment of X-linked severe combined immunodeficiency by in utero transplantation of paternal bone marrow.</a> N Engl J Med. 335, 1806-1810 (1996).</li><li>Wengler, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-utero+transplantation+of+parental+CD34+haematopoietic+progenitor+cells+in+a+patient+with+X-linked+severe+combined+immunodeficiency+(SCIDXI).">In-utero transplantation of parental CD34 haematopoietic progenitor cells in a patient with X-linked severe combined immunodeficiency (SCIDXI).</a> Lancet. 348, 1484-1487 (1996).</li><li>Flake, A. W., Zanjani, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+utero+hematopoietic+stem+cell+transplantation:+ontogenic+opportunities+and+biologic+barriers.">in utero hematopoietic stem cell transplantation: ontogenic opportunities and biologic barriers.</a> Blood. 94, 2179-2191 (1999).</li><li>Merianos, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+alloantibodies+induce+a+postnatal+immune+response+that+limits+engraftment+following+in+utero+hematopoietic+cell+transplantation+in+mice.">Maternal alloantibodies induce a postnatal immune response that limits engraftment following in utero hematopoietic cell transplantation in mice.</a> J Clin Invest. 119, 2590-2600 (2009).</li><li>Peranteau, W. H., Endo, M., Adibe, O. O., Flake, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+an+immune+barrier+after+in+utero+hematopoietic-cell+transplantation.">Evidence for an immune barrier after in utero hematopoietic-cell transplantation.</a> Blood. 109, 1331-1333 (2007).</li><li>Kim, H. B., Shaaban, A. F., Yang, E. Y., Liechty, K. W., Flake, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microchimerism+and+tolerance+after+in+utero+bone+marrow+transplantation+in+mice.">Microchimerism and tolerance after in utero bone marrow transplantation in mice.</a> J Surg Res. 77, 1-5 (1998).</li><li>Durkin, E. T., Jones, K. A., Rajesh, D., Shaaban, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+chimerism+threshold+predicts+sustained+engraftment+and+NK-cell+tolerance+in+prenatal+allogeneic+chimeras.">Early chimerism threshold predicts sustained engraftment and NK-cell tolerance in prenatal allogeneic chimeras.</a> Blood. 112, 5245-5253 (2008).</li><li>Mackenzie, T. C., Shaaban, A. F., Radu, A., Flake, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engraftment+of+bone+marrow+and+fetal+liver+cells+after+in+utero+transplantation+in+MDX+mice.">Engraftment of bone marrow and fetal liver cells after in utero transplantation in MDX mice.</a> J Pediatr Surg. 37, 1058-1064 (2002).</li><li>Hayashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mixed+chimerism+following+in+utero+hematopoietic+stem+cell+transplantation+in+murine+models+of+hemoglobinopathy.">Mixed chimerism following in utero hematopoietic stem cell transplantation in murine models of hemoglobinopathy.</a> Exp Hematol. 31, 176-184 (2003).</li><li>Bouchard, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+transgene+expression+in+cardiac+and+skeletal+muscle+following+fetal+administration+of+adenoviral+or+adeno-associated+viral+vectors+in+mice.">Long-term transgene expression in cardiac and skeletal muscle following fetal administration of adenoviral or adeno-associated viral vectors in mice.</a> J Gene Med. 5, 941-950 (2003).</li><li>Meza, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+pyruvate+kinase+deficiency+in+mice+by+gene+therapy+using+the+human+isoenzyme.">Rescue of pyruvate kinase deficiency in mice by gene therapy using the human isoenzyme.</a> Mol Ther. 17, 2000-2009 (2009).</li><li>MacKenzie, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+transduction+of+liver+and+muscle+after+in+utero+injection+of+lentiviral+vectors+with+different+pseudotypes.">Efficient transduction of liver and muscle after in utero injection of lentiviral vectors with different pseudotypes.</a> Mol Ther. 6, 349-358 (2002).</li><li>MacKenzie, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transduction+of+satellite+cells+after+prenatal+intramuscular+administration+of+lentiviral+vectors.">Transduction of satellite cells after prenatal intramuscular administration of lentiviral vectors.</a> J Gene Med. 7, 50-58 (2005).</li><li>Sabatino, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+expression+of+hF.IX+After+tolerance+induction+by+in+utero+or+neonatal+administration+of+AAV-1-F.IX+in+hemophilia+B+mice.">Persistent expression of hF.IX After tolerance induction by in utero or neonatal administration of AAV-1-F.IX in hemophilia B mice.</a> Mol Ther. 15, 1677-1685 (2007).</li><li>Mellor, A. L., Munn, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunology+at+the+maternal-fetal+interface:+lessons+for+T+cell+tolerance+and+suppression.">Immunology at the maternal-fetal interface: lessons for T cell tolerance and suppression.</a> Annu Rev Immunol. 18, 367-391 (2000).</li><li>Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actively+acquired+tolerance+of+foreign+cells.">Actively acquired tolerance of foreign cells.</a> Nature. 172, 603-606 (1953).</li><li>Endo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+to+ocular+stem+cells+by+early+gestational+intraamniotic+injection+of+lentiviral+vector.">Gene transfer to ocular stem cells by early gestational intraamniotic injection of lentiviral vector.</a> Mol Ther. 15, 579-587 (2007).</li><li>Waddington, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+transgene+expression+by+administration+of+a+lentivirus-based+vector+to+the+fetal+circulation+of+immuno-competent+mice.">Long-term transgene expression by administration of a lentivirus-based vector to the fetal circulation of immuno-competent mice.</a> Gene Ther. 10, 1234-1240 (2003).</li><li>Schachtner, S., Buck, C., Bergelson, J., Baldwin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporally+regulated+expression+patterns+following+in+utero+adenovirus-mediated+gene+transfer.">Temporally regulated expression patterns following in utero adenovirus-mediated gene transfer.</a> Gene Ther. 6, 1249-1257 (1999).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

