وأيد هذا العمل من قبل منحة DK078732 من المعاهد الوطنية للصحة (لPTF).

1. الفيروسة الغدانية تنبيغ والتثقيف من الجزر الجرذ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 6-جيدا لوحة ثقافة غير الأنسجة المغلفة بإضافة 2 مل من وسائل الاعلام (RPMI 1640 وسائل الإعلام التي تحتوي على نسبة الجلوكوز في 8 مم، 10٪ مصل بقري جنيني، والوحدات 50 / البنسلين مل، و 50 ميكروغرام / الستربتومايسين مل) على العدد المطلوب من الآبار. على سبيل المثال، قد يكون تجربة نموذجية تتطلب ثلاثة آبار - واحد في كل لسيطرة أي من الفيروسات، ومكافحة فيروس (على سبيل المثال، في التعبير عن GFP اتش)، والمجموعة التجريبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدفئة لوحة إلى 37 درجة مئوية عن طريق وضعها في منديل حاضنة ثقافة ما لا يقل عن 30 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مباشرة بعد جرذ العزلة جزيرة 18،19، مكان 100-200 الجزر في الآبار الفردية من لوحة 6 جيدا ثقافة غير الأنسجة المغلفة. يطلب من الجزر الصغيرة والستين لافراز الانسولين والمقايسات دمج ثيميدين. ويمكن استخدام الجزر المتبقية لعزل الحمض النووي الريبي للدراسات التعبير الجيني أو عزل بروتين لimmunoblotting. </li></ol> [ملاحظة: من هذه النقطة، يرجى اتباع بروتوكولات مؤسسية لمعالجة واستخدام والتخلص من المواد biohazardous.] <ol start="4" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة بلطف لوحة لجعل الجزر إلى مركز جيد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة واتش مباشرة على الجزر في وسط الطبق. استخدم 100-500 مولتيبليكيتييس من العدوى (وزارة الداخلية، ونسبة الخلايا المستهدفة للوحدات المكونة للفيروس). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح لبقية الجزر لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع لوحة في نسيج الثقافة الحاضنة (37 درجة مئوية، ونسبة 5٪ CO 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 24 ساعة، دوامة بلطف لوحة لجعل الجزر إلى مراكز للآبار ونقل الجزر باستخدام micropipette P200 إلى جديد يحتوي على وسائل الاعلام بشكل جيد الطازجة. إذا الجزر أصبحت تعلق على لوحة، يمكن أن طردت بلطف مع طرف ماصة. </li></ol> [ملاحظة: للتحقق من ملائمة كفاءه تنبيغقبرصي، واستخدام عنصر تحكم GFP فيروس التعبير هو مفيد، ويمكن بعد ذلك الجزر يمكن تصوير عبر متحد البؤر المجهري للتحقق من اختراق اتش في صلب جزيرة.] <ol start="9" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثقافة الجزر لح 24-72 إضافية، تبعا لتوقيت المرجوة من هذه التجربة من الدراسات الرائدة التحسين. على سبيل المثال، قد تحريض استجابة التكاثري تتطلب مرات تتراوح بين 24-72 ساعة أو ضربة قاضية لهذا الجين من الفائدة قد تحتاج إلى 48 أو 72 ساعة. تحويل الجزر إلى وسائل الإعلام الطازجة كل يوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ل24 ساعة الأخيرة من التجربة، وثقافة الجزر في وسائل الإعلام التي تحتوي على 1 μCi [الميثيل-3 H] -thymidine/ml وسائل الإعلام (1 ميكروليتر عموما ثيميدين / مل وسائل الاعلام). </li></ol> [ملاحظة: من هذه النقطة، يرجى اتباع بروتوكولات مؤسسية لمعالجة واستخدام والتخلص من المواد المشعة.] 2. الأنسولين إفراز الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعدادإفراز العازلة فحص (SAB) 10X حل سهم (1.14 م كلوريد الصوديوم، و 47 ملي بوكل، 12 مم KH 2 PO 4، 11.6 ملم MgSO 4) وCaCl 2 حل 100X الأوراق المالية (0.25 م CaCl 2). ويمكن إعداد هذه الحلول الأوراق المالية قبل الموعد المحدد وتخزينها في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعد طازجة 50 مل من SAB العمل (5 مل من SAB 10X، 1 مل من HEPES 1 م، و 0.5 مل من CaCl 100X 2، 0.28 مل من جيش صرب البوسنة 35٪، 0،11 ز NaHCO 3، والماء المعقم إلى 50 مل) في 50 مل أنبوب مخروطي الشكل، والحار الى 37 درجة مئوية عن طريق وضع في بالحمام المائي 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 10 مل من الديوان العمل في أنبوب 15 مل مخروطي الشكل وإضافة 66.8 ميكرولتر من 2.5 متر مد الجلوكوز لإعداد ارتفاع نسبة الجلوكوز (16.7 ملم) SAB. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 44.8 ميكرولتر من 2.5 متر مد الجلوكوز إلى 40 مل المتبقية من SAB عمل للاعداد للانخفاض الجلوكوز (2.8 مم) SAB. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمية ثلاثة أنابيب microcentrifuge 1.7 مل لكل بئر من لوحة 6 جيدا ويضاف 1 مل من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS). </li></oL&gt; [ملاحظة: بما أن الجزر هي المشعة، يرجى اتباع بروتوكولات مؤسسية لمعالجة واستخدام والتخلص من المواد المشعة.] <ol start="6" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 20 وضع الجزر في كل أنبوب microcentrifuge. جعل كل محاولة لإضافة الجزر الصغيرة الحجم نسبيا إلى كل أنبوب microcentrifuge. على سبيل المثال، قد تحتوي على 5 في كل أنبوب صغير، و 10 متوسطة، و 5 من الحجم الكبير الجزر (انظر الشكل 1). </li></ol> [ملاحظة: يمكن تصور الفشوت سواء باستخدام المجسام تشريح أو المجهر القياسية.] <ol