نود أن نشكر التكنولوجيين مختبر لمختبر عيادة مايو كلينيك Mycobacteriology لما قدموه من مساعدة أثناء الدراسة.

كل مختبر يحتاج إلى إجراء تقييم المخاطر بالتعاون مع هذه المؤسسات مسؤول السلامة البيولوجية لتحديد مستوى السلامة الحيوية المناسبة لإعداد اللقاح وpipetting من اللقاح في لوحة. في المختبر لدينا ، ونحن الاستفادة من مستوى السلامة الحيوية 3 مختبرات (BSL3) الممارسات حتى يتم تلقيح لوحات microtiter ، ومختومة بختم لاصق من البلاستيك. ثم توضع هذه اللوحات داخل كيس من البلاستيك ، والذي هو ايضا للحرارة مختومة. ويجري الحضانة وتفسير قراءة لوحة microtiter في السلامة الحيوية في المختبرات من المستوى 2 (BSL2). 1. وضع العلامات للمواد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التسمية آغار الدم لوحة ، وثلاث لوحات Middlebrook 7H10 ، Middlebrook 7H9 مرق ، والمالحة توين أنبوب الزجاج وحبة لوحة AST microtiter مع التعريف المناسب (على سبيل المثال ، اسم المريض ورقم السجل الطبي) في BSL2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمية آغار الدم و7H10 مطلي ب &quot;التحقق من نقاء&quot;. ويوصى بحساب مستعمرة الدوري لقيحة لضمان أن يتم استخدام التركيز المناسب من الكائنات الحية في الاختبار. وسوف يقوم بحساب مستعمرة عند الحاجة إلى وجود اثنين من لوحات 7H10 المسمى ب &quot;العد 01/01 مستعمرة&quot; و &quot;العد 1 / 50 مستعمرة&quot;. </li></ol> 2. التحضير التقني للذهاب الى BSL3 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المعدات الوقائية الشخصية الملائمة واللازمة للعمل في BSL3 وتضم الجبهة ثوب الصلبة ، وتغطية الرأس ، والقفازات ، ويغطي الحذاء ، وجهاز تنفس. وينبغي على كل مؤسسة وضع خطة حماية الجهاز التنفسي الخاصة بالتعاون مع موظف في مؤسستهم النظافة الصناعية. في المختبر ، لدينا العديد من أجهزة التنفس الصناعي المتاحة ، بما في ذلك أجهزة التنفس بالطاقة تنقية الهواء (PAPRs) ومزودة - HEPA تصفيتها ، N95 نصف كمامات الوجه. </li></ol> 3. التحضير لمجلس الوزراء السلامة البيولوجية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في BSL3 ، وإعداد مجلس الوزراء السلامة البيولوجية (BSC) من تطهير المياه السطحية ووضع منشفة ورقية غارقة مع حوالي 6 بوصات مطهر من الجو لوحة تنفيس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع حاوية النفايات على اليسار ، وnephlometer الصغيرة وvortexer على اليمين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توضع حلقات بتلقيح ، ونصائح pipetors بجانب منشفة ورقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الرف مع الكائن (في المرق أو المتوسطة الصلبة) و0.5 مكفارلاند القياسية على منشفة ورقية. </li></ol> 4. معايرة nephelometer <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أنبوب زجاجي توين حبة المالحة في nephelometer وتعيين إلى الصفر باستخدام أداة فارغة توين المالحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع 0.5 مكفارلاند القياسية في nephelometer ومعايرة حسب تعليمات الشركة المصنعة. </li></ol> 5. التحضير لقيحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعملون في المستعمرات كشط BSC ، من متوسطة الصلبة باستخدام حلقة عقيمة في الأنبوب المسمى مناسب توين المالحة حبة الزجاج حتى يتم الحصول على ≥ 0.5 مكفارلاند قياسي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تفقد البصر العينة ، وقارن بين لمعيار مكفارلاند. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نموذج الدوامة ل 30-60 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح لقيحة لتسوية لمدة 15 دقيقة (تعيين الموقت). </li></ol> 6. تلقيح لوحة microtiter <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط قيحة مع مرق توين المالحة باستخدام nephelometer معايرة مكفارلاند إلى 0.5 في خطوات 4.1 و 4.2. ويجب الانتهاء من هذا في غضون 30 دقيقة (مواصفات المصنع الواحد). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام pipetter 200 ميكرولتر وLONG غيض الهباء الجوي الماصة المقاومة لإزالة 100 ميكرولتر من اللقاح من الثالثة 03/01 أعلى الأنبوب المالحة توين حبة. تحصين مرق 7H9 Middlebrook. دوامة ببطء مرق 7H9 تلقيح لمدة 20 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة لوحة microtiter AST حزمة من الشركة المصنعة. لا تستخدم إذا كان لالمجففة باللون الأزرق أو في حالة تلف الحزمة احباط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد أنبوب تخفيف 01:50 لاستخدامها لاحقا في التحضير للتخفيف 01:50 بواسطة pipetting 50 ميكرولتر من الماء المعقم في أنبوب العقيمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب بعناية قيحة مرق 7H9 الى الحضيض. تجنب توليد الهباء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان لوحة microtiter AST مع التسمية باتجاهك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام pipetter 12 قناة لإضافة 100 ميكرولتر من اللقاح على كل جانب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير التخفيفات للمستعمرة التهم : <ol type="a" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مستعدة التخفيف 01/01 من سيطرة إيجابية جيدا (H12) من الحلقة 1 streaking ميكرولتر على لوحة 7H10 المسمى &quot;1 / 1&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مستعدة التخفيف 1 / 50 ، فحقن حلقة 1 ميكرولتر من سيطرة إيجابية جيدا (H12) ويحوم عليه في أنبوب مع 50 ميكرولتر من أنبوب المياه أعدت أعلاه. خط 1 ميكرولتر من هذا التخفيف إلى لوحة المسمى &quot;1 / 50&quot;. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطعيم لوحات النقاء من حوض بواسطة pipetting 50 ميكرولتر an آغار الدم على نحو ملائم وصفت لوحة 7H10 ومتتالية للعزلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكانختم لاصقة على لوحة microtiter AST. اضغط بقوة على كل بئر كافية لضمان ختم باستخدام الظهر الأبيض من الختم. تجنب التجاعيد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطهير لوحة microtiter بواسطة مسحه بمنشفة مبللة ورقة مع مطهر مبيد للعصيات السلية ومكان لوحة microtiter في كيس من البلاستيك وختم وثيقة مع الحرارة أو الشريط. <ol type="a" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكيس البلاستيكي بمثابة حاوية الثانوية لضمان أن يرد كل المرق يجب أن يكون هناك تسرب أو انسكاب من لوحة الأولية. </li></ol></li></ol> 7. تطهير المواد والسلامة البيولوجية لمجلس الوزراء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتجنب إنتاج الهباء ، ومكان آخر على أدنى مستوى أعلى من أدنى مستوى تحصين قبل وضعه في وعاء بلطف تجاهل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطهير جميع المواد بما في ذلك nephlometer ، vortexer ، وألواح وأنابيب وغيرها من خلال المسح بمطهر مبيد للعصيات السلية وانتظر الوقت المناسب لضمان التعقيم وفقا لتعليمات الشركة الصانعة قبل إزالة من ش. على سبيل المثال ، Prospray ، ومطهر مبيد للعصيات السلية التي نستخدمها ، ويتطلب 15 دقيقة لقتل متفطرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الحاوية تجاهل في حقيبة واقية وختم قبل التعقيم. </li></ol> 8. حضانة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي لوحات المحتضنة مع وسائل الإعلام باستمرار ، وينبغي الحرص على تجنب إراقة أو أي سائل الرش. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لوحة microtiter AST اللوحة ، ولوحات 7H10 آغار الدم في الحاضنة 35-37 درجة مئوية مع 5-10 ٪ أكسيد الكربون CO 2 مع 5-10 ٪ 2 في المختبر BSL2. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في المختبر لدينا ، وهذا أمر مقبول لأن لوحة جيدا مختومة ومختومة داخل حقيبة بلاستيكية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي أن تكون مكدسة لا يزيد عن 2 microtiter وحات AST في الحاضنة وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. </li></ol> 9. ممثل النتائج تفسير النتائج : يمكن قراءة لوحات مختومة AST microtiter يدويا باستخدام مرآة كمساعدة أو مع قارئ لوحة الآلي مثل Vizion (TREK تشخيص). يمكن فحص لوحات أقرب وقت بعد 7 أيام من التلقيح. فحص الآبار سيطرة على النمو في المناصب H11 و H12 لتحديد ما إذا كانت إيجابية (أي ، لديها ودائع من الخلايا في أسفل البئر). إذا آبار مراقبة النمو ليست إيجابية ، reincubate لوحة وإعادة النظر بشكل دوري (على سبيل المثال ، يوم 10 ، 14 يوما) حتى آبار مراقبة نمو إيجابية. <ol type="a" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرآة نصها كما يلي : <ol type="i" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مختومة مكان AST microtiter وحة على المنبر ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قراءة آبار مراقبة النمو بعد 7 أيام من الحضانة ، وإذا كان هذا هو ، reincubate السلبية لوحة microtiter AST ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كانت الضوابط نمو مقبولة ، ثم قراءة الآبار التي تحتوي على المخدرات. عن كل دواء ، سجل التخفيف الأولى التي لا يوجد لديه النمو مقارنة مع الآبار المخدرات سيطرة على النمو. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> النمو كما يبدو أو كما التعكر وديعة من الخلايا في أسفل البئر. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صك القراءة : اتبع تعليمات المصنعين ، والتعليمات الواردة أدناه هي مثال على الكيفية التي سيتم الانتهاء من القراءة مع منصة Vizion : <ol type="i" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل الدخول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام &quot;MYCOTB&quot; لوحة AST البرمجيات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان لوحة مختومة مع الباركود التي تواجه المستخدم. النمو كما يبدو أو كما التعكر وديعة من الخلايا في أسفل البئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قراءة ضوابط النمو ، وإذا كان هذا هو ، reincubate السلبية لوحة microtiter AST ، وإذا قرأ لوحة إيجابية عن طريق لمس الشاشة مع البئر الأول من كل العقاقير التي لا تظهر النمو. </li></ol></li></ol> قراءة لوحات النقاء. وينبغي لوحة آغار الدم لا تظهر أي نمو بعد 48 ساعة ، والنقاء لوحة 7H10 ينبغي أن يكون النمو متموجة من نوع كائن واحد. إذا كانت ملوثة ، واختبار microtiter AST يحتاج إلى تكرار من ثقافة نقية. حساب التهم مستعمرة من التحكم به بشكل جيد إيجابية في الجدول أدناه : مستعمرة الكونت مفتاح <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> عد المستعمرات # على لوحة كتب عليها &quot;01/01&quot; </td><td> عد المستعمرات # على لوحة المسمى &quot;1 / 50&quot; </td><td> قيحة الكونت مستعمرة (كفو / مل) </td></tr><tr><td> &lt;50 </td><td> 0 </td><td> &lt;5 X 10 4 </td></tr><tr><td> 5-10 </td><td> 0-2 </td><td> 5 X 04 حتي 01 أكتوبر X 10 5 </td></tr><tr><td> &gt; 100 </td><td> ≤ 10 </td><td> 1 X 05 حتي 05 أكتوبر X 10 5 </td></tr><tr><td> &gt; 100 </td><td> &gt; 10 </td><td> &gt; 5 X 10 5 </td></tr></tbody></table> قد يكون هناك شبه زائدة مع أمينوساليسيليك حامض في بعض سلالات المتفطرة tuberculoSIS. ويمكن تفسير هذا من خلال النظر في جميع الآبار التي الكريات واستخدام أول بئر يحتوي على نفس حجم بيليه والتخفيف المقبل ، حيث نقطة نهاية. المقاومة هي نادرة مع هذا الدواء. <img src="/files/ftp_upload/3094/3094fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> الشكل 1. النتائج ممثل باستخدام لوحة MYCOTB. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اختصار المخدرات </td><td> دواء </td><td> μ MIC / مل </td></tr><tr><td> OFL </td><td> أوفلوكساسين </td><td> 16 </td></tr><tr><td> MXF </td><td> موكسيفلوكساسين </td><td> 8 </td></tr><tr><td> RIF </td><td> ريفامبين </td><td> &gt; 16 </td></tr><tr><td> AMI </td><td> الأميكاسين </td><td> 0.5 </td></tr><tr><td> STR </td><td> الستربتومايسين عقار طبي </td><td> 16 </td></tr><tr><td> RFB </td><td> rifabutin </td><td> 8 </td></tr><tr><td> PAS </td><td> ف أمينوساليسيليك حمض </td><td> ≤ 0.5 </td></tr><tr><td> ETH </td><td> إيثيوناميد </td><td> 5 </td></tr><tr><td> مراكز الشباب الإصلاحية </td><td> سيكلوسيرين </td><td> 4 </td></tr><tr><td> INH </td><td> إيزونيازيد </td><td> 2 </td></tr><tr><td> KAN </td><td> الكاناميسين </td><td> 1.2 </td></tr><tr><td> الإدارة الانتخابية </td><td> إيثامبوتول </td><td> 4.0 </td></tr></tbody></table>