أكثر من 50 عاما مضت ، بيلينجهام ، برنت ، ومدور المستخدمة في زرع الرحم في الفئران للحث على التسامح في مأمن من البروتينات الخارجية (16). ومنذ ذلك الوقت ، وقد استخدمت عدة تنويعات من هذه التقنية لمعالجة مسائل في علم المناعة وبيولوجيا الخلايا الجذعية. بروتوكول مفصلة هنا هو واحد من أكثر الوسائل متاحة لIUT. الجنين في الكبد يقدم هدفا تصور بسهولة ويتيح الوصول إلى الدورة الدموية الجهازية من خلال البوابة والأوردة الكبدية. ومع ذلك ، فقد وصفت عدة تعديلات من أجل تحقيق أفضل توقيت ومكان الحقن المطلوب. على سبيل المثال ، يمكن للحقن في الأجنة الذين تقل أعمارهم عن E13.5 يكون أكثر صعوبة لأن الرحم لا تتسم بالشفافية. إذا كان هذا النهج لا بد من دراسة سابقة الأحداث في التطور ، يمكن استخدام الموجات فوق الصوتية الموجهة لحقن الأنسجة المستهدفة ولا سيما (17). توجيهات الموجات فوق الصوتية مفيد أيضا لتوجيه حقن أجهزة معينة ، مثل القلب أو الرئتين. الحقن في الوريد إلى الوريد المحي 18،19 تقدم ميزة توفير الخلايا مباشرة إلى الدورة الدموية ويمكن أن تسمح لإيصال كميات أكبر من الخلايا. 5 لدينا وصف عمدا النهج العام لأداء الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا في الفئران حتى أن القارئ لديه الأساس اللازم لتحقيق النجاح مع هذه الحقن ، ويمكن تكييف هذه الأساليب لتطبيق المحددة المطلوبة على الرغم من استخدامه الأولية لدراسة التسامح المناعي أكثر من 50 سنة مضت ، وهناك علامات الاستفهام لا تزال مهمة الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا التي ستكون مفيدة. وقد برهنت على قدرتها على إحداث التسامح لمستضدات أجنبية محددة إدخالها في البيئة الجنينية في الفئران. 4،6،7 على الرغم من أن الجهاز المناعي الماوس الجنين في وقت لاحق من ذلك من الحيوانات الكبيرة ، وربما أثر هذا الاستنتاج ، من خلال آليات محددة التسامح الجنين الذي يحدث في الفئران تحتاج إلى مزيد من الدراسة. مثل هذه التجارب قد استجلاء سبل تحسين الحث التسامح بين البشر. حتى في الفئران ، وعوامل مثل توافر منافذ للدم والميزة التنافسية للخلايا المضيفة لا تزال تحد من نجاح engraftment الخلايا الجذعية 3 الاستراتيجيات الحالية لتحقيق المزيد من هذا التلاعب وتشمل آليات محددة للاستجابة المضيف المناعية وتحقيق الاستفادة المثلى من الطريق ، التوقيت ، وجرعة من الخلايا الجذعية التسليم. الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا في الفئران الحمل المبكر نموذجا مثاليا لدراسة الخلايا الجذعية engraftment والتمايز. الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا هو أداة قوية لفهم القضايا الأساسية في مجالات الخلايا الجذعية وعلم الأحياء التطوري. وتحديد الآليات التي تؤدي إلى التسامح الجنين لمستضدات التي أدخلت في الرحم آثار كبيرة على مجال زرع الخلايا الجذعية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن التسليم الناجح لناقلات فيروسية توفير العلاج للاضطرابات جين واحد. توفر العديد من سلالات الماوس المعدلة وراثيا ومتحولة يسمح للتحقيق في دور جينات معينة تلعب لتغيير النمط الظاهري هو متوقع. فإن نموذج الفأر من قبل الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا مما لا شك فيه هذه المجالات ويقربنا من تحقيق إمكاناتهم الكاملة السريرية لعلاج المرضى الذين يعانون من التشوهات الخلقية.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kimble</td>
<td>71900-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instruments Company</td>
<td>Model P-30</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Narishige</td>
<td>IM-300</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette sharpener</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instruments Company</td>
<td>Model BV-10</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