start="7" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الجزر واستقر على الجزء السفلي من الأنبوب بواسطة الجاذبية (~ 2 دقيقة)، نضح في برنامج تلفزيوني مع micropipette وتجاهل. </li></ol> [ملاحظة: كبديل لتسوية عن طريق الجاذبية، ويمكن طرد الأنابيب في 300 XG ل 1 دقيقة.] <ol start="8" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمرحلة ما قبل الحضانة، إضافة 400 ميكرولتر من حمض الغلوتاميك منخفضCOSE SAB، ووضع أنابيب (مع قبعاتهم المفتوحة) في الأنسجة حاضنة الثقافة (37 درجة مئوية، ونسبة 5٪ CO 2)، ومرحلة ما قبل الحضانة لمدة 60 دقيقة. نضح ما قبل الحضانة منخفض SAB الجلوكوز وتجاهل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لافراز الانسولين القاعدي، إضافة 400 ميكرولتر من SAB انخفاض الجلوكوز، ووضع أنابيب (مع قبعاتهم المفتوحة) في الأنسجة حاضنة الثقافة (37 درجة مئوية، ونسبة 5٪ CO 2)، واحتضان لمدة 60 دقيقة. جمع منخفض SAB الجلوكوز وحفظ لالمقايسة المناعية الشعاعية الانسولين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحفز افراز الانسولين، إضافة 400 ميكرولتر من ارتفاع السكر في الديوان، ووضع أنابيب (مع قبعاتهم المفتوحة) في الأنسجة حاضنة الثقافة (37 درجة مئوية، ونسبة 5٪ CO 2)، واحتضان لمدة 60 دقيقة. جمع ارتفاع SAB الجلوكوز وحفظ لالمقايسة المناعية الشعاعية الانسولين. </li></ol> 3. ثيميدين التأسيس الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني، وبعد الجزر واستقر على الجزء السفلي من الأنبوب بواسطة الجاذبية، ونضح في برنامج تلفزيوني مع micropipette، تجاهل، وتكرار هذاالخطوة مرة واحدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 500 ميكروليتر حامض الخليك ثلاثي الكلور الجليد الباردة (TCA، و 10٪ W / V) واحتضان على الجليد لمدة 30 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> منبذة الأنابيب في 16 000 XG لمدة 3 دقائق في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح في TCA، إضافة 80 ميكرولتر من هيدروكسيد الصوديوم N 0.3، واحتضان لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. خلال هذا الوقت، دوامة بقوة عينات لق 5-10 كل 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 4 مل من الكوكتيل العد فندق Econo الآمن إلى 7 مل أنابيب التلألؤ سائل الفرز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 50 ميكروليتر من العينة إلى أنبوب التلألؤ عد، وكأب الأنبوب، هز لفترة وجيزة، والاعتماد في عداد التلألؤ السائل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس تركيز البروتين باستخدام حمض bicinchoninic (BCA) فحص و 10 ميكروليتر من عينة وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة. </li></ol> 4. تحليل البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنفيذ المقايسة المناعية الشعاعية الانسولين بعد بروتوكول الشركة المصنعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيع افراز الانسولين وبيانات دمج ثيميدين مع اضرب بروتينentration. </li></ol> 5. ممثل النتائج ويرد مثال على هذه التجربة لتقييم تكرار جزيرة وظيفة خلايا بيتا في جزر الفئران في الشكل 2. هذا المثال يوضح أن overexpression الفيروسة الغدانية من &quot;جين # 6&quot; افتراضية يحفز بقوة تكرار جزيرة دون تغيير وظيفة خلايا بيتا. في لوحة أعلى، ونتائج الفحص من دمج ثيميدين تثبت أن زيادة التعبير عن &quot;جين # 6&quot; يزيد تركيب الحامض النووي، إذا ما قيست على إدماج ثيميدين. لأن معظم الخلايا في جزيرة الفئران وخلايا بيتا، فمن المرجح أن هذه الزيادة في دمج ثيميدين يشير إلى زيادة في تكرار خلايا بيتا. ومع ذلك، يجب إجراء تجارب تأكيدية لترسيخ هذا. في لوحة أسفل، والنتائج من الانسولين فحص إفراز تثبت أن overexpression من &quot;جين # 6&quot; لم يغير واحدة من المهام بيتا الخلية الأولية، أي أناnsulin في إفراز الجلوكوز المنخفضة والعالية. ويدل على جودة عزلة الجزيرة والصحة من الجزر بعد العلاج مع الفيروسات الغدية من الزيادة أضعاف في افراز الانسولين في تركيزات الجلوكوز المنخفضة والعالية. إذا زيادة التعبير عن &quot;جين # 6&quot; ضعف وظيفة خلايا بيتا و، من المرجح أن ينعكس هذا على أنه نقص في الأنسولين يفرز في ارتفاع، وتركيزات الجلوكوز تنشيطية (16.7 ملم). ويمكن أيضا منحنى الجرعة والاستجابة لمختلف تركيزات الجلوكوز يتعين القيام بها. <img src="/files/ftp_upload/4080/4080fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> الشكل 1. نظرة عامة على بروتوكول لتقييم تكرار جزيرة وظيفة خلايا بيتا في جزر معزولة في اعقاب الفيروسة الغدانية فأر بوساطة تغيرات في التعبير الجيني. ويتعرض الجزر الفئران المعزولة حديثا إلى الفيروسات الغدية لمدة 24 ساعة وبعد ذلك زرعها تصل إلى 96 ساعة. ويتم تقييم دمج ثيميدين في 24 ساعة الأخيرة، تليها قياس افراز الانسولين فيانخفاض وارتفاع السكر. <img src="/files/ftp_upload/4080/4080fig2.jpg" alt="الشكل 2"/> الشكل 2. النتائج من تجربة تستخدم اتش التحكم وoverexpressing اتش جين افتراضية وصفت بانها &quot;جين # 6&quot;. لوحة الأعلى يظهر دمج ثيميدين واللوحة السفلية في افراز الانسولين.