<ol>
	<li>Wengenack, N., Hall, L., Labombardi, V., Parrish, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+New+Sensititre+(MYCOTB)+MIC+Plate+for+the+Susceptibility+Testing+of+Mycobacterium+tuberculosis+(Mtb)+to+First+and+Second+Line+Drugs.">Evaluation of the New Sensititre (MYCOTB) MIC Plate for the Susceptibility Testing of Mycobacterium tuberculosis (Mtb) to First and Second Line Drugs.</a> , (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HHS+Publication+No.+(CDC)+21-112:+Biosafety+in+Microbiological+and+Biomedical+Laboratories+(BMBL).">HHS Publication No. (CDC) 21-112: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL).</a> U.S. Department of Health and Human Services Centers for Disease and Preventions. , (2009).</li><li>Morcillo, N., Imperiale, B., Digiulio, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+MGIT+960+and+the+colorimetric-based+method+for+tuberculosis+drug+susceptibility+testing.">Evaluation of MGIT 960 and the colorimetric-based method for tuberculosis drug susceptibility testing.</a> Int J Tuberc Lung Dis. 14, 1169-1175 (2010).</li><li>Bemer, P., Bodmer, T., Munzinger, J., Perrin, M., Vincent, V., Drugeon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicenter+Evaluation+of+the+MB/BACT+System+for+Susceptibility+Testing+of+Mycobacterium+tuberculosis.">Multicenter Evaluation of the MB/BACT System for Susceptibility Testing of Mycobacterium tuberculosis.</a> J Clin Microbiol. 42, 1030-1034 (2004).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SENSITITRE+MYCOTB+Susceptibility+Plate:+For+Mycobacterium+Susceptibility+Testing.">SENSITITRE MYCOTB Susceptibility Plate: For Mycobacterium Susceptibility Testing.</a> Product Insert. , (2010).</li><li>CLSI. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Susceptiblity Testing of Mycobacteria, Nocardia, and Other Aerobic Actinomycetes; Approved Standard. Document M24-A. , (2003).</li><li>Sullivan, N., Sotos, J., Anhalt, K., Allen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+results+from+a+new+TREK+Sensititre+Mycobacterium+tuberculosis+MIC+plate+(MYCOTB).">Preliminary results from a new TREK Sensititre Mycobacterium tuberculosis MIC plate (MYCOTB).</a> , (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VersaTREK+MYCO+SUSCEPTIBLITY+KIT.">VersaTREK MYCO SUSCEPTIBLITY KIT.</a> Product insert. , 7115-7160 (2008).</li><li>Parrish, N. M., Carroll, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+the+Clinical+Mycobacteriology+Laboratory+in+the+Diagnosis+and+Management+of+Tuberculosis+in+Low+Prevalance+Settings.">The Role of the Clinical Mycobacteriology Laboratory in the Diagnosis and Management of Tuberculosis in Low Prevalance Settings.</a> J Clin Microbiol. , (2010).</li><li>Kam, K. M., Sloutsky, A., Yip, C. W., Bulled, N., Zingol, M., Espinal, M., Kim, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+critical+concentrations+of+second-line+anti-tuberculosis+drugs+with+clinical+and+microbiological+relevance.">Determination of critical concentrations of second-line anti-tuberculosis drugs with clinical and microbiological relevance.</a> Int J Tubercl Lung Dis. 14, 282-288 (2010).</li><li>Woods, G. L., Warren, N. G., Inderlied, C. B., Murray, P. R., Barron, E. J., Jorgensen, J. H., Landry, M. L., Pfaller, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+Test+Methods:+Mycobacteria,+Nocardia,+and+Other+Actinomycetes.">Susceptibility Test Methods: Mycobacteria, Nocardia, and Other Actinomycetes.</a> Manual of Clinical Microbiology. , 1223-1247 (2007).</li><li>Bergmann, J. S., Woods, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+ESP+Culture+System+II+for+Testing+Susceptibilities+of+Mycobacterium+tuberculosis+Isolates+to+Four+Primary+Antituberculosis+Drugs.">Evaluation of the ESP Culture System II for Testing Susceptibilities of Mycobacterium tuberculosis Isolates to Four Primary Antituberculosis Drugs.</a> J Clin Microbiol. 36, 2940-2943 (1998).</li></ol>

لا يوجد شيء في الكشف عنها.

