وقدم التمويل من 64611 - MH المعاهد الوطنية للصحة وجائزة الباحث الشاب NARSAD. فإن الكتاب أيضا أن نعترف آدم Beagley ، Dikopf مارك ، وسميث بن لمساعدتها التقنية.

SU - 8 تصنيع القوالب إعداد الماجستير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تحضير الماجستير SU - 8 على ركيزة رقاقة السيليكون باستخدام خطوتين القياسية السلبية مقاومة عملية الطباعة الحجرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتم إزالة علامات التوافق على رقاقة السيليكون باستخدام شفرة حلاقة وذروة هذه الهياكل (الواقعة على طول المحيط الخارجي للرقاقة) هو أكثر من مجرد هياكل الجهاز الفعلي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم تنظيف رقاقة السيليكون باستخدام الكحول الآيزوبروبيل والمجففة في تيار من N 2. دعم ركائز مصنوعة من الشريط مع سماكة أقل من أطول هيكل الجهاز استبدال علامات التوافق على أربعة جوانب رقاقة. ملاحظة : إذا كان ارتفاع أعمدة الدعم هو أكثر من مجرد هياكل أطول الجهاز ، لم يتم تشكيلها من خلال ثقوب في القالب PDMS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع رقاقة السيليكون الرئيسي على صفيحة ساخنة في درجة حرارة الغرفة. </li></ol> PDMS حل إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أعد أربعة غرامات من الحل (PDMS) polydimethylsiloxane عن طريق خلط دقيق 10 أجزاء من المطاط الصناعي السيليكون مع 1 جزء من وكيل المعالجة. ملاحظة : تأكد من أن يتم خلط الحلين موحد للحصول على الخصائص الفيزيائية مماثلة في جميع أنحاء العفن PDMS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتم إزالة فقاعات ولدت في حل PDMS أثناء عملية الخلط باستخدام مجفف فراغ. </li></ol> PDMS الطلاء والتجفيف <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هو الاستغناء ببطء فقاعة خالية حل PDMS على سيد SU - 8 التأكد من أن لا يتم إنشاء فقاعات أثناء عملية توزيع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم وضعت واحدة من نهاية الفيلم الشفافية في الكتابة على لوحة الساخن ببطء ووضعها على حل PDMS لنشر بالتساوي على PDMS سيد SU - 8. أي فقاعات ولدت أثناء هذه العملية تحتاج إلى إزالته باستخدام التحقيق. [ملاحظة : لا رفع الشفافية لمنع توليد مزيد من الفقاعات.] </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع لوح borofloat على أعلى من الشفافية ورقة للضغط موحدة. يتم تطبيق ضغط لطيف على السطح العلوي أطول من هياكل دائرية (الموجود في منتصف الطريق أطوال وتركز القناة على طول عرض القنوات) مثل أن هناك حد أدنى أو PDMS لا تقع بين الشفافية وSU - 8 سطح دائري الهياكل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توضع ثلاث بلاطات أكثر borofloat على رأس شطيرة رقاقة السيليكون borofloat بلاطة للضغط المستمر على السطح العلوي للهياكل فتح دائرية قبل وأثناء عملية المعالجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم زيادة درجة الحرارة في طبق ساخن الى 75 درجة مئوية غير مملح وPDMS وعند هذه الدرجة لمدة 1 ساعة. وجلبت لوحة الساخن لدرجة حرارة 50 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتم إزالة ألواح وتتم إزالة بلطف الشفافية تاركة وراءها الرئيسي ورقة رقيقة مطلية PDMS على أعلى من ذلك. </li></ol> بناء الجهاز ميكروفلويديك إزالة ورقة PDMS من سيده <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هو محفور على الحدود الخارجية للغرفة نضح بها على ورقة PDMS باستخدام شفرة حلاقة بعد محاذاة المنافذ على غرفة نضح مع الموانئ الرئيسية على SU - 8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ومن ثم ورقة PDMS إزالتها بلطف من الربان ، وسحب على طول القنوات لمنع تمزق PDMS. وضعت ورقة على ورقة PDMS الشفافية مع سطح الشبكة ميكروفلويديك التي تواجه صعودا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم إجراء المنافذ مدخل ومخرج باستخدام حفار الفلين. </li></ol> الترابط ورقة PDMS ساترة لزجاج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم الربط سطح الورقة PDMS (السطح الذي يحتوي على شبكة ميكروفلويديك) وتنظيف الزجاج ساترة بلطف باستخدام الشريط سكوتش 3M ، وضعت على ورقة وشفافية ، وأخيرا وضعت في غرفة البلازما O 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم التعامل مع الأسطح الترابط مع البلازما 165 واط لمدة 10 ثانية. هو الرهينة فورا على سطح البلازما للتعامل ساترة زجاجية على سطح البلازما المعالجة من ورقة PDMS. ملاحظة : تطبيق ضغط لطيف على سطح الزجاج لإزالة أي فقاعات الهواء المحبوس بين السطوح الترابط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سماح 