وأيد هذا المشروع البحثي من قبل جائزة عدد R21AA017735 (يس) من المعاهد الوطنية لتعاطي الكحول والإدمان على الكحول. المحتوى هو فقط من مسؤولية الكاتب ولا تعبر بالضرورة عن وجهة النظر الرسمية للمعهد الوطني لتعاطي الكحول والإدمان على الكحول أو المعاهد الوطنية للصحة. ويود الكاتب أيضا أن أشكر تشاريس مونتغمري لتحرير هذه المخطوطة.

1. تربية الحيوانات ومعالجة اغتذائية الببتيد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> C57BL/mice تولد عن طريق وضع الفئران الإناث (~ 6 أسابيع من العمر، ومتوسط ​​الوزن 20 غ) في أقفاص المنزل الذكور لمدة 2 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من وجود المكونات الحيوانات المنوية و / أو اللطاخة المهبلية بعد ذلك على الفور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا إيجابية، تعين هذه النقطة الوقت الذي الجنينية اليوم 0 (E0). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على E7، وزن مباراة الإناث الحوامل لمجموعات العلاج السيطرة و(3 مجموعات) يتم تعيين كما هو موضح مؤخرا 4: 1) الكحول (الإيثانول) السائل مجموعة الحمية (ALC)، 2) الزوج التي تغذيها مجموعة المراقبة (PF)، 3) مجموعة العلاج الببتيد، والتي ينبغي أن يحصل داخل الصفاق حقن (IP) من ADNF-9 الببتيد جنبا إلى جنب مع الكحول التعرض حمية سائلة (ALC/ADNF-9). تفاصيل إعداد ALC والوجبات الغذائية PF وإجراءات الحقن IP يمكن العثور عليها في أجريناها مؤخرا العمل 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس الكحول يوميا الحمية السائلة التي يمكن تقديمها إلى الدخول المجاني كمصدر وحيد من المواد المغذية. حمية سائلة PF يربطها بشكل فردي رس على سد ALC يمكن قياسها يوميا كذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حجم الحمية السائلة المستهلكة خلال ساعة السابقة 24 يمكن تسجيلها من تخرج 30 مل أنابيب المسمار الحد الأقصى وينبغي توفير نظام غذائي طازج يوميا من E7 إلى E13. </li></ol> 2. تشريح الأجنة وتسليخ مجهري من العقول الجنين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التضحية الفئران الحوامل على E13 بواسطة القتل الرحيم عميق الفئران مع إجراء CO 2 تليها خلع عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف الموقع من شق في البطن مع الايثانول 70٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق في البطن باستخدام مقص العقيمة وملقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة في البطن مفتوح، تشريح خارج الرحم من خلال عقد مع واحد ملقط واستخدام ملقط أخرى لتمزيق مسراق الرحم بعيدا عن الرحم. تأكد من أن تفعل هذا الإجراء ببطء من أجل تجنب ثقب الأجنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأجنة من الرحم ونقلها إلى طبق خلية ثقافة (60 ملم × 15 ملم) التي تحتوي على هانكس &quot;محلول الملح المتوازن<html> (HBSS) في الماء البارد الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح أدمغة الأجنة من الأجنة كلها تحت stereomicroscope لتسليخ مجهري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط غاية في الدقة لتسليخ مجهري، سحب قبالة الجلد من الأجنة في الجزء العلوي من الرأس لفضح الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتعرض الجمجمة وتصور بوضوح تحت stereomicroscope تسليخ مجهري، ثم تقشر الجمجمة بدءا من الجزء الخلفي من الدماغ في الحبل الشوكي ومناطق الدماغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ومن المؤكد أن تقشر قطعة الجمجمة عن طريق قطعة من الخلفية إلى أجزاء الأمامي من الرأس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم كشفها بصريا أدمغة الأجنة، والمضي قدما مع استخراج لهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح أدمغة الجنين من قاعدة البصلة الشمية منشم إلى قاعدة الدماغ التالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> POSTFIX تشريح أدمغة جميع الجنين في بارافورمالدهيد 4٪ لمدة 2-3 أيام. يمكنك أيضا تجميد الأخرى أدمغة الأجنة من كل السدود إذا كنت اختبارها لطخة غربية أو المقايسات الأنزيمية. </li></ol>NT &quot;&gt; ملاحظة: تمت الموافقة على إجراءات لاستخدامات الحيوانية رعاية الحيوان واللجنة المؤسسية من جامعة توليدو والتي هي وفقا للمبادئ التوجيهية للرعاية الحيوان واللجنة المؤسسية استخدم في المعاهد الوطنية للصحة ودليل للاستخدام رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. 