ويرد مثال لوحة microtiter AST الذي يتحكم نمو إيجابية في الشكل 1 ، وحلقت فوق نقطة النهاية MIC (ميكروغرام / مل) عن كل دواء. وأشارت دراسة أجريت في المختبر لدينا أن لوحة microtiter AST الأسلوب هو ما يعادل الذهب القياسية آغار طريقة لاختبار نسبة التعرض لمرض السل المتفطرة. وتم الحصول على نتائج أسرع التقارير مع لوحة microtiter microtiter AST بالمقارنة مع نسبة أغار الطريقة التقليدية مع التفسير النهائي للوحة microtiter AST وأغار على طريقة نسبة 14 و 21 يوما ، لوحة respectively.The microtiter AST في الاستفادة من التجارب الأولى و عقاقير الخط الثاني في وقت واحد والتي يمكن أن تساعد على منع التأخير المفرط مع السلالات المقاومة للعقاقير. لوحة microtiter AST هو أيضا أسهل بكثير لإعداد وقراءة من الألغام المضادة للأفراد ، ويمكن استخدامها على حد سواء مرآة اليدوي ونظام شبه الآلي مثل VIZION لقراءة لوحات. قد توفر قيمة MIC لاختبار السل مقاومة تقديم معلومات جديدة وقيمة للأطباء النسبي لقيمة تركيز الحرجة التقليدية ، وخصوصا بالنسبة لأولئك مع حساسية العزلات &quot;الشريط الحدودي&quot;.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th></tr><tr><td> AST لوحات microtiter وختم لاصقة </td><td> TREK تشخيص ، كليفلاند ، أوهايو </td><td> MYCOTB </td></tr><tr><td> مكفارلاند 0.5 القياسية </td><td> TREK تشخيص ، كليفلاند ، أوهايو </td><td> E1041 </td></tr><tr><td> Middlebrook وحات 7H10 </td><td> الصياد </td><td></td></tr><tr><td> لوحات الدم آجار </td><td> الصياد </td><td></td></tr><tr><td> معقمة حلقات 1 ميكرولتر </td><td> الصياد </td><td></td></tr><tr><td> حلقات العقيمة 10 ميكرولتر </td><td> الصياد </td><td></td></tr><tr><td> Sensititre المالحة توين الزجاج حبة مرق </td><td> TREK تشخيص ، كليفلاند ، أوهايو </td><td> 27143 </td></tr><tr><td> 7H9 OADC مرق </td><td> TREK تشخيص ، كليفلاند ، أوهايو </td><td> T3440 </td></tr><tr><td> نصائح الماصة طويلة </td><td> الصياد </td><td></td></tr><tr><td> معقمة المنخفضات </td><td> TREK تشخيص ، كليفلاند ، أوهايو </td><td></td></tr><tr><td> السل M. </td><td> ATCC </td><td> 27294 </td></tr><tr><td> Pipeters : 1000 ، 200 ، 20μL </td><td> الصياد </td><td></td></tr><tr><td> نصائح 1000 ، 20 ، 20 ميكرولتر </td><td> الصياد </td><td></td></tr><tr><td> الأقنية Pipetter </td><td> الصياد </td><td></td></tr><tr><td> حاضنة ثاني ٪ 05-10 فبراير </td><td> الصياد </td><td></td></tr><tr><td> أكياس بلاستيكية صغيرة ، CO 2 نفاذية </td><td> بولي بلاستيك ، ديلانو ، والسلطة الفلسطينية </td><td></td></tr><tr><td> مطهر السل (مثل ProSpray C - 60) </td><td> Certol الدولية ، والتجارة ، مدينة ، CO </td><td> PSC60/32 </td></tr><tr><td> صندوق مرآة قارئ </td><td> الصياد </td><td></td></tr></tbody></table>

antimicrobial susceptibility testing of mycobacterium tuberculosis complex for first and second line drugs by broth dilution in a microtiter plate format