a mouse model of in utero transplantation

زرع الخلايا الجذعية والفيروسات في الرحم لديها امكانات هائلة لعلاج الاضطرابات الخلقية في الجنين البشري. على سبيل المثال ، في زرع الرحم (IUT) من الخلايا الجذعية المكونة للدم قد استخدمت بنجاح لعلاج المرضى الذين يعانون من نقص المناعة الشديد مجتمعة 1،2 ، وفي ظروف أخرى عديدة ، ومع ذلك ، فقد حاولت دون نجاح الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا. 3 ونظرا لهذه النتائج المختلطة ، وتوافر نموذج غير بشرية فعالة لدراسة العواقب البيولوجية لزرع الخلايا الجذعية والعلاج الجيني أمر بالغ الأهمية لدفع عجلة هذا المجال. وقد استخدمنا وغيرهم من طراز الماوس الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا لدراسة العوامل التي تؤثر في نجاح engraftment في الرحم المزروع الخلايا الجذعية المكونة للدم في الفئران البرية على حد سواء من نوع 4-7 وأولئك الذين يعانون من الأمراض الوراثية. 8،9 البيئة الجنين كما يوفر مزايا كبيرة لل نجاح العلاج الجيني في الرحم. على سبيل المثال ، أدى تسليم 10 الفيروسة الغدانية ، الغدة المرتبطة الفيروسية 10 ، 11 فيروسات ، وناقلات lentiviral 12،13 في الجنين في تنبيغ الأجهزة متعددة بعيدة من موقع الحقن مع التعبير الجيني على المدى الطويل. في الرحم ولذا قد يكون العلاج الجيني تعتبر استراتيجية العلاج المحتمل للاضطرابات جين واحد مثل ضمور العضلات أو التليف الكيسي. ميزة أخرى محتملة من الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا هي القدرة على تحفيز جهاز المناعة على التسامح مستضد معين. كما رأينا في الفئران مع الهيموفيليا ، وإدخال عامل التاسع في وقت مبكر من نتائج التنمية في التسامح لهذا البروتين (14). بالإضافة إلى استخدامه في التحقيق العلاجات البشرية المحتملة ، يمكن للنموذج الفأر من الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا أن تكون أداة قوية لدراسة المسائل الأساسية في بيولوجيا الخلايا الجذعية والتنموية. على سبيل المثال ، يمكن للمرء تقديم مختلف الجزيئات الصغيرة للحث أو منع محددة التعبير الجيني في مراحل الحمل ومعرفة التعامل مع المسارات التنموية. ويمكن تقييم أثر هذه التعديلات في timepoints المختلفة بعد الزرع الأولي. علاوة على ذلك ، يمكن للمرء أن زرع الخلايا المحفزة أو نسب محددة السلف في البيئة لدراسة الأجنة الجذعية تمايز الخلايا المضيفة في بيئة غير المشع وغير قلق. قدمت نموذج الفأر من الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا بالفعل أفكارا عديدة داخل مجالات علم المناعة ، والتنموية ، وبيولوجيا الخلايا الجذعية. في هذا البروتوكول القائم على الفيديو ، ونحن وصف نهج خطوة بخطوة لأداء الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا في الأجنة الماوس والخطوط العريضة للخطوات حاسمة والمزالق المحتملة لهذه التقنية.