5 دقائق للحصول على الروابط الجيدة بين PDMS والزجاج. بعد 5 دقائق إزالة بلطف على الشفافية التي وضعت ورقة PDMS لعملية التسنيد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يوضع جهاز ميكروفلويديك في الأكسجين البلازما نظام لجعل القنوات المائية. ويتم العلاج في البلازما 165 لاتس 1 دقيقة. </li></ol> التكامل بين الجهاز ميكروفلويديك وغرفة نضح إعداد غرفة نضح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وأمرت دائرة نضح قبالة الجاهزة للاستخدام ، وحفر مدخل ومخرج المنافذ بحيث عندما مستعبدين الجهاز ميكروفلويديك وغرفة ، ويتم محاذاة المنافذ على الغرفة والجهاز. وهي مغلفة السطح السفلي من الغرفة مع نضح فDMS للحصول على ختم ضيق بين الغرفة والجهاز ميكروفلويديك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع الكتابة على ورقة الشفافية على طبق ساخن في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل واحد مستعد PDMS غرام في عملية مماثلة لتلك التي سبق وصفها. ومن ثم فقاعة خالية حل PDMS الاستغناء ببطء على الشفافية ورقة تجنب توليد فقاعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم وضع غرفة نضح على حل PDMS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم وضع لوح borofloat على رأس الغرفة موحدة لممارسة الضغط والحصول على طبقة رقيقة من PDMS على السطح السفلي من الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم زيادة درجة الحرارة في طبق ساخن الى 75 درجة مئوية غير مملح وPDMS وعند هذه الدرجة لمدة 1 ساعة. </li></ol> الرابطة الجهاز ميكروفلويديك وغرفة نضح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتم إزالة بلاطة ويتم إزالة بلطف الشفافية تاركة وراءها غرفة نضح ورقة مغلفة PDMS رقيقة على سطح القاع. إزالة غير المرغوب فيها باستخدام PDMS شفرة حلاقة وتحقيقا لإزالة الحافة الحادة PDMS من موانئ الوصول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم السطح PDMS الجهاز ميكروفلويديك والسطح السفلي للغرفة PDMS تنظيفها برفق باستخدام شريط 3M ، وضعت على ورقة وشفافية ، وضعت أخيرا في غرفة الأوكسجين البلازما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعامل مع الأسطح البلازما واتس لمدة 10 ثانية 165 هو الرهينة فورا السطح المطلي PDMS للغرفة على السطح PDMS الجهاز ميكروفلويديك. ملاحظة : تطبيق ضغط لطيف على سطح الزجاج لإزالة أي فقاعات الهواء المحبوس بين السطوح الترابط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مباشرة قبل الاستخدام ، يتم وضع الجهاز في الأكسجين البلازما لجعل نظام القنوات المائية. ويتم العلاج في البلازما 165 لاتس 1 دقيقة. </li></ol> تعريض الدماغ لشرائح المكروية الكيميائية العصبية باستخدام جهاز ميكروفلويديك <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وmicrochannels ماء من (جهاز ميكروفلويديك) -- (غرفة التروية) تمتلئ تركيبة مع ACSF القياسية (السائل الشوكي الدماغي الاصطناعي) حل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستغناء عن قطرات صغيرة من حل ACSF في الموانئ ، والسماح للمدخل حل ليكون شرير حتى في القنوات. إزالة أي فقاعات اليسار باستخدام حقنة من الميناء منفذا. الاستغناء عن انخفاض كبير في حل ACSF في الميناء منفذا للسماح السلبي ضخ السوائل من مدخل إلى منافذ مخرج الجهاز ميكروفلويديك. ملاحظة : يجب الحرص على إزالة كافة الفقاعات من قنوات للسماح تدفق السوائل باستخدام أسلوب ضخ السلبي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح (جهاز ميكروفلويديك) -- (غرفة التروية) في منصة السرد العادي وإصلاح النظام الأساسي العادي في محول المجهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط مدخل ومخرج القياسية (شفط) أنابيب إلى غرفة نضح لنضح المستمر لشريحة المخ بمحلول ACSF القياسية. يستنشق هو الحل ACSF باستمرار مع 95 ٪ O2 - 5 ٪ CO 2. ملاحظة : ضبط الموقف من أنابيب شفط للحفاظ على مستوى ثابت من ACSF في الحمام من غرفة الارواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بمجرد ملأ الغرفة الارواء بمحلول ACSF ، ضع شريحة الدماغ في غرفة التروية باستخدام قطارة. باستخدام المسبار ، ضع شريحة الدماغ فوق فتحات دائرية في الجهاز ميكروفلويديك. مرة واحدة شريحة الدماغ هو في الموضع المطلوب على فتحات دائرية ، واستخدام مرساة شريحة لشل حركة شريحة الدماغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن الآن أن تستخدم الجهاز ميكروفلويديك لفضح شرائح الدماغ (وضعت في غرفة ونضح على رأس شبكة ميكروفلويديك) لمختلف الناقلات العصبية باستخدام السلبي ضخ السوائل. </li></ol>