<ol>
	<li>Ferrannini, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Cell+function+in+subjects+spanning+the+range+from+normal+glucose+tolerance+to+overt+diabetes:+a+new+analysis.">beta-Cell function in subjects spanning the range from normal glucose tolerance to overt diabetes: a new analysis.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 90, 493-500 (2005).</li><li>Weyer, C., Bogardus, C., Mott, D. M., Pratley, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+history+of+insulin+secretory+dysfunction+and+insulin+resistance+in+the+pathogenesis+of+type+2+diabetes+mellitus.">The natural history of insulin secretory dysfunction and insulin resistance in the pathogenesis of type 2 diabetes mellitus.</a> J. Clin. Invest. 104, 787-794 (1999).</li><li>Keenan, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Residual+insulin+production+and+pancreatic+ss-cell+turnover+after+50+years+of+diabetes:+Joslin+Medalist+Study.">Residual insulin production and pancreatic ss-cell turnover after 50 years of diabetes: Joslin Medalist Study.</a> Diabetes. 59, 2846-2853 (2010).</li><li>Bain, J. R., Schisler, J. C., Takeuchi, K., Newgard, C. B., Becker, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+adenovirus+vector+for+efficient+RNA+interference-mediated+suppression+of+target+genes+in+insulinoma+cells+and+pancreatic+islets+of+langerhans.">An adenovirus vector for efficient RNA interference-mediated suppression of target genes in insulinoma cells and pancreatic islets of langerhans.</a> Diabetes. 53, 2190-2194 (2004).</li><li>Fueger, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trefoil+factor+3+stimulates+human+and+rodent+pancreatic+islet+beta-cell+replication+with+retention+of+function.">Trefoil factor 3 stimulates human and rodent pancreatic islet beta-cell replication with retention of function.</a> Mol. Endocrinol. 22, 1251-1259 (2008).</li><li>Schisler, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+human+and+rat+islet+beta-cell+proliferation+with+retention+of+function+by+the+homeodomain+transcription+factor+Nkx6.1.">Stimulation of human and rat islet beta-cell proliferation with retention of function by the homeodomain transcription factor Nkx6.1.</a> Mol. Cell Biol. 28, 3465-3476 (2008).</li><li>Chan, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+uncoupling+protein+2+inhibits+glucose-stimulated+insulin+secretion+from+rat+islets.">Overexpression of uncoupling protein 2 inhibits glucose-stimulated insulin secretion from rat islets.</a> Diabetes. 48, 1482-1486 (1999).</li><li>Cozar-Castellano, I., Takane, K. K., Bottino, R., Balamurugan, A. N., Stewart, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+beta-cell+proliferation+and+retinoblastoma+protein+phosphorylation+in+rat+and+human+islets+using+adenovirus-mediated+transfer+of+cyclin-dependent+kinase-4+and+cyclin+D1.">Induction of beta-cell proliferation and retinoblastoma protein phosphorylation in rat and human islets using adenovirus-mediated transfer of cyclin-dependent kinase-4 and cyclin D1.</a> Diabetes. 53, 149-159 (2004).</li><li>Icyuz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus+infection+activates+akt1+and+induces+cell+proliferation+in+pancreatic+islets1.">Adenovirus infection activates akt1 and induces cell proliferation in pancreatic islets1.</a> Transplantation. 87, 821-824 (2009).</li><li>Kaneto, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+the+hexosamine+pathway+leads+to+deterioration+of+pancreatic+beta-cell+function+through+the+induction+of+oxidative+stress.">Activation of the hexosamine pathway leads to deterioration of pancreatic beta-cell function through the induction of oxidative stress.</a> J. Biol. Chem. 276, 31099-31104 (2001).</li><li>Antinozzi, P. A., Berman, H. K., O'Doherty, R. M., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+engineering+with+recombinant+adenoviruses.">Metabolic engineering with recombinant adenoviruses.</a> Annu. Rev. Nutr. 19, 511-544 (1999).</li><li>Newgard, C. B., Becker, T. C., Berman, H. K., O'Doherty, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+overexpressed+hexokinases+in+liver+and+islet+cells.">Regulation of overexpressed hexokinases in liver and islet cells.</a> Biochem. Soc. Trans. 25, 118-122 (1997).</li><li>Becker, T. C., BeltrandelRio, H., Noel, R. J., Johnson, J. H., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+hexokinase+I+in+isolated+islets+of+Langerhans+via+recombinant+adenovirus.+Enhancement+of+glucose+metabolism+and+insulin+secretion+at+basal+but+not+stimulatory+glucose+levels.">Overexpression of hexokinase I in isolated islets of Langerhans via recombinant adenovirus. Enhancement of glucose metabolism and insulin secretion at basal but not stimulatory glucose levels.</a> J. Biol. Chem. 269, 21234-21238 (1994).</li><li>Csete, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral-mediated+gene+transfer+to+pancreatic+islets+does+not+alter+islet+function.">Adenoviral-mediated gene transfer to pancreatic islets does not alter islet function.</a> Transplant Proc. 26, 756-757 (1994).</li><li>Csete, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+to+pancreatic+islets+mediated+by+adenoviral+vectors.">Efficient gene transfer to pancreatic islets mediated by adenoviral vectors.</a> Transplantation. 59, 263-268 (1995).</li><li>Meng, Z. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+liver+X+receptors+inhibits+pancreatic+islet+beta+cell+proliferation+through+cell+cycle+arrest.">Activation of liver X receptors inhibits pancreatic islet beta cell proliferation through cell cycle arrest.</a> Diabetologia. 52, 125-135 (2009).</li><li>Ronnebaum, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pyruvate+cycling+pathway+involving+cytosolic+NADP-dependent+isocitrate+dehydrogenase+regulates+glucose-stimulated+insulin+secretion.">A pyruvate cycling pathway involving cytosolic NADP-dependent isocitrate dehydrogenase regulates glucose-stimulated insulin secretion.</a> J. Biol. Chem. , (2006).</li><li>Milburn, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+beta-cells+in+obesity.+Evidence+for+induction+of+functional,+morphologic,+and+metabolic+abnormalities+by+increased+long+chain+fatty+acids.">Pancreatic beta-cells in obesity. Evidence for induction of functional, morphologic, and metabolic abnormalities by increased long chain fatty acids.</a> J. Biol. Chem. 270, 1295-1299 (1995).</li><li>Szot, G., Koudria, P., Bluestone, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+Pancreatic+Islet+Isolation.">Murine Pancreatic Islet Isolation.</a> J. Vis. Exp. (7), e255 (2007).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