الكشف السريع عن مقاومة الجراثيم للأدوية مهم في الجهود الرامية إلى السيطرة على زيادة انتشار السل المقاوم للالمتفطرة (MTB). وقد جرت العادة على إجراء اختبارات الحساسية للمضادات الميكروبات (AST) من MTB يؤديها أغار الطريقة من نسبة أو عن طريق اختبار macrobroth على صك مثل BACTEC (بيكتون ديكنسون ، سباركس ، MD) ، VersaTREK (TREK تشخيص ، كليفلاند ، أوهايو) أو جرثومة / ALERT (bioMérieux ، Hazelwood ، MO). الأسلوب نسبة آغار ، في حين تعتبر &quot;الذهب&quot; معيار AST ، هو العمل المكثف ويتطلب حساب المقاومة عن طريق إجراء تعداد المستعمرة المحتوية على أجار المخدرات بالمقارنة مع أجار خالية من المخدرات. إذا كان هناك نمو ≥ 1 ٪ على المدى المتوسط ​​التي تحتوي على المخدرات بالمقارنة مع المتوسط ​​خال من المخدرات ، ويعتبر الكائن مقاومة لهذا الدواء. أساليب القياس وmacrobroth تتطلب اختبار نقطة فاصل (&quot;حرجة&quot;) تركيزات المخدرات للأدوية الخط الأول (أيزونيازيد ، الإيثامبوتول ، ريفامبين ، وبيرازيناميد). وصف الأسلوب هنا هو متاح تجاريا في 96 لوحة تنسيق جيد microtiter [MYCOTB (TREK تشخيص)] ، ويحتوي على تركيزات متزايدة من 12 مضادات الميكروبات المستخدمة لعلاج السل بما في ذلك على حد سواء الأولى (أيزونيازيد ، ريفامبين ، الإيثامبوتول) وأدوية الخط الثاني (الأميكاسين ، سيكلوسيرين ، إيثيوناميد ، الكانامايسين ، موكسيفلوكساسين ، أوفلوكساسين ، شبه أمينوساليسيليك حامض ، rifabutin ، والستربتوميسين). بيرازيناميد ، لا يتم تضمين دواء السطر الأول ، في لوحة microtiter نظرا لحاجتها لظروف اختبار الحمضية. مزايا النظام microtiter تشمل كلا من سهولة انشاء وأسرع بدوره حول الوقت (14 يوما) مقارنة مع نسبة آغار التقليدية (21 يوما). بالإضافة ، يمكن تعيين ما يصل من لوحة قيحة أعدت باستخدام مرق أو متوسطة الصلبة. منذ شكل لوحة microtiter هو جديد ومنذ MTB تحديات سلامة فريدة من نوعها في المختبرات ، وهذا البروتوكول سوف تصف كيفية الإعداد بأمان ، واحتضان وقراءة لوحة microtiter.

Watch this Scientific Journal Video about Antimicrobial Susceptibility Testing of Mycobacterium Tuberculosis Complex for First and Second Line Drugs by Broth Dilution in a Microtiter Plate Format at J

Antimicrobial Susceptibility Testing of Mycobacterium Tuberculosis Complex for First and Second Line Drugs by Broth Dilution in a Microtiter Plate Format

اختبار الحساسية للمضادات الميكروبات من المتفطرة السل يشكل تحديا لكنها حاسمة لرعاية المرضى. هذا الشكل لوحة microtiter يقدم اختبار مضاد المتفطرات 12 المخدرات ويوفر الحد الأدنى من تركيز المثبطة (MIC) القيم ، والتي سوف تساعد في العلاج المناسب.

اختبار الحساسية للمضادات الميكروبات مجمع المتفطرة السل للأدوية الخط الأول والثاني عن طريق التخفيف في شكل حساء بلايت Microtiter

The rapid detection of antimicrobial resistance is important in the effort to control the increase in resistant Mycobacterium 
tuberculosis (Mtb). ...

antimicrobial-susceptibility-testing-mycobacterium-tuberculosis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

38.0K Views.  Mayo Clinic. اختبار الحساسية للمضادات الميكروبات من المتفطرة السل يشكل تحديا لكنها حاسمة لرعاية المرضى. هذا الشكل لوحة microtiter يقدم اختبار مضاد المتفطرات 12 المخدرات ويوفر الحد الأدنى من تركيز المثبطة (MIC) القيم ، والتي سوف تساعد في العلاج المناسب.

Video: Antimicrobial Susceptibility Testing of Mycobacterium Tuberculosis Complex for First and Second Line Drugs by Broth Dilution in a Microtiter Plate Format

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third most common infection in US hospitals. Different manifestations of candidiasis are associated with biofilm formation, both on host tissues and/or medical devices (i.e. catheters). Biofilm formation carries negative clinical implications, as cells within the biofilms are protected from host immune responses and from the action of antifungals. We have developed a simple, fast and robust in vitro model for the formation of C. albicans biofilms using 96 well microtiter-plates, which can also be used for biofilm antifungal susceptibility testing. The readout of this assay is colorimetric, based on the reduction of XTT (a tetrazolium salt) by metabolically active fungal biofilm cells. A typical experiment takes approximately 24 h for biofilm formation, with an additional 24 h for antifungal susceptibility testing. Because of its simplicity and the use of commonly available laboratory materials and equipment, this technique democratizes biofilm research and represents an important step towards the standardization of antifungal susceptibility testing of fungal biofilms.

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

We describe a simple, rapid and robust method for the formation of Candida albicans biofilms using 96 well microtiter plates and its utility in antifungal susceptibility testing of cells within biofilms.

96 ألف لوحة حسنا Microtiter القائم على أسلوب تشكيل لمراقبة واختبار قابلية مضاد المبيضات البيض الأغشية الحيوية

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

Sample Preparation of Mycobacterium tuberculosis Extracts for Nuclear Magnetic Resonance Metabolomic Studies

Mycobacterium tuberculosis is a major cause of mortality in human beings on a global scale. The emergence of both multi- (MDR) and extensively-(XDR) drug-resistant strains threatens to derail current disease control efforts. Thus, there is an urgent need to develop drugs and vaccines that are more effective than those currently available. The genome of M. tuberculosis has been known for more than 10 years, yet there are important gaps in our knowledge of gene function and essentiality. Many studies have since used gene expression analysis at both the transcriptomic and proteomic levels to determine the effects of drugs, oxidants, and growth conditions on the global patterns of gene expression. Ultimately, the final response of these changes is reflected in the metabolic composition of the bacterium including a few thousand small molecular weight chemicals. Comparing the metabolic profiles of wild type and mutant strains, either untreated or treated with a particular drug, can effectively allow target identification and may lead to the development of novel inhibitors with anti-tubercular activity. Likewise, the effects of two or more conditions on the metabolome can also be assessed. Nuclear magnetic resonance (NMR) is a powerful technology that is used to identify and quantify metabolic intermediates. In this protocol, procedures for the preparation of M. tuberculosis cell extracts for NMR metabolomic analysis are described. Cell cultures are grown under appropriate conditions and required Biosafety Level 3 containment,1 harvested, and subjected to mechanical lysis while maintaining cold temperatures to maximize preservation of metabolites. Cell lysates are recovered, filtered sterilized, and stored at ultra-low temperatures. Aliquots from these cell extracts are plated on Middlebrook 7H9 agar for colony-forming units to verify absence of viable cells. Upon two months of incubation at 37 &deg;C, if no viable colonies are observed, samples are removed from the containment facility for downstream processing. Extracts are lyophilized, resuspended in deuterated buffer and injected in the NMR instrument, capturing spectroscopic data that is then subjected to statistical analysis. The procedures described can be applied for both one-dimensional (1D) 1H NMR and two-dimensional (2D) 1H-13C NMR analyses. This methodology provides more reliable small molecular weight metabolite identification and more reliable and sensitive quantitative analyses of cell extract metabolic compositions than chromatographic methods. Variations of the procedure described following the cell lysis step can also be adapted for parallel proteomic analysis.