<ol>
	<li>Blake, A. J., Pearce, T. M., Rao, N. S., Johnson, S. M., Williams, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilayer+PDMS+microfluidic+chamber+for+controlling+brain+slice+microenvironment.">Multilayer PDMS microfluidic chamber for controlling brain slice microenvironment.</a> Lab on a Chip. 7, 842-849 (2007).</li><li>Walker, G. M., Beebe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+passive+pumping+method+for+microfluidic+devices.">A passive pumping method for microfluidic devices.</a> Lab on a Chip. 2, 131-134 (2002).</li></ol>

الكتاب مفتوحة للتعاون التي تنطوي على التكنولوجيا أظهرت ميكروفلويديك في مجالات مختلفة في علم الأحياء.

وتقتصر القائمة شريحة غرف الدماغ نضح macroscale الميكروسكيل أو من حيث القرار المكانية التي يقدمونها لفضح شرائح المخ والموصلات العصبية. التكنولوجيا الجهاز ميكروفلويديك تظاهر هنا يتغلب على هذا القيد باستخدام تقنيات بسيطة bioMEMS. ومن المتوقع أن البساطة في تصنيع الجهاز ميكروفلويديك وسهو...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>RC-26GPL</td>
<td>Tool</td>
<td>Warner Instruments</td>
<td>W2-64-0236</td>
<td>Low Profile Large Bath RC-26GLP Recording Chamber</td>
</tr>
<tr>
<td>SHD-26GH/10</td>
<td>Tool</td>
<td>Warner Instruments</td>
<td>W2-64-0253</td>
<td>Stainless steel slice hold-down for RC-26G, 1.0 mm thread spacing </td>
</tr>
<tr>
<td>PDMS (polydimethylsiloxane)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>Sylgard 184</td>
<td>Silicone Elastomer Kit</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasma Preen-II 862</td>
<td>Tool</td>
<td>Plasmatic Systems, Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Microwave plasma system</td>
</tr>
<tr>
<td>Model P-1</td>
<td>Tool</td>
<td>Warner Instruments</td>
<td>W2-64-0277</td>
<td>Series 20 Plain Platform, Model P-1</td>
</tr>
<tr>
<td>SA-NIK</td>
<td>Tool</td>
<td>Warner Instruments</td>
<td>W2-64-0291</td>
<td>Adapter for Nikon Diaphot/TE200/TE2000, SA-NIK</td>
</tr>
<tr>
<td>Oxygenated, heated ACSF (Artificial cerebro-spinal fluid)</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Exact composition will vary with application</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