تأسيس مسارات التي يمكن أن تكون منظم لحفز تكرار وتعزيز وظيفة خلايا بيتا ذات الصلة على حد سواء الأشكال الرئيسية لداء السكري. لأن كتلة خلايا بيتا وظيفي يعتمد على وجود وظيفة الانسولين إفراز الخلايا، وتقييم هذه المحددات لديها في وقت واحد مزاياه. هذا البروتوكول يصف بروتوك...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> RPMI 1640 وسائل الاعلام </td><td> Gibco </td><td> 11879 </td><td></td></tr><tr><td> البنسلين / الستربتومايسين </td><td> Gibco </td><td> 15140 </td><td></td></tr><tr><td> 6 كذلك لوحة </td><td> BD-الصقر </td><td> 35-1146 </td><td> غير TC المعالجة </td></tr><tr><td> [الميثيل-3 H]-ثيميدين </td><td> بيركن إلمر </td><td> NET027Z001MC </td><td> 1 زارة التجارة والصناعة / مل </td></tr><tr><td> الدقيقة أنابيب الطرد المركزي </td><td> Denville </td><td> C2170 </td><td> 1.7 مل </td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> سيغما </td><td> 59888 </td><td></td></tr><tr><td> بوكل </td><td> Acros </td><td> 42409 </td><td></td></tr><tr><td> KH 2 &lt;/ الفرعي&gt; PO 4 </td><td> Acros </td><td> 20592 </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> Acros </td><td> 41348 </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2 </td><td> Acros </td><td> 34961 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> سيغما </td><td> H0887 </td><td> 1 م حل </td></tr><tr><td> جيش صرب البوسنة 35٪ </td><td> سيغما </td><td> A7979 </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> Acros </td><td> 42427 </td><td></td></tr><tr><td> D-جلوكوز </td><td> سيغما </td><td> G8769 </td><td></td></tr><tr><td> TCA </td><td> فيشر العلمية </td><td> SA9410-1 </td><td> 10٪ وزن / </td></tr><tr><td> هيدروكسيد الصوديوم </td><td> Acros </td><td> 12426 </td><td></td></tr><tr><td> التلألؤ عد أنبوب </td><td> Sarstedt </td><td> 58،536 </td><td> 7 مل، PP </td&gt; </tr><tr><td> قبعة التلألؤ أنبوب عد </td><td> Sarstedt </td><td> 65،816 </td><td></td></tr><tr><td> ECONO-الآمن كوكتيل عد </td><td> RPI </td><td> 111175 </td><td></td></tr><tr><td> الانسولين ريا </td><td> شركة سيمنز </td><td> TKIN2 </td><td></td></tr><tr><td> BCA الفحص كيت </td><td> الحرارية العلمية </td><td> 23250 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> معدات </td></tr><tr><td> نبذ </td><td> إيبندورف </td><td> 5415R </td><td></td></tr><tr><td> التلألؤ عد رف أنبوب </td><td> Sarstedt </td><td> 93.1431.001 </td><td></td></tr><tr><td> السائلة التلألؤ عداد </td><td> بيركن إلمر </td><td> ثلاثي كارب 2910TR </td><td></td></tr></tbody></table>

assessing replication and beta cell function in adenovirally-transduced isolated rodent islets