3. تضمين الأمخاخ الجنين في الجيلاتين لباجتزاء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 10٪ من الجيلاتين الصف أ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء القالب تضمين التقشير بعيدا في منتصف الطريق وانتظر حتى يتصلب الجيلاتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة مكان وعلاجها قبل الولادة الجنين العقول جنبا إلى جنب على أعلى عزز الجيلاتين. هذا هو الحفاظ على الظروف ثابت من مناعي من موت الخلايا بين كل من المجموعتين الضابطة والتجريبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الجيلاتين السائل على الجزء العلوي من أدمغة الأجنة لجعل قالب كاملة (تأكد من الجيلاتين ليست ساخنة جدا). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بردت قالب الجيلاتين المعد الذي يحمل أدمغة الأجنة لمدة 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنحرف للهبوطالبلاستيك العفن التضمين ومن ثم نقل مسبقة الصنع الجيلاتين تحتوي على أدمغة الأجنة في بارافورمالدهيد 4٪ لمدة يومين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان وقسم إصلاح أدمغة الأجنة في الجيلاتين باستخدام آلة vibratome باجتزاء (لايكا VT 1000S) في 50 ميكرون سماكة لباجتزاء الاكليلية. يتم اختبار هذا سمك في دراساتنا لأنه يوفر ميزات التشريحية أفضل. وبالإضافة إلى ذلك، سمك 25 ميكرون وأعلى ويمكن أيضا أن اختبار مع هذه التقنية تنطوي جزءا لا يتجزأ من أدمغة الأجنة في 10٪ الجيلاتين. لاحظ أن قطعت المقاطع الاكليلية باستخدام vibratome في القاعدية مستوى سماحة العقد على الدماغ الأمامي </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع المقاطع دماغ الجنين في مخزنة الفوسفات المالحة (PBS) حل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل المقاطع دماغ الجنين في Superfrost الشرائح زائد في الماء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجف المقاطع التي شنت لمدة 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الشرائح (التي شنت مع المقاطع دماغ الجنين) في برنامج تلفزيوني لاختبار القادم يوم من رد فعل النفق. </li></ol> 4. TUNEL رد فعل لديبحماية المناخ موت الخلايا أو موت الخلايا المبرمج (TUNEL: TDT بوساطة dUTP نيك نهاية وصفها؛ TDT: محطة deoxynucleotidyl ترانسفيراز). ويهدف هذا الاختبار إلى تحديد موت الخلية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علاج الجنين أقسام الدماغ التي شنت في Superfrost زائد الشرائح مع بروتين K (20 ميكروغرام / مل) لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية (300 ميكرولتر من بروتين K مختلطة في 20 مل PBS). ويتم تجميع الشرائح في 5 Plend مفتوحة MAILE). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف المقاطع دماغ الجنين (التي شنت في الشرائح) مع PBS ثلاث مرات لمدة 5 دقائق تحت شاكر المداري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع مع 3٪ H 2 O 2 في الميثانول لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (3 مل 30٪ H 2 O 2 في 27 مل الميثانول بنسبة 100٪) (الشرائح لا ينبغي أن يكون في شاكر). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف المقاطع مع برنامج تلفزيوني ثلاث مرات لمدة 5 دقائق في شاكر المداري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع في حل permeabilization (0.1٪ TritonX-100 في 0.1٪ سيترات الصوديوم) لمدة 2 دقيقة على الجليد (4 ° C) (100 ميكرولتر TritonX + 0.1 ز سترات الصوديوم + 99.9 مل مقطرالماء د). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف المقاطع في برنامج تلفزيوني مرتين لمدة 5 دقائق في شاكر المداري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> منطقة جافة حول المقاطع في الشرائح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم على الجدار Superfrost الشرائح بالإضافة إلى استخدام القلم PAP. ويهدف هذا إلى منع أي تسرب من الحل الذي يستخدم لعلاج المقاطع للكشف عن الخلايا إيجابية النفق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع مع TUNEL خليط التفاعل (50 ميكرولتر من زجاجة 1 و 450 ميكرولتر من زجاجة 2) لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية، وسوف تستخدم عنصر التحكم عن طريق الحضانة في حل من زجاجة 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف مع PBS ثلاث مرات 5 دقائق تحت أوربت شاكر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> منطقة جافة حول الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع مع تحويل-POD لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف المقاطع ثلاث مرات لمدة 5 دقائق مع تريس حمض الهيدروكلوريك (الرقم الهيدروجيني 7.5، 0.05 M). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع لمدة 7 دقائق في 0.05٪ tetrahydrochloride 3&#39;-3&#39;-diaminobenzidine (DAB) و0.003٪ H 2 O 2 (25 مل تريس حمض الهيدروكلوريك، pH7.5، 0.05 M + 25 ميكرولتر 3٪ H 2 0 2 + 500 DAB ميكرولتر) تحت Oribtal شاكر في 4 درجات مئوية (في الجليد) والظلام (تأكد من تنفيذ هذا الإجراء في نيو 5 Plend فتح الظرف البريدي). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف المقاطع مع برنامج تلفزيوني ثلاث مرات 5 دقائق تحت شاكر المداري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على أقسام الشرائح في برنامج تلفزيوني لمدة لا تزيد عن 24 ساعة في برنامج تلفزيوني، ثم معالجتها لتلطيخ نيسل كما هو مفصل في البروتوكول المقطع التالي. </li></ol> ملاحظة: DAB هو مادة مسرطنة. استخدام القفازات وتنظيف جميع الأطباق المستخدمة مع التبييض الانتهاء مرة واحدة مع جميع التجارب. 5. تلطيخ نيسل لإعداد الجنين الدماغ أقسام لمراقبة مجهرية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي أن يتم إجراء تلطيخ نيسل في غطاء السلامة البيولوجية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف المقاطع الشريحة مع الماء منزوع الأيونات لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع في الإيثانول 70٪ لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع في الإيثانول 95٪ لمدة 6 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع في الإيثانول 70٪ لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف المقاطع في وات منزوع الأيوناتإيه لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع في البنفسج الكريزيل وصمة عار لمدة 3 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف المقاطع في الماء منزوع الأيونات لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع في الإيثانول 70٪ لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع في الايثانول 95٪ + 3 مل حمض الخليك الجليدي لمدة 3 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع في الإيثانول 95٪ لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع في الإيثانول بنسبة 100٪ لمدة 2 دقيقة ثلاث مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع في الزيلين لمدة 10 دقيقة ثلاث مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشرائح عقد أقسام دماغ الجنين يمكن تركيبه باستخدام Permount وغطاء الشرائح الزجاجية زلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك محمولة على الشرائح بين عشية وضحاها قبل الملاحظة المجهرية والتحاليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الملاحظة المجهرية وphotomicrographs لا يمكن أن يؤديها تحت المجهر لايكا تستقيم. </li></ol>

<ol>
	<li>Sari, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+neuroprotective+protein-derived+peptide,+NAP,+preventing+alcohol-induced+apoptosis+in+fetal+brain+of+C57BL/6+mouse.">Activity-dependent neuroprotective protein-derived peptide, NAP, preventing alcohol-induced apoptosis in fetal brain of C57BL/6 mouse.</a> Neuroscience. 158 (4), 1426-1435 (2009).</li><li>Sari, Y., Chiba, T., Yamada, M., Rebec, G. V., Aiso, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+peptide,+colivelin,+prevents+alcohol-induced+apoptosis+in+fetal+brain+of+C57BL/6+mice:+signaling+pathway+investigations.">A novel peptide, colivelin, prevents alcohol-induced apoptosis in fetal brain of C57BL/6 mice: signaling pathway investigations.</a> Neuroscience. 164 (4), 1653-1664 (2009).</li><li>Sari, Y., Hammad, L. A., Saleh, M. M., Rebec, G. V., Mechref, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alteration+of+selective+neurotransmitters+in+fetal+brains+of+prenatally+alcohol-treated+C57BL/6+mice:+quantitative+analysis+using+liquid+chromatography/tandem+mass+spectrometry.">Alteration of selective neurotransmitters in fetal brains of prenatally alcohol-treated C57BL/6 mice: quantitative analysis using liquid chromatography/tandem mass spectrometry.</a> Int. J. Dev. Neurosci. 28 (3), 263-269 (2010).</li><li>Sari, Y., Weedman, J. M., Ge, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+neurotrophic+factor-derived+peptide+prevents+alcohol-induced+apoptosis,+in+part,+through+Bcl2+and+c-Jun+N-terminal+kinase+signaling+pathways+in+fetal+brain+of+C57BL/6+mouse.">Activity-dependent neurotrophic factor-derived peptide prevents alcohol-induced apoptosis, in part, through Bcl2 and c-Jun N-terminal kinase signaling pathways in fetal brain of C57BL/6 mouse.