brain slice stimulation using a microfluidic network and standard perfusion chamber

لقد أثبتنا في تصنيع جهاز مستويين ميكروفلويديك التي يمكن دمجها بسهولة مع الاجهزة الكهربية الموجودة. غير ملفقة الجهاز مستويين ميكروفلويديك باستخدام معيار من خطوتين السلبية مقاومة عملية الطباعة الحجرية 1. المستوى الأول يحتوي microchannels مع مدخل ومخرج الموانئ في كل نهاية. المستوى الثاني يحتوي على ثقوب دائرية تقع في منتصف الطريق الميكروسكيل طول القناة ، وتركزت على طول مع عرض القناة. يستخدم الأسلوب السلبي الضخ على ضخ السوائل من مدخل الميناء إلى الميناء منفذا 2. تم دمج جهاز ميكروفلويديك مع الجاهزة للغرف نضح ويسمح التكامل السلس مع الإعداد الكهربية. السوائل التي تم تقديمها في مدخل الموانئ تدفق من خلال microchannels نحو المنافذ منفذ والهروب أيضا من خلال فتحات دائرية تقع في أعلى microchannels في حمام من نضح. ومن ثم لا يمكن أن يتعرض السطح السفلي من شريحة الدماغ وضعت في غرفة وحمام نضح أعلاه مع الجهاز ميكروفلويديك العصبية المختلفة. سمك الميكروسكيل الجهاز ميكروفلويديك وطبيعة شفافة للمواد [الزجاج ساترة وPDMS (polydimethylsiloxane)] تستخدم لجعل الجهاز ميكروفلويديك تسمح المجهري لشريحة الدماغ. الجهاز ميكروفلويديك يسمح تعديل (سواء المكانية والزمانية) من المحفزات الكيميائية التي أدخلت على microenvironments شريحة الدماغ.

Watch this Scientific Journal Video about Brain Slice Stimulation Using a Microfluidic Network and Standard Perfusion Chamber at JoVE.com

Brain Slice Stimulation Using a Microfluidic Network and Standard Perfusion Chamber

نظهر تصنيع جهاز ميكروفلويديك البسيطة التي يمكن أن تكون متكاملة مع الاجهزة الكهربية القياسية للكشف عن السطوح الميكروسكيل شريحة الدماغ في الطريقة التي تسيطر عليها بشكل جيد لمختلف الناقلات العصبية.

تحفيز الدماغ شريحة باستخدام شبكة ميكروفلويديك وستاندرد غرفة الإرواء

We have demonstrated the fabrication of a two-level microfluidic device that can be easily integrated with existing electrophysiology setups. The ...

brain-slice-stimulation-using-microfluidic-network-standard-perfusion

Research

JoVE Journal

Biology

10.8K Views.  University of Illinois, Chicago. نظهر تصنيع جهاز ميكروفلويديك البسيطة التي يمكن أن تكون متكاملة مع الاجهزة الكهربية القياسية للكشف عن السطوح الميكروسكيل شريحة الدماغ في الطريقة التي تسيطر عليها بشكل جيد لمختلف الناقلات العصبية.