ويتم التحكم في المقام الأول توازن الجلوكوز من قبل الغدد الصماء هرمونات الانسولين والجلوكاجون، يفرز من خلايا بيتا في البنكرياس، وألفا، على التوالي. يتم تحديد وظيفي كتلة خلايا بيتا بيتا من كتلة الخلية التشريحية، فضلا عن قدرة خلايا بيتا للرد على حمل المغذيات. وفقدان وظيفي بيتا كتلة الخلية المركزية على كل من الأشكال الرئيسية لداء السكري 1-3. في حين تراجع وظيفي النتائج بيتا كتلة الخلية من هجوم المناعة الذاتية في مرض السكري نوع 1، في مرض السكري من النوع 2، وهذا النقصان يطور من عدم القدرة على حد سواء من خلايا بيتا لإفراز الإنسولين بشكل مناسب، وتدمير خلايا بيتا من كادر من الآليات. وبالتالي، الجهود المبذولة لاستعادة وظيفي كتلة خلايا بيتا لها أهمية قصوى لتحسين معاملة وعلاج محتمل لمرض السكري. هناك جهود جارية لتحديد المسارات الجزيئية التي يمكن استغلالها لتحفيز تكرار وتعزيز وظيفة خلايا بيتا.من الناحية المثالية، فإن الأهداف العلاجية تحسين كل من نمو خلايا بيتا ووظيفتها. ربما أكثر أهمية على الرغم من ذلك هو تحديد ما إذا كانت الاستراتيجية التي تحفز نمو خلايا بيتا يأتي على حساب إضعاف وظيفة خلايا بيتا (مثل مع بعض الجينات المسرطنة)، والعكس بالعكس. بواسطة التعبير قمع منهجي أو overexpressing من الجينات المستهدفة في الجزر الفئران المعزولة، يمكن للمرء تحديد الأهداف العلاجية المحتملة لزيادة وظيفية بيتا كتلة الخلية 4-6. ويمكن استخدام ناقلات الفيروسة الغدانية للبروتينات overexpress بكفاءة أو ضربة قاضية في الجزر الفئران المعزولة 4،7-15. هنا، نقدم طريقة للتلاعب الجيني باستخدام تنبيغ الفيروسة الغدانية وتقييم تكرار جزيرة وظيفة خلايا بيتا في جزر الفئران المعزولة (الشكل 1). وقد استخدمت هذه الطريقة سابقا لتحديد أهداف جديدة أن تعدل بيتا تكرار خلية أو وظيفة 5،6،8،9،16،17.

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Replication and Beta Cell Function in Adenovirally-transduced Isolated Rodent Islets at JoVE.com

Assessing Replication and Beta Cell Function in Adenovirally-transduced Isolated Rodent Islets

هذا البروتوكول يسمح احد لتحديد العوامل التي تعدل وظيفي كتلة خلايا بيتا للعثور على الأهداف العلاجية المحتملة لعلاج مرض السكري. بروتوكول يتكون من طريقة مبسطة لتقييم تكرار جزيرة وظيفة خلايا بيتا في جزر معزولة في اعقاب الفئران التلاعب في الجينات مع الفيروسات الغدية.

الفشوت القوارض تقييم النسخ المتماثل وظيفة خلايا بيتا في Adenovirally-transduced المعزولة

Glucose homeostasis is primarily controlled by the endocrine hormones insulin and glucagon, secreted from the pancreatic beta and alpha cells, ...

assessing-replication-beta-cell-function-adenovirally-transduced

Research

JoVE Journal

Medicine

13.9K Views.  Indiana University School of Medicine. هذا البروتوكول يسمح احد لتحديد العوامل التي تعدل وظيفي كتلة خلايا بيتا للعثور على الأهداف العلاجية المحتملة لعلاج مرض السكري. بروتوكول يتكون من طريقة مبسطة لتقييم تكرار جزيرة وظيفة خلايا بيتا في جزر معزولة في اعقاب الفئران التلاعب في الجينات مع الفيروسات الغد?...

Video: Assessing Replication and Beta Cell Function in Adenovirally-transduced Isolated Rodent Islets

Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy

Bioengineered mouse models have become powerful research tools in determining causal relationships between molecular alterations and models of cardiovascular disease. Although molecular biology is necessary in identifying key changes in the signaling pathway, it is not a surrogate for functional significance. While physiology can provide answers to the question of function, combining physiology with biochemical assessment of metabolites in the intact, beating heart allows for a complete picture of cardiac function and energetics. For years, our laboratory has utilized isolated heart perfusions combined with nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy to accomplish this task. Left ventricular function is assessed by Langendorff-mode isolated heart perfusions while cardiac energetics is measured by performing 31P magnetic resonance spectroscopy of the perfused hearts. With these techniques, indices of cardiac function in combination with levels of phosphocreatine and ATP can be measured simultaneously in beating hearts. Furthermore, these parameters can be monitored while physiologic or pathologic stressors are instituted. For example, ischemia/reperfusion or high workload challenge protocols can be adopted. The use of aortic banding or other models of cardiac pathology are apt as well. Regardless of the variants within the protocol, the functional and energetic significance of molecular modifications of transgenic mouse models can be adequately described, leading to new insights into the associated enzymatic and metabolic pathways. Therefore, 31P NMR spectroscopy in the isolated perfused heart is a valuable research technique in animal models of cardiovascular disease.

Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy

Langendorff-mode isolated heart perfusion, in conjunction with 31P NMR spectroscopy, combines the fields of biochemistry and physiology into one experiment. The protocol allows for the dynamic measurement of high energy phosphate content and turnover in the heart while concurrently monitoring physiologic function. When performed correctly, this is a valuable technique in the assessment of cardiac energetics.

تقييم وظيفة القلب وعلم الطاقة في قلوب معزولة عن طريق الماوس 31 P الرنين المغناطيسي الطيفي

Bioengineered mouse models have become powerful research tools in determining causal relationships between molecular alterations and models of ...