Sample Preparation of Mycobacterium tuberculosis Extracts for Nuclear Magnetic Resonance Metabolomic Studies

The metabolomic profile of Mycobacterium tuberculosis is determined after growth in broth cultures. Conditions can be varied to test the effects of nutritional supplements, oxidants, and anti-tuberculosis agents on the metabolic profile of this microorganism. Procedure for extract preparation is applicable for both 1D 1H and 2D 1H-13C NMR analyses.

تحضير العينة من<em&gt; المتفطرة السلية</em&gt; خلاصات لدراسات النووية المغناطيسي الرنين Metabolomic

Mycobacterium tuberculosis is a major cause of mortality in human beings on a global scale. The emergence of both multi- (MDR) and extensively-(XDR) ...

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Mycobacterium tuberculosis, the etiologic agent of human tuberculosis, has an extraordinary ability to survive against environmental stresses including antibiotics. Although stress tolerance of M. tuberculosis is one of the likely contributors to the 6-month long chemotherapy of tuberculosis 1, the molecular mechanisms underlying this characteristic phenotype of the pathogen remain unclear. Many microbial species have evolved to survive in stressful environments by self-assembling in highly organized, surface attached, and matrix encapsulated structures called biofilms 2-4. Growth in communities appears to be a preferred survival strategy of microbes, and is achieved through genetic components that regulate surface attachment, intercellular communications, and synthesis of extracellular polymeric substances (EPS) 5,6. The tolerance to environmental stress is likely facilitated by EPS, and perhaps by the physiological adaptation of individual bacilli to heterogeneous microenvironments within the complex architecture of biofilms 7.
In a series of recent papers we established that M. tuberculosis and Mycobacterium smegmatis have a strong propensity to grow in organized multicellular structures, called biofilms, which can tolerate more than 50 times the minimal inhibitory concentrations of the anti-tuberculosis drugs isoniazid and rifampicin 8-10. M. tuberculosis, however, intriguingly requires specific conditions to form mature biofilms, in particular 9:1 ratio of headspace: media as well as limited exchange of air with the atmosphere 9. Requirements of specialized environmental conditions could possibly be linked to the fact that M. tuberculosis is an obligate human pathogen and thus has adapted to tissue environments. In this publication we demonstrate methods for culturing M. tuberculosis biofilms in a bottle and a 12-well plate format, which is convenient for bacteriological as well as genetic studies. We have described the protocol for an attenuated strain of M. tuberculosis, mc27000, with deletion in the two loci, panCD and RD1, that are critical for in vivo growth of the pathogen 9. This strain can be safely used in a BSL-2 containment for understanding the basic biology of the tuberculosis pathogen thus avoiding the requirement of an expensive BSL-3 facility. The method can be extended, with appropriate modification in media, to grow biofilm of other culturable mycobacterial species.
Overall, a uniform protocol of culturing mycobacterial biofilms will help the investigators interested in studying the basic resilient characteristics of mycobacteria. In addition, a clear and concise method of growing mycobacterial biofilms will also help the clinical and pharmaceutical investigators to test the efficacy of a potential drug.

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Mycobacterium tuberculosis forms drug tolerant biofilms when cultured in certain conditions. Here we describe methods for culturing M. tuberculosis biofilms and determining the frequency of drug tolerant persisters. These protocols will be useful for further studies into the mechanisms of drug tolerance in M. tuberculosis.

نمو المتفطرة السلية الأغشية الحيوية

Mycobacterium tuberculosis, the etiologic agent of human tuberculosis, has an extraordinary ability to survive against environmental stresses including ...

Demonstrating a Multi-drug Resistant Mycobacterium tuberculosis Amplification Microarray

Simplifying microarray workflow is a necessary first step for creating MDR-TB microarray-based diagnostics that can be routinely used in lower-resource environments. An amplification microarray combines asymmetric PCR amplification, target size selection, target labeling, and microarray hybridization within a single solution and into a single microfluidic chamber. A batch processing method is demonstrated with a 9-plex asymmetric master mix and low-density gel element microarray for genotyping multi-drug resistant Mycobacterium tuberculosis (MDR-TB). The protocol described here can be completed in 6 hr and provide correct genotyping with at least 1,000 cell equivalents of genomic DNA. Incorporating on-chip wash steps is feasible, which will result in an entirely closed amplicon method and system. The extent of multiplexing with an amplification microarray is ultimately constrained by the number of primer pairs that can be combined into a single master mix and still achieve desired sensitivity and specificity performance metrics, rather than the number of probes that are immobilized on the array. Likewise, the total analysis time can be shortened or lengthened depending on the specific intended use, research question, and desired limits of detection. Nevertheless, the general approach significantly streamlines microarray workflow for the end user by reducing the number of manually intensive and time-consuming processing steps, and provides a simplified biochemical and microfluidic path for translating microarray-based diagnostics into routine clinical practice.