Video: Brain Slice Stimulation Using a Microfluidic Network and Standard Perfusion Chamber

Fabrication of a Microfluidic Device for the Compartmentalization of Neuron Soma and Axons

In this video, we demonstrate the technique of soft lithography with polydimethyl siloxane (PDMS) which we use to fabricate a microfluidic device for culturing neurons. Previously, a silicon wafer was patterned with the design for the neuron microfluidic device using SU-8 and photolithography to create a master mold, or what we simply refer to as a "master". Next, we pour the silicon polymer PDMS on top of the master which is then cured by heating the PDMS to 80&deg;C for 1 hour. The PDMS forms a negative mold of the device. The PDMS is then carefully cut and lifted away from the master. Holes are punched where the reservoirs will be and the excess PDMS trimmed away from the device. Nitrogen is used to blow away any excess debris from the device. At this point the devices are now ready for use and can either bonded to corning No. 1 cover glass with a plasma sterilizer/cleaner or can be reversibly bound to the cover glass by simply placing the device on top of the cover glass. The reversible bonding of the device to glass is covered in a separate video and requires first that the device be sterilized either with 70% ethanol or by autoclaving. Plasma treating sterilizes the devices so no further treatment is necessary. It is, however, important, when plasma-treating the devices, to add liquid to the devices within 10 minutes of the plasma treatment while the surfaces are still hydrophilic. Waiting longer than 10 minutes to add liquid to the device makes it difficult for the liquid to enter the device. The neuron devices are typically plasma-bound to cover glass and 0.5 mg/ml poly-L-lysine (PLL) in pH 8.5 borate buffer is immediately added to the device. After a minimum of 3 hours incubating with PLL, the devices are washed with dH2O water a minimum of 3 times with at least 15 minutes between each wash. Next, the water is removed and fresh media is added to the device. At this point the device is ready for use. It is important to remember at this point to never remove all the media from the device. Always leave media in the main channel.

In this video we demonstrate the technique of soft lithography with polydimethyl siloxane (PDMS) which we use to farbricate a microfluidic device for culturing neurons.

تصنيع جهاز ميكروفلويديك للتجزئة سوما الخلية العصبية والمحاوير

In this video, we demonstrate the technique of soft lithography with polydimethyl siloxane (PDMS) which we use to fabricate a microfluidic device for ...

Preparing E18 Cortical Rat Neurons for Compartmentalization in a Microfluidic Device

In this video, we demonstrate the preparation of E18 cortical rat neurons. E18 cortical rat neurons are obtained from E18 fetal rat cortex previously dissected and prepared. The E18 cortex is, upon dissection, immediately dissociated into individual neurons. It is possible to store E18 cortex in Hibernate E buffer containing B27 at 4&deg;C for up to a week before the dissociation is performed. However, there will be a drop in cell viability. Typically we obtain our E18 Cortex fresh. It is transported to the lab in ice cold Calcium free Magnesium free dissection buffer (CMFM). Upon arrival, trypsin is added to the cortex to a final concentration of 0.125%. The cortex is then incubated at 37&deg;C for 8 minutes. DMEM containing 10% FBS is added to the cortex to stop the reaction. The cortex is then centrifuged at 2500 rpm for 2 minutes. The supernatant is removed and 2 ml of Neural Basal Media (NBM) containing 2% B27 (vol/vol) and 0.25% Glutamax (vol/vol) is added to the cortex which is then re-suspended by pipetting up and down. Next, the cortex is triturated with previously fire polished glass pipettes, each with a successive smaller opening. After triturating, the cortex is once again centrifuged at 2500 rpm for 2 minutes. The supernatant is then removed and the cortex pellet re-suspended with 2 ml of NBM containing B27 and Glutamax. The cell suspension is then passed through a 40 um nylon cell strainer. Next the cells are counted. The neurons are now ready for loading into the neuron microfluidic device.

In this video we demonstrate the preparation of E18 Cortical Rat Neurons.

إعداد E18 العصبونات القشرية للتجزئة الجرذ في جهاز ميكروفلويديك

In this video, we demonstrate the preparation of E18 cortical rat neurons. E18 cortical rat neurons are obtained from E18 fetal rat cortex previously ...