Assessing Endothelial Vasodilator Function with the Endo-PAT 2000

The endothelium is a delicate monolayer of cells that lines all blood vessels, and which comprises the systemic and lymphatic capillaries. By virtue of the panoply of paracrine factors that it secretes, the endothelium regulates the contractile and proliferative state of the underlying vascular smooth muscle, as well as the interaction of the vessel wall with circulating blood elements. Because of its central role in mediating vessel tone and growth, its position as gateway to circulating immune cells, and its local regulation of hemostasis and coagulation, the the properly functioning endothelium is the key to cardiovascular health. Conversely, the earliest disorder in most vascular diseases is endothelial dysfunction.
In the arterial circulation, the healthy endothelium generally exerts a vasodilator influence on the vascular smooth muscle. There are a number of methods to assess endothelial vasodilator function. The Endo-PAT 2000 is a new device that is used to assess endothelial vasodilator function in a rapid and non-invasive fashion. Unlike the commonly used technique of duplex ultra-sonography to assess flow-mediated vasodilation, it is totally non-operator-dependent, and the equipment is an order of magnitude less expensive. The device records endothelium-mediated changes in the digital pulse waveform known as the PAT ( peripheral Arterial Tone) signal, measured with a pair of novel modified plethysmographic probes situated on the finger index of each hand. Endothelium-mediated changes in the PAT signal are elicited by creating a downstream hyperemic response. Hyperemia is induced by occluding blood flow through the brachial artery for 5 minutes using an inflatable cuff on one hand. The response to reactive hyperemia is calculated automatically by the system. A PAT ratio is created using the post and pre occlusion values. These values are normalized to measurements from the contra-lateral arm, which serves as control for non-endothelial dependent systemic effects. Most notably, this normalization controls for fluctuations in sympathetic nerve outflow that may induce changes in peripheral arterial tone that are superimposed on the hyperemic response.
In this video we demonstrate how to use the Endo-PAT 2000 to perform a clinically relevant assessment of endothelial vasodilator function.

A noninvasive procedure to assess endothelial function is demonstrated using the Endo-PAT 2000.

تقييم وظيفة غشائي عائي مع إندو 2000 - PAT

The endothelium is a delicate monolayer of cells that lines all blood vessels, and which comprises the systemic and lymphatic capillaries. By virtue of ...

Myo-mechanical Analysis of Isolated Skeletal Muscle

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force generation and fatigability in treated muscle. We describe a detailed approach to evaluating myo-mechanical properties in freshly explanted hindlimb muscle from the mouse. We describe the atraumatic harvest of mouse extensor digitorum longus muscle, mounting the muscle in a muscle strip myograph (Model 820MS; Danish Myo Technology), and the measurement of maximal twitch and tetanic tension, contraction time, and half-relaxation time, using a square pulse stimulator (Model S48; Grass Technologies). Using these measurements, we demonstrate the calculation of specific twitch and tetanic tension normalized to muscle cross-sectional area, the twitch-to-tetanic tension ratio, the force-frequency relationship curve and the low frequency fatigue curve 4. This analysis provides a method for quantitative comparison between therapeutic interventions in mouse models of muscle disease 1,2,3,5, as well as comparison of the effects of genetic modification on muscle function 6,7,8,9.

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for muscle disease, methods are needed to quantitate force generation and fatigability in treated muscle. We detail an approach to evaluating myo-mechanical properties in explanted mouse hindlimb muscle. This analysis provides a robust approach to quantitating the effects of genetic modification on muscle function, as well as comparison of therapies in mouse models of muscle disease.

ميو الميكانيكية وتحليل الهيكل العظمي والعضلات المعزولة

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force ...

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 diabetic islets from organ donors2. Here we share our protocol for isolating islets from human pancreatic tissue obtained from type 2 diabetic and non-diabetic patients who have undergone partial pancreatectomy due to different pancreatic diseases (benign or malignant pancreatic tumors, chronic pancreatitis, and common bile duct or duodenal tumors). All patients involved gave their consent to this study, which had also been approved by the local ethics committee. The surgical specimens were immediately delivered to the pathologist who selected soft and healthy appearing pancreatic tissue for islet isolation, retaining the damaged tissue for diagnostic purposes. We found that to isolate more than 1,000 islets, we had to begin with at least 2 g of pancreatic tissue. Also essential to our protocol was to visibly distend the tissue when injecting the enzyme-containing media and subsequently mince it to aid digestion by increasing the surface area.
To extend the applicability of our protocol to include the occasional case in which a large amount (&gt;15g) of human pancreatic tissue is available , we used a Ricordi chamber (50 ml) to digest the tissue. During digestion, we manually shook the Ricordi chamber3 at an intensity that varied by specimen according to its level of tissue fibrosis. A discontinous Ficoll gradient was then used to separate the islets from acinar tissue. We noted that the tissue pellet should be small enough to be homogenously resuspended in Ficoll medium with a density of 1.125 g/ml. After isolation, we cultured the islets under stress free conditions (no shaking or rotation) with 5% CO2 at 37 &deg;C for at least 48 h in order to facilitate their functional recovery. Widespread application of our protocol and its future improvement could enable the timely harvesting of large quantities of human islets from diabetic and clinically matched non-diabetic subjects, greatly advancing type 2 diabetes research.

The supply of type 2 diabetic islets for research is insufficient. Here we share our protocol for isolating islets from patients undergoing partial pancreatectomy. This approach represents a unique venue for obtaining islets from type 2 diabetic and clinically matched non-diabetic subjects in adequate numbers for basic and clinical studies.