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of in Utero Transplantation at JoVE.com

A Mouse Model of in Utero Transplantation

نموذج فأرة<em&gt; في الرحم</em&gt; زرع أداة متعددة الاستعمالات التي يمكن استخدامها لدراسة التطبيقات المحتملة السريرية لزرع الخلايا الجذعية والعلاج الجيني في الجنين. في هذا البروتوكول ، نقدم مقاربة عامة لأداء هذه التقنية

نموذج الفأر من في الرحم زراعة

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

a-mouse-model-of-in-utero-transplantation

Google

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of in Utero Transplantation

19.3K Views.  University of California. نموذج فأرة في الرحم زرع أداة متعددة الاستعمالات التي يمكن استخدامها لدراسة التطبيقات المحتملة السريرية لزرع الخلايا الجذعية والعلاج الجيني في الجنين. في هذا البروتوكول ، نقدم مقاربة عامة لأداء هذه التقنية

Video: A Mouse Model of in Utero Transplantation

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed results. However, the cellular and molecular mechanisms of the neotissue development, valve thickening, and stenosis development are not researched extensively. To answer the above questions, we developed a murine heterotopic heart valve transplantation model. A heart valve was harvested from a valve donor mouse and transplanted to a heart donor mouse. The heart with a new valve was transplanted heterotopically to a recipient mouse. The transplanted heart showed its own heartbeat, independent of the recipient&#8217;s heartbeat. The blood flow was quantified using a high frequency ultrasound system with a pulsed wave Doppler. The flow through the implanted pulmonary valve showed forward flow with minimal regurgitation and the peak flow was close to 100 mm/sec. This murine model of heart valve transplantation is highly versatile, so it can be modified and adapted to provide different hemodynamic environments and/or can be used with various transgenic mice to study neotissue development in a tissue engineered heart valve.

In order to understand the cellular and molecular mechanisms underlying neotissue formation and stenosis development in tissue engineered heart valves, a murine model of heterotopic heart valve transplantation was developed. A pulmonary heart valve was transplanted to recipient using the heterotopic heart transplantation technique.

زرع صمام الرئوي عن طريق نموذج الفأر من غيري مكاني القلب زرع

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each year. While several animal models exist for this procedure and mice are the species that is most commonly used. The reasons for using mice are the relative cost of using this species, the existence of many genetically defined strains that allow for the study of immune responses, and the existence of an extensive array of reagents that can be used to further define responses in this species. This model has been used to define factors in the cornea that are responsible for the relative immune privilege status of this tissue that enables corneal allografts to survive acute rejection in the absence of immunosuppressive therapy. It has also been used to define those factors that are most important in rejection of such allografts. Consequently, much of what we know concerning mechanisms of both corneal allograft acceptance and rejection are due to studies using a murine model of corneal transplantation. In addition to describing a model for acute corneal allograft rejection, we also present for the first time a model of late-term corneal allograft rejection.

Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

الفئران زرع القرنية: نموذج لدراسة الشكل الأكثر شيوعا من الصلبة زراعة الأعضاء

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

زرع في وسادة الفأرة المبيض الدهون

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the aorta in mice using the sleeve method was short and easy averaging 20 min, permitting studies of iso/allo grafts. The following article describes the aortic transplantation procedure used in our laboratory. The mice were anesthetized with a mixture of 1.5% volume isoflurane and 100% oxygen through a face mask. At this point, the segment of the aorta between the renal arteries and its bifurcation was separated from the vena cava, freely prepared and clampedat the proximal and distal segments with a single silk suture. Prior to the removal of the aorta, a saline solution containing heparin was injected into the inferior vena cava. Then the aorta was cut between the clamps and a saline heparin solution was used to flush the lumen. The sleeve technique with monofilament sutures was used in order to transplant the abdominal aorta in the orthotopic position.

We present an orthotopic aortic transplantation model using the sleeve technique in mice. It is a very rapid anastomosis method, which can be employed in studies of vascular disease.

باستخدام هذه التقنية الأكمام في نموذج ماوس لزرع الابهري-فيديو التعليمية

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the availability of the widest range of molecular probes and reagents to perform in vivo as well as in vitro studies. Based on our experience with various murine transplantation models, we developed a heterotopic pancreas transplantation model in mice with the intent to analyze mechanisms underlying severe ischemia reperfusion injury-associated early graft damage. In contrast to previously described techniques using suture techniques, herein we describe a new procedure using a non-suture cuff technique. 
In recent years, we have performed more than 300 pancreas transplantations in mice with an overall success rate of &gt;90%, a success rate never described before in mouse pancreas transplantation. The backbone of this non-suture cuff technique for graft revascularization consists of two major steps: (I) pulling the recipient vessel over a polyethylene/polyamide cuff and fixing it with a circumferential ligature, and (II) placing the donor vessel over the everted recipient vessel and fixing it with a second circumferential ligature. The resultant continuity of the endothelial layer results in less thrombogenic lesions with high patency rates and, finally, high success rates.
In this model, arterial anastomosis is achieved by pulling the abdominal aorta of the donor graft over the everted common carotid artery of the recipient animal. Venous drainage of the graft is achieved by pulling the portal vein of the graft over the everted external jugular vein of the recipient. This manuscript provides details and crucial steps of the organ recovery and organ implantation procedures, which will allow researchers with microsurgical skills to perform the transplantation successfully in their laboratories.

Among abdominal solid organ transplantation, pancreatic grafts are prone to develop severe ischemia reperfusion injury-associated graft damage, leading eventually to early graft loss. This protocol describes a model of murine pancreas transplantation using a non-suture cuff technique, ideally suited for analyzing these early, deleterious damages.

نموذج الماوس لزرع البنكرياس باستخدام تقنية تعديل الكفة

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions between cellular and non-cellular blood components during thrombus formation, reliable studies of the physiology and pathophysiology of thrombosis can only be performed in vivo. Therefore, this article presents an ear model in hairless mice and focuses on the in vivo analysis of microcirculation, thrombus formation, and thrombus evolution. By using intravital fluorescence microscopy and the intravenous (iv) application of the respective fluorescent dyes, a repetitive analysis of microcirculation in the auricle can easily be performed, without the need for surgical preparation. Furthermore, this model can be adapted for in vivo studies of different issues, including wound healing, reperfusion injury, or angiogenesis. In summary, the ear of hairless mice is an ideal model for the in vivo study of skin microcirculation in physiological or pathophysiological conditions and for the evaluation of its reaction to different systemic or topical treatments.