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T - اللمفاويات التقاط باستخدام رقاقة ميكروفلويديك المتاح لفيروس نقص المناعة البشرية

Cell Capture Using a Microfluidic Device

القبض على خلية باستخدام جهاز ميكروفلويديك

Assessing Neural Stem Cell Motility Using an Agarose Gel-based Microfluidic Device

While microfluidic technology is reaching a new level of maturity for macromolecular assays, cell-based assays are still at an infant stage1. This is largely due to the difficulty with which one can create a cell-compatible and steady microenvironment using conventional microfabrication techniques and materials. We address this problem via the introduction of a novel microfabrication material, agarose gel, as the base material for the microfluidic device. Agarose gel is highly malleable, and permeable to gas and nutrients necessary for cell survival, and thus an ideal material for cell-based assays. We have shown previously that agarose gel based devices have been successful in studying bacterial and neutrophil cell migration2. In this report, three parallel microfluidic channels are patterned in an agarose gel membrane of about 1mm thickness. Constant flows with media/buffer are maintained in the two side channels using a peristaltic pump. Cells are maintained in the center channel for observation. Since the nutrients and chemicals in the side channels are constantly diffusing from the side to center channel, the chemical environment of the center channel is easily controlled via the flow along the side channels. Using this device, we demonstrate that the movement of neural stem cells can be monitored optically with ease under various chemical conditions, and the experimental results show that the over expression of epidermal growth factor receptors (EGFR) enhances the motility of neural stem cells. Motility of neural stem cells is an important biomarker for assessing cells aggressiveness, thus tumorigenic factor3. Deciphering the mechanism underlying NSC motility will yield insight into both disorders of neural development and into brain cancer stem cell invasion.

We demonstrate that the over expression of epidermal growth factor receptors (EGFR) enhances the motility of neural stem cells(NSCs) using a novel agarose gel based microfluidic device. This technology can be readily adaptable to other mammalian cell systems where cell sources are scarce, such as human neural stem cells, and the turn around time is critical.

تقييم العصبية على الحركة باستخدام الخلايا الجذعية جل المستندة Agarose الأجهزة ميكروفلويديك

While microfluidic technology is reaching a new level of maturity for macromolecular assays, cell-based assays are still at an infant stage1. This is ...

Trypsinizing and Subculturing Mammalian Cells

As cells reach confluency, they must be subcultured or passaged. Failure to subculture confluent cells results in reduced mitotic index and eventually in cell death. The first step in subculturing is to detach cells from the surface of the primary culture vessel by trypsinization or mechanical means. The resultant cell suspension is then subdivided, or reseeded, into fresh cultures. Secondary cultures are checked for growth and fed periodically, and may be subsequently subcultured to produce tertiary cultures. The time between passaging of cells varies with the cell line and depends on the growth rate.

As cells reach confluency, they must be subcultured or passaged. This video will demonstrate a procedure for subculturing both adherent and suspension cells.

Trypsinizing Subculturing وخلايا الثدييات

As cells reach confluency, they must be subcultured or passaged. Failure to subculture confluent cells results in reduced mitotic index and eventually in ...

The Microfluidic Probe: Operation and Use for Localized Surface Processing

Microfluidic devices allow assays to be performed using minute amounts of sample and have recently been used to control the microenvironment of cells. Microfluidics is commonly associated with closed microchannels which limit their use to samples that can be introduced, and cultured in the case of cells, within a confined volume. On the other hand, micropipetting system have been used to locally perfuse cells and surfaces, notably using push-pull setups where one pipette acts as source and the other one as sink, but the confinement of the flow is difficult in three dimensions. Furthermore, pipettes are fragile and difficult to position and hence are used in static configuration only. 
The microfluidic probe (MFP) circumvents the constraints imposed by the construction of closed microfluidic channels and instead of enclosing the sample into the microfluidic system, the microfluidic flow can be directly delivered onto the sample, and scanned across the sample, using the MFP. . The injection and aspiration openings are located within a few tens of micrometers of one another so that a microjet injected into the gap is confined by the hydrodynamic forces of the surrounding liquid and entirely aspirated back into the other opening. The microjet can be flushed across the substrate surface and provides a precise tool for localized deposition/delivery of reagents which can be used over large areas by scanning the probe across the surface. 
In this video we present the microfluidic probe1 (MFP). We explain in detail how to assemble the MFP, mount it atop an inverted microscope, and align it relative to the substrate surface, and finally show how to use it to process a substrate surface immersed in a buffer.