عزلة الإنسان الفشوت من المرضى مستأصل البنكرياس جزئيا

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, including mental retardation due to disordered and damaged brain development. Fetal alcohol spectrum disorder (FASD) is a term used to cover a continuum of birth defects that occur due to maternal alcohol consumption, and occurs in approximately 4% of children born in the United States. With 50% of child-bearing age women reporting consumption of alcohol, and half of all pregnancies being unplanned, unintentional exposure is a continuing issue2. In order to best understand the damage produced by ethanol, plus produce a model with which to test potential interventions, we developed a model of developmental ethanol exposure using the zebrafish embryo. Zebrafish are ideal for this kind of teratogen study3-8. Each pair lays hundreds of eggs, which can then be collected without harming the adult fish. The zebrafish embryo is transparent and can be readily imaged with any number of stains. Analysis of these embryos after exposure to ethanol at different doses and times of duration and application shows that the gross developmental defects produced by ethanol are consistent with the human birth defect. Described here are the basic techniques used to study and manipulate the zebrafish FAS model.

In order to understand the molecular mechanisms of the ethanol-induced developmental damage, we have developed a zebrafish model of ethanol exposure and are exploring the physical, cellular, and genetic alterations that occur after ethanol exposure1. We then seek to find potential interventions and rapidly test them in this animal model.

تقييم التغييرات المشوهة في نموذج الزرد من التعرض الكحول الجنينية

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Staining Protocols for Human Pancreatic Islets

Estimates of islet area and numbers and endocrine cell composition in the adult human pancreas vary from several hundred thousand to several million and beta mass ranges from 500 to 1500 mg 1-3. With this known heterogeneity, a standard processing and staining procedure was developed so that pancreatic regions were clearly defined and islets characterized using rigorous histopathology and immunolocalization examinations. 
Standardized procedures for processing human pancreas recovered from organ donors are described in part 1 of this series. The pancreas is processed into 3 main regions (head, body, tail) followed by transverse sections. Transverse sections from the pancreas head are further divided, as indicated based on size, and numbered alphabetically to denote subsections. This standardization allows for a complete cross sectional analysis of the head region including the uncinate region which contains islets composed primarily of pancreatic polypeptide cells to the tail region.
The current report comprises part 2 of this series and describes the procedures used for serial sectioning and histopathological characterization of the pancreatic paraffin sections with an emphasis on islet endocrine cells, replication, and T-cell infiltrates. Pathology of pancreatic sections is intended to characterize both exocrine, ductular, and endocrine components. The exocrine compartment is evaluated for the presence of pancreatitis (active or chronic), atrophy, fibrosis, and fat, as well as the duct system, particularly in relationship to the presence of pancreatic intraductal neoplasia4. Islets are evaluated for morphology, size, and density, endocrine cells, inflammation, fibrosis, amyloid, and the presence of replicating or apoptotic cells using H&amp;E and IHC stains. 
The final component described in part 2 is the provision of the stained slides as digitized whole slide images. The digitized slides are organized by case and pancreas region in an online pathology database creating a virtual biobank. Access to this online collection is currently provided to over 200 clinicians and scientists involved in type 1 diabetes research. The online database provides a means for rapid and complete data sharing and for investigators to select blocks for paraffin or frozen serial sections.

This video demonstrates procedures for characterization of human pancreatic islets using hematoxylin and eosin (H&E) and immunohistochemistry (IHC). Pancreatic sections from head, body, and tail regions are stained by both H&amp;E and IHC to determine islet endocrine composition (insulin, glucagon, and pancreatic polypeptide), cell replication (Ki67), and inflammatory infiltrates (H&E, CD3). The uncinate region is localized using IHC for pancreatic polypeptide.

تلطيخ بروتوكولات لجزر البنكرياس الإنسان

Estimates of islet area and numbers and endocrine cell composition in the adult human pancreas vary from several hundred thousand to several million and ...

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, the role of beta-cell dysfunction in type 2 diabetes has been clearly established 2. Research progress has required methods for the isolation of pancreatic islets. The protocol of the islet isolation presented here shares many common steps with protocols from other groups, with some modifications to improve the yield and quality of isolated islets from both the wild type and diabetic Leprdb (db/db) mice. A live-cell 2-photon imaging method is then presented that can be used to investigate the control of insulin secretion within islets.

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

We present here a protocol for the isolation of islets from the mouse model of type 2 diabetes, Leprdb and details of a live-cell assay for measurement of insulin secretion from intact islets that utilizes 2 photon microscopy.

Lepr<sup&gt; ديسيبل</sup&gt; نموذج الفأر من النوع 2 من مرض السكري: البنكرياس عزل جزيرة وتعيش خلية 2 فوتون التصوير من الجزر سليمة

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, ...