Demonstrating a Multi-drug Resistant Mycobacterium tuberculosis Amplification Microarray

An amplification microarray combines asymmetric PCR amplification and microarray hybridization into a single chamber, which significantly streamlines microarray workflow for the end user. Simplifying microarray workflow is a necessary first step for creating microarray-based diagnostics that can be routinely used in lower-resource environments.

مما يدل على متعدد المخدرات مقاومة<em&gt; السل المتفطرة</em&gt; التضخيم ميكروأري

Simplifying microarray workflow is a necessary first step for creating MDR-TB microarray-based diagnostics that can be routinely used in lower-resource ...

Preparation of a Blood Culture Pellet for Rapid Bacterial Identification and Antibiotic Susceptibility Testing

Bloodstream infections and sepsis are a major cause of morbidity and mortality. The successful outcome of patients suffering from bacteremia depends on a rapid identification of the infectious agent to guide optimal antibiotic treatment. The analysis of Gram stains from positive blood culture can be rapidly conducted and already significantly impact the antibiotic regimen. However, the accurate identification of the infectious agent is still required to establish the optimal targeted treatment. We present here a simple and fast bacterial pellet preparation from a positive blood culture that can be used as a sample for several essential downstream applications such as identification by MALDI-TOF MS, antibiotic susceptibility testing (AST) by disc diffusion assay or automated AST systems and by automated PCR-based diagnostic testing. The performance of these different identification and AST systems applied directly on the blood culture bacterial pellets is very similar to the performance normally obtained from isolated colonies grown on agar plates. Compared to conventional approaches, the rapid acquisition of a bacterial pellet significantly reduces the time to report both identification and AST. Thus, following blood culture positivity, identification by MALDI-TOF can be reported within less than 1 hr whereas results of AST by automated AST systems or disc diffusion assays within 8 to 18 hr, respectively. Similarly, the results of a rapid PCR-based assay can be communicated to the clinicians less than 2 hr following the report of a bacteremia. Together, these results demonstrate that the rapid preparation of a blood culture bacterial pellet has a significant impact on the identification and AST turnaround time and thus on the successful outcome of patients suffering from bloodstream infections.

A rapid bacterial pellet preparation from a positive blood culture can be used as a sample for applications such as identification by MALDI-TOF, Gram staining, antibiotic susceptibility testing and PCR-based test. The results can be rapidly communicated to clinicians to improve the outcome of patients suffering from bloodstream infections.

إعداد ثقافة بيليه الدم الجرثومي السريع لتحديد واختبار حساسية المضادات الحيوية

Bloodstream infections and sepsis are a major cause of morbidity and mortality. The successful outcome of patients suffering from bacteremia depends on a ...

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

Antimicrobial susceptibility testing (AST) is performed to assess the in vitro activity of antimicrobial agents against various bacteria. The AST results, which are expressed as minimum inhibitory concentrations (MICs) are used in research for antimicrobial development and monitoring of resistance development and in the clinical setting for antimicrobial therapy guidance. Dalbavancin is a semi-synthetic lipoglycopeptide antimicrobial agent that was approved in May 2014 by the Food and Drug Administration (FDA) for the treatment of acute bacterial skin and skin structure infections caused by Gram-positive organisms. The advantage of dalbavancin over current anti-staphylococcal therapies is its long half-life, which allows for once-weekly dosing. Dalbavancin has activity against Staphylococcus aureus (including both methicillin-susceptible S. aureus [MSSA] and methicillin-resistant S. aureus [MRSA]), coagulase-negative staphylococci, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus anginosus group, &#946;-hemolytic streptococci and vancomycin susceptible enterococci. Similar to other recent lipoglycopeptide agents, optimization of CLSI and ISO broth susceptibility test methods includes the use of dimethyl sulfoxide (DMSO) as a solvent when preparing stock solutions and polysorbate 80 (P80) to alleviate adherence of the agent to plastic. Prior to the clinical studies and during the initial development of dalbavancin, susceptibility studies were not performed with the use of P-80 and MIC results tended to be 2-4 fold higher and similarly higher MIC results were obtained with the agar dilution susceptibility method. Dalbavancin was first included in CLSI broth microdilution methodology tables in 2005 and amended in 2006 to clarify use of DMSO and P-80. The broth microdilution (BMD) procedure shown here is specific to dalbavancin and is in accordance with the CLSI and ISO methods, with step-by-step detail and focus on the critical steps added for clarity.

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

Here, we present a protocol for determination of dalbavancin susceptibility of clinically relevant Gram-positive bacteria using a broth microdilution reference methodology.

مرجع مرق الطريقة Microdilution لDalbavancin<em&gt; في المختبر</em&gt; حساسية اختبار من البكتيريا التي تنمو هوائيا

Antimicrobial susceptibility testing (AST) is performed to assess the in vitro activity of antimicrobial agents against various bacteria. The AST results, ...

A 3D Human Lung Tissue Model for Functional Studies on Mycobacterium tuberculosis Infection

Tuberculosis (TB) still holds a major threat to the health of people worldwide, and there is a need for cost-efficient but reliable models to help us understand the disease mechanisms and advance the discoveries of new treatment options. In vitro cell cultures of monolayers or co-cultures lack the three-dimensional (3D) environment and tissue responses. Herein, we describe an innovative in vitro model of a human lung tissue, which holds promise to be an effective tool for studying the complex events that occur during infection with Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis). The 3D tissue model consists of tissue-specific epithelial cells and fibroblasts, which are cultured in a matrix of collagen on top of a porous membrane. Upon air exposure, the epithelial cells stratify and secrete mucus at the apical side. By introducing human primary macrophages infected with M. tuberculosis to the tissue model, we have shown that immune cells migrate into the infected-tissue and form early stages of TB granuloma. These structures recapitulate the distinct feature of human TB, the granuloma, which is fundamentally different or not commonly observed in widely used experimental animal models. This organotypic culture method enables the 3D visualization and robust quantitative analysis that provides pivotal information on spatial and temporal features of host cell-pathogen interactions. Taken together, the lung tissue model provides a physiologically relevant tissue micro-environment for studies on TB. Thus, the lung tissue model has potential implications for both basic mechanistic and applied studies. Importantly, the model allows addition or manipulation of individual cell types, which thereby widens its use for modelling a variety of infectious diseases that affect the lungs.