In this video we present the microfluidic probe1 (MFP). We explain in detail how to assemble the MFP, mount it atop an inverted microscope, and align it relative to the substrate surface, and finally show how to use it to process a substrate surface immersed in a buffer solution.

ودقق ميكروفلويديك : تشغيل واستخدام لتصنيع السطحي المترجمة

Microfluidic devices allow assays to be performed using minute amounts of sample and have recently been used to control the microenvironment of cells. ...

Platelet Adhesion and Aggregation Under Flow using Microfluidic Flow Cells

Platelet aggregation occurs in response to vascular injury where the extracellular matrix below the endothelium has been exposed. The platelet adhesion cascade takes place in the presence of shear flow, a factor not accounted for in conventional (static) well-plate assays. This article reports on a platelet-aggregation assay utilizing a microfluidic well-plate format to emulate physiological shear flow conditions. Extracellular proteins, collagen I or von Willebrand factor are deposited within the microfluidic channel using active perfusion with a pneumatic pump. The matrix proteins are then washed with buffer and blocked to prepare the microfluidic channel for platelet interactions. Whole blood labeled with fluorescent dye is perfused through the channel at various flow rates in order to achieve platelet activation and aggregation. Inhibitors of platelet aggregation can be added prior to the flow cell experiment to generate IC50 dose response data.

The platelet adhesion cascade takes place in the presence of shear flow, a factor not accounted for in conventional (static) well-plate assays. This article reports on a platelet-aggregation assay utilizing a microfluidic well-plate format to emulate physiological shear flow conditions.

التصاق وتكدس الصفيحات تحت التدفق باستخدام خلايا تدفق ميكروفلويديك

Platelet aggregation occurs in response to vascular injury where the extracellular matrix below the endothelium has been exposed. The platelet adhesion ...

Mapping the After-effects of Theta Burst Stimulation on the Human Auditory Cortex with Functional Imaging

Auditory cortex pertains to the processing of sound, which is at the basis of speech or music-related processing1. However, despite considerable recent progress, the functional properties and lateralization of the human auditory cortex are far from being fully understood. Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) is a non-invasive technique that can transiently or lastingly modulate cortical excitability via the application of localized magnetic field pulses, and represents a unique method of exploring plasticity and connectivity. It has only recently begun to be applied to understand auditory cortical function 2. 
An important issue in using TMS is that the physiological consequences of the stimulation are difficult to establish. Although many TMS studies make the implicit assumption that the area targeted by the coil is the area affected, this need not be the case, particularly for complex cognitive functions which depend on interactions across many brain regions 3. One solution to this problem is to combine TMS with functional Magnetic resonance imaging (fMRI). The idea here is that fMRI will provide an index of changes in brain activity associated with TMS. Thus, fMRI would give an independent means of assessing which areas are affected by TMS and how they are modulated 4. In addition, fMRI allows the assessment of functional connectivity, which represents a measure of the temporal coupling between distant regions. It can thus be useful not only to measure the net activity modulation induced by TMS in given locations, but also the degree to which the network properties are affected by TMS, via any observed changes in functional connectivity.
Different approaches exist to combine TMS and functional imaging according to the temporal order of the methods. Functional MRI can be applied before, during, after, or both before and after TMS. Recently, some studies interleaved TMS and fMRI in order to provide online mapping of the functional changes induced by TMS 5-7. However, this online combination has many technical problems, including the static artifacts resulting from the presence of the TMS coil in the scanner room, or the effects of TMS pulses on the process of MR image formation. But more importantly, the loud acoustic noise induced by TMS (increased compared with standard use because of the resonance of the scanner bore) and the increased TMS coil vibrations (caused by the strong mechanical forces due to the static magnetic field of the MR scanner) constitute a crucial problem when studying auditory processing. 
This is one reason why fMRI was carried out before and after TMS in the present study. Similar approaches have been used to target the motor cortex 8,9, premotor cortex 10, primary somatosensory cortex 11,12 and language-related areas 13, but so far no combined TMS-fMRI study has investigated the auditory cortex. The purpose of this article is to provide details concerning the protocol and considerations necessary to successfully combine these two neuroscientific tools to investigate auditory processing. 
Previously we showed that repetitive TMS (rTMS) at high and low frequencies (resp. 10 Hz and 1 Hz) applied over the auditory cortex modulated response time (RT) in a melody discrimination task 2. We also showed that RT modulation was correlated with functional connectivity in the auditory network assessed using fMRI: the higher the functional connectivity between left and right auditory cortices during task performance, the higher the facilitatory effect (i.e. decreased RT) observed with rTMS. However those findings were mainly correlational, as fMRI was performed before rTMS. Here, fMRI was carried out before and immediately after TMS to provide direct measures of the functional organization of the auditory cortex, and more specifically of the plastic reorganization of the auditory neural network occurring after the neural intervention provided by TMS. 
Combined fMRI and TMS applied over the auditory cortex should enable a better understanding of brain mechanisms of auditory processing, providing physiological information about functional effects of TMS. This knowledge could be useful for many cognitive neuroscience applications, as well as for optimizing therapeutic applications of TMS, particularly in auditory-related disorders.