A High-content In Vitro Pancreatic Islet &#946;-cell Replication Discovery Platform

Loss of insulin-producing &#946;-cells is a central feature of diabetes. While a variety of potential replacement therapies are being explored, expansion of endogenous insulin-producing pancreatic islet &#946;-cells remains an attractive strategy. &#946;-cells have limited spontaneous regenerative activity; consequently, a crucial research effort is to develop a precise understanding of the molecular pathways that restrain &#946;-cell growth and to identify drugs capable of overcoming these restraints. Herein an automated high-content image-based primary-cell screening method to identify &#946;-cell replication-promoting small molecules is presented. Several, limitations of prior methodologies are surmounted. First, use of primary islet cells rather than an immortalized cell-line maximizes retention of in vivo growth restraints. Second, use of mixed-composition islet-cell cultures rather than a &#946;-cell-line allows identification of both lineage-restricted and general growth stimulators. Third, the technique makes practical the use of primary islets, a limiting resource, through use of a 384-well format. Fourth, detrimental experimental variability associated with erratic islet culture quality is overcome through optimization of isolation, dispersion, plating and culture parameters. Fifth, the difficulties of accurately and consistently measuring the low basal replication rate of islet endocrine-cells are surmounted with optimized immunostaining parameters, automated data acquisition and data analysis; automation simultaneously enhances throughput and limits experimenter bias. Notable limitations of this assay are the use of dispersed islet cultures which disrupts islet architecture, the use of rodent rather than human islets and the inherent limitations of throughput and cost associated with the use of primary cells. Importantly, the strategy is easily adapted for human islet replication studies. This assay is well suited for investigating the mitogenic effect of substances on &#946;-cells and the molecular mechanisms that regulate &#946;-cell growth.

A High-content In Vitro Pancreatic Islet &amp;#946;-cell Replication Discovery Platform

Critical challenges for the diabetes research field are to understand the molecular mechanisms that regulate islet &#946;-cell replication and to develop methods for stimulating &#946;-cell regeneration. Herein a high-content screening method to identify and assess the &#946;-cell replication-promoting activity of small molecules is presented.

والمحتوى العالي<em&gt; في المختبر</em&gt; البنكرياس جزيرة β خلايا النسخ المتماثل منصة ديسكفري

Loss of insulin-producing &#946;-cells is a central feature of diabetes. While a variety of potential replacement therapies are being explored, expansion ...

Quantitative 3D In Silico Modeling (q3DISM) of Cerebral Amyloid-beta Phagocytosis in Rodent Models of Alzheimer's Disease

Neuroinflammation is now recognized as a major etiological factor in neurodegenerative disease. Mononuclear phagocytes are innate immune cells responsible for phagocytosis and clearance of debris and detritus. These cells include CNS-resident macrophages known as microglia, and mononuclear phagocytes infiltrating from the periphery. Light microscopy has generally been used to visualize phagocytosis in rodent or human brain specimens. However, qualitative methods have not provided definitive evidence of in vivo phagocytosis. Here, we describe quantitative 3D in silico modeling (q3DISM), a robust method allowing for true 3D quantitation of amyloid-&#946; (A&#946;) phagocytosis by mononuclear phagocytes in rodent Alzheimer&#39;s Disease (AD) models. The method involves fluorescently visualizing A&#946; encapsulated within phagolysosomes in rodent brain sections. Large z-dimensional confocal datasets are then 3D reconstructed for quantitation of A&#946; spatially colocalized within the phagolysosome. We demonstrate the successful application of q3DISM to mouse and rat brains, but this methodology can be extended to virtually any phagocytic event in any tissue.

Quantitative 3D In Silico Modeling q3DISM of Cerebral Amyloid-beta Phagocytosis in Rodent Models of Alzheimer&#039;s Disease

We developed a methodology for quantitative 3D in silico modeling (q3DISM) of cerebral amyloid-&#946; (A&#946;) phagocytosis by mononuclear phagocytes in rodent models of Alzheimer&#39;s disease. This method can be generalized for the quantitation of virtually any phagocytic event in vivo.

3D الكمي<em&gt; في السيليكو</em&gt; النمذجة (q3DISM) من الدماغيه اميلويد بيتا البلعمة في نماذج القوارض من مرض الزهايمر

Neuroinflammation is now recognized as a major etiological factor in neurodegenerative disease. Mononuclear phagocytes are innate immune cells responsible ...

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal model to investigate bladder remodeling in pBOO are female rodents undergoing partial obstruction at the proximal urethra. Variability in the degree of obstruction and animal mortality are major concerns with proximal obstruction. Furthermore, dissecting around the proximal urethra and bladder neck jeopardizes bladder innervation.
We developed a nerve-sparing mid-urethral obstruction (NeMO) model for pBOO avoiding the disadvantages of the traditional model. We approached the urethra just inferior to the pubic symphysis, which obviated the need for laparotomy as well as for dissection in this area; also, the striated urethral sphincter remained untouched. We performed NeMO in female Sprague-Dawley rats (12 obstructions, 6 sham animals) as well as in female C57/bl6 mice (20 obstructions, 18 sham animals). After two weeks, we evaluated bladder function, bladder mass, and body mass.
We had no mortalities among obstructed- or sham-operated female rats; as described for the traditional proximal pBOO-method, we tied the suture around the proximal urethra and a temporarily placed 0.9 mm metal rod. NeMO induced an 85% increase in bladder mass after two weeks, average residual urine volume was 0.4 mL in partially obstructed rats while only 0.03 mL in sham animals. In mice, we tested 3 sizes of cannulas that we placed along the urethra when tying the suture. We found that using a 27-gauge cannula resulted in over 50% animal mortality; placing the 25-gauge cannula did not yield the desired response in increasing bladder mass; utilizing a 26-gauge cannula yielded favorable results with minimal animal mortality (1/8) yet a significant 2-fold increase in bladder mass.

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

Traditional modeling of partial bladder outlet obstruction in rodents is fraught with animal mortality. A denervation injury from dissection around the proximal urethra and bladder neck is also of major concern. We developed and evaluated a safe and reliable mid-urethral obstruction model, avoiding the shortcomings of the traditional model.

التي تقتصد في العصب منتصف الإحليلية إعاقة (نيمو) في أنثى القوارض الصغيرة

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...