A 3D Human Lung Tissue Model for Functional Studies on Mycobacterium tuberculosis Infection

Human tuberculosis infection is a complex process, which is difficult to model in vitro. Here we describe a novel 3D human lung tissue model that recapitulates the dynamics that occur during infection, including the migration of immune cells and early granuloma formation in a physiological environment.

نموذج الأنسجة 3D الرئة الإنسان للدراسات وظيفية على<em&gt; المتفطرة السلية</em&gt; العدوى

Tuberculosis (TB) still holds a major threat to the health of people worldwide, and there is a need for cost-efficient but reliable models to help us ...

System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis, the causative agent of tuberculosis (TB), is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. With the increased spread of multi drug-resistant TB (MDR-TB), there is a real urgency to develop new therapeutic strategies against M. tuberculosis infections. Traditionally, compounds are evaluated based on their antibacterial activity under in vitro growth conditions in broth; however, results are often misleading for intracellular pathogens like M. tuberculosis since in-broth phenotypic screening conditions are significantly different from the actual disease conditions within the human body. Screening for inhibitors that work inside macrophages has been traditionally difficult due to the complexity, variability in infection, and slow replication rate of M. tuberculosis. In this study, we report a new approach to rapidly assess the effectiveness of compounds on the viability of M. tuberculosis in a macrophage infection model. Using a combination of a cytotoxicity assay and an in-broth M. tuberculosis viability assay, we were able to create a screening system that generates a comprehensive analysis of compounds of interest. This system is capable of producing quantitative data at a low cost that is within reach of most labs and yet is highly scalable to fit large industrial settings.

System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis

We have developed a modular high-throughput screening system for discovering novel compounds against Mycobacterium tuberculosis, targeting intracellular and in-broth growing bacteria as well as cytotoxicity against the mammalian host cell.

نظام لفعالية والسمسة فحص مثبطات استهداف بين الخلايا<em&gt; المتفطرة السلية</em

Mycobacterium tuberculosis, the causative agent of tuberculosis (TB), is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. With the increased spread ...

Analysis of 18FDG PET/CT Imaging as a Tool for Studying Mycobacterium tuberculosis Infection and Treatment in Non-human Primates

Mycobacterium tuberculosis remains the number one infectious agent in the world today. With the emergence of antibiotic resistant strains, new clinically relevant methods are needed that evaluate the disease process and screen for potential antibiotic and vaccine treatments. Positron Emission Tomography/Computed Tomography (PET/CT) has been established as a valuable tool for studying a number of afflictions such as cancer, Alzheimer&#39;s disease, and inflammation/infection. Outlined here are a number of strategies that have been employed to evaluate PET/CT images in cynomolgus macaques that are infected intrabronchially with low doses of M. tuberculosis. Through evaluation of lesion size on CT and uptake of 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) in lesions and lymph nodes in PET images, these described methods show that PET/CT imaging can predict future development of active versus latent disease and the propensity for reactivation from a latent state of infection. Additionally, by analyzing the overall level of lung inflammation, these methods determine antibiotic efficacy of drugs against M. tuberculosis in the most clinically relevant existing animal model. These image analysis methods are some of the most powerful tools in the arsenal against this disease as not only can they evaluate a number of characteristics of infection and drug treatment, but they are also directly translatable to a clinical setting for use in human studies.

Analysis of 18FDG PET/CT Imaging as a Tool for Studying Mycobacterium tuberculosis Infection and Treatment in Non-human Primates

Here, we present a protocol to describe the analysis of 18F-FDG PET/CT imaging in non-human primates that have been infected with M. tuberculosis to study disease process, drug treatment, and disease reactivation.

تحليل 18"فدج التصوير" PET/CT كأداة لدراسة بكتريا السل العدوى والعلاج في الإنسان عدم الرئيسات

Mycobacterium tuberculosis remains the number one infectious agent in the world today. With the emergence of antibiotic resistant strains, new clinically ...

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by fluorescence or bioluminescence. We utilize BlaC, an enzyme expressed constitutively by all M. tuberculosis strains. REF allows rapid quantification of bacteria in lungs of infected mice. The same group of mice can be imaged at many time points, greatly reducing costs, enumerating bacteria more quickly, allowing novel observations in host-pathogen interactions, and increasing statistical power, since more animals per group are readily maintained. REF is extremely sensitive due to the catalytic nature of the BlaC enzymatic reporter and specific due to the custom flourescence resonance energy transfer (FRET) or fluorogenic substrates used. REF does not require recombinant strains, ensuring normal host-pathogen interactions. We describe the imaging of M. tuberculosis infection using a FRET substrate with maximal emission at 800 nm. The wavelength of the substrate allows sensitive deep tissue imaging in mammals. We will outline aerosol infection of mice with M. tuberculosis, anesthesia of mice, administration of the REF substrate, and optical imaging. This method has been successfully applied to evaluating host-pathogen interactions and efficacy of antibiotics targeting M. tuberculosis.

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

We describe the optical imaging of mice infected with Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) using reporter enzyme fluorescence (REF). This protocol facilitates the sensitive and specific detection of M. tuberculosis in pre-clinical animal models for pathogenesis, therapeutics and vaccine research.

تصوير بكتريا السل في الفئران مع "مراسل إنزيم الأسفار"

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by ...