Auditory processing is the basis of speech and music-related processing. Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) has been used successfully to study cognitive, sensory and motor systems but has rarely been applied to audition. Here we investigated TMS combined with functional Magnetic Resonance Imaging to understand the functional organization of auditory cortex.

تعيين آثار ما بعد من ثيتا انفجار تحفيز على القشرة السمعية الإنسان مع التصوير الوظيفي

Auditory cortex pertains to the processing of sound, which is at the basis of speech or music-related processing1. However, despite considerable recent ...

Mechanical Stimulation of Chondrocyte-agarose Hydrogels

Articular cartilage suffers from a limited repair capacity when damaged by mechanical insult or degraded by disease, such as osteoarthritis. To remedy this deficiency, several medical interventions have been developed. One such method is to resurface the damaged area with tissue-engineered cartilage; however, the engineered tissue typically lacks the biochemical properties and durability of native cartilage, questioning its long-term survivability. This limits the application of cartilage tissue engineering to the repair of small focal defects, relying on the surrounding tissue to protect the implanted material. To improve the properties of the developed tissue, mechanical stimulation is a popular method utilized to enhance the synthesis of cartilaginous extracellular matrix as well as the resultant mechanical properties of the engineered tissue. Mechanical stimulation applies forces to the tissue constructs analogous to those experienced in vivo. This is based on the premise that the mechanical environment, in part, regulates the development and maintenance of native tissue1,2. The most commonly applied form of mechanical stimulation in cartilage tissue engineering is dynamic compression at physiologic strains of approximately 5-20% at a frequency of 1 Hz1,3. Several studies have investigated the effects of dynamic compression and have shown it to have a positive effect on chondrocyte metabolism and biosynthesis, ultimately affecting the functional properties of the developed tissue4-8. In this paper, we illustrate the method to mechanically stimulate chondrocyte-agarose hydrogel constructs under dynamic compression and analyze changes in biosynthesis through biochemical and radioisotope assays. This method can also be readily modified to assess any potentially induced changes in cellular response as a result of mechanical stimuli.

The biosynthesis of cartilaginous extracellular matrix by chondrocytes can be affected by application of mechanical stimuli. This method describes the technique of applying dynamic compressive strains to chondrocytes encapsulated in 3D constructs and the evaluation of induced changes in chondrocyte metabolism.

الميكانيكية حفز خلية غضروفية-الاغاروز الهلاميات المائية

Articular cartilage suffers from a limited repair capacity when damaged by mechanical insult or degraded by disease, such as osteoarthritis. To remedy ...