The ear model of the hairless SKH1-Hrhr mouse enables intravital fluorescence microscopy of microcirculation and phototoxic thrombus induction without prior surgical preparation in the examined microvascular bed. Therefore, the ear of the hairless mouse is an excellent in vivo model to study the complex interactions during microvascular thrombus formation, thrombus evolution, and thrombolysis.

حيوي داخلي المجهري والجلطة التعريفي في شحمة الأذن ماوس بلا شعر

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

Cardiopulmonary Bypass in a Mouse Model: A Novel Approach

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization and for minimizing organ damage resulting from prolonged extracorporal circulation. The goal of this paper was to demonstrate a fully functional and clinically relevant model of cardiopulmonary bypass in a mouse. We report on the device design, perfusion circuit optimization, and microsurgical techniques. This model is an acute model, which is not compatible with survival due to the need for multiple blood drawings. Because of the range of tools available for mice (e.g., markers, knockouts, etc.), this model will facilitate investigation into the molecular mechanisms of organ damage and the effect of cardiopulmonary bypass in relation to other comorbidities.

This paper describes how to perform cardiopulmonary bypass in mice. This novel model will facilitate the investigation of the molecular mechanisms involved in organ damage.

تجاوز القلبي في طراز ماوس: نهج جديد

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization ...

Intraportal Transplantation of Pancreatic Islets in Mouse Model

Pancreatic islet transplantation to reduce hyperglycemia is highly successful in rodents with chemically-induced diabetes. The most common transplantation site in experimental islet transplantation is the kidney capsule. However, as less is known about the interaction of pancreatic islets with blood constituents, it also makes sense to utilize the portal vein approach in experimental islet transplantation.
This protocol demonstrates an intraportal islet transplantation technique in NMRI nude mice. Streptozotocin (180 mg/kg) is injected intraperitoneally to induce hyperglycemia in recipient mice. They are considered as diabetic at a non-fasting blood glucose level greater than 20 mmol/L. One day prior to transplantation, mouse pancreatic islets are isolated from the donor pancreas by collagenase digestion; a minimum of 350 islets are utilized per diabetic recipient. Depending upon the islet isolation yield, two or more donor mice are utilized per recipient. After overnight culture at 37 &#176;C, islets are administered into the recipient liver via the portal vein. After surgery, the mice are protected in red Makrolon houses and observed until are awake. This protocol maintains glycemic control for 120 days in syngeneic mice and 15 days in allogeneic mice.

Pancreatic islet transplantation is a way to achieve normoglycemia in type 1 diabetes. This article focuses on the transplantation technique through the intraportal route to maintain normal glucose levels in diabetic mice.

إينترابورتال زرع جزيرات البنكرياس في طراز الماوس

Pancreatic islet transplantation to reduce hyperglycemia is highly successful in rodents with chemically-induced diabetes. The most common transplantation ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

متساوي القياس كونتراكتيليتي القياس الشريان المساريقي العلوي الماوس باستخدام أسلاك ميوجرافي

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Veno-Venous Extracorporeal Membrane Oxygenation in a Mouse

The use of extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) has increased substantially in recent years. ECMO has become a reliable and effective therapy for acute as well as end-stage lung diseases. With the increase in clinical demand and prolonged use of ECMO, procedural optimization and prevention of multi-organ damage are of critical importance. The aim of this protocol is to present a detailed technique of veno-venous ECMO in a non-intubated, spontaneously breathing mouse. This protocol demonstrates the technical design of the ECMO and surgical steps. This murine ECMO model will facilitate the study of pathophysiology related to ECMO (e.g., inflammation,bleeding and thromboembolic events). Due to the abundance of genetically modified mice, the molecular mechanisms involved in ECMO-related complications can also be dissected.

Here we present a protocol describing the technique of veno-venous extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) in a non-intubated, spontaneously breathing mouse. This murine model of ECMO can be effectively implemented in experimental studies of acute and end-stage lung diseases.

مسد الوريدي الغشاء خارج الجسم الأوكسجين في الماوس

The use of extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) has increased substantially in recent years. ECMO has become a reliable and effective therapy for ...