</a> Neuroscience. 202, 465-473 (2012).</li><li>Sari, Y., Zhang, M., Mechref, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+proteins+in+fetal+brains+of+alcohol-treated+prenatally+C57BL/6+mice:+a+proteomic+investigation.">Differential expression of proteins in fetal brains of alcohol-treated prenatally C57BL/6 mice: a proteomic investigation.</a> Electrophoresis. 31, 1-14 (2010).</li><li>Bassan, M., Zamostiano, R., Davidson, A., Pinhasov, A., Giladi, E., Perl, O., Bassan, H., Blat, C., Gibney, G., Glazner, G., Brenneman, D. E., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+sequence+of+a+novel+protein+containing+a+femtomolar-activity-dependent+neuroprotective+peptide.">Complete sequence of a novel protein containing a femtomolar-activity-dependent neuroprotective peptide.</a> J. Neurochem. 72 (3), 1283-1293 (1999).</li><li>Brenneman, D. E., Hauser, J., Neale, E., Rubinraut, S., Fridkin, M., Davidson, A., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+neurotrophic+factor:+structure-activity+relationships+of+femtomolar-acting+peptides.">Activity-dependent neurotrophic factor: structure-activity relationships of femtomolar-acting peptides.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 285 (2), 619-627 (1998).</li><li>Spong, C. Y., Abebe, D. T., Gozes, I., Brenneman, D. E., Hill, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+fetal+demise+and+growth+restriction+in+a+mouse+model+of+fetal+alcohol+syndrome.">Prevention of fetal demise and growth restriction in a mouse model of fetal alcohol syndrome.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 297 (2), 774-779 (2001).</li><li>Sari, Y., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+deficits+associated+with+fetal+alcohol+exposure+may+be+protected,+in+part,+by+peptides+derived+from+activity-dependent+neurotrophic+factor+and+activity-dependent+neuroprotective+protein.">Brain deficits associated with fetal alcohol exposure may be protected, in part, by peptides derived from activity-dependent neurotrophic factor and activity-dependent neuroprotective protein.</a> Brain Res. Brain Res. Rev. 52 (1), 107-118 (2006).</li><li>Brenneman, D. E., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+femtomolar-acting+neuroprotective+peptide.">A femtomolar-acting neuroprotective peptide.</a> J. Clin. Invest. 97 (10), 2299-2307 (1996).</li><li>Zamostiano, R., Pinhasov, A., Gelber, E., Steingart, R. A., Seroussi, E., Giladi, E., Bassan, M., Wollman, Y., Eyre, H. J., Mulley, J. C., Brenneman, D. E., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+characterization+of+the+human+activity-dependent+neuroprotective+protein.">Cloning and characterization of the human activity-dependent neuroprotective protein.</a> J. Biol. Chem. 276 (1), 708-714 (2001).</li><li>Offen, D., Sherki, Y., Melamed, E., Fridkin, M., Brenneman, D. E., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasoactive+intestinal+peptide+(VIP)+prevents+neurotoxicity+in+neuronal+cultures:+relevance+to+neuroprotection+in+Parkinson's+disease.">Vasoactive intestinal peptide (VIP) prevents neurotoxicity in neuronal cultures: relevance to neuroprotection in Parkinson's disease.</a> Brain Res. 854 (1-2), 257-262 (2000).</li><li>Steingart, R. A., Solomon, B., Brenneman, D. E., Fridkin, M., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VIP+and+peptides+related+to+activity-dependent+neurotrophic+factor+protect+PC12+cells+against+oxidative+stress.">VIP and peptides related to activity-dependent neurotrophic factor protect PC12 cells against oxidative stress.</a> J. Mol. Neurosci. 15 (3), 137-145 (2000).</li></ol>

لا الإفصاحات في هذا الشأن.

المنهجية والتكنولوجيا المقدمة في هذه الدراسة تثبت آثار التعرض قبل الولادة للكحول في أدمغة الأجنة ودور الببتيد التغذية في الوقاية من هذه الآثار. قد توفر هذه المعلومات على كيفية دراسة أدوية أخرى من سوء المعاملة أو المواد الكيميائية السامة الأخرى في أدمغة الجنين خلال ...

الهدف من الطرق التجريبية وصفها هنا هو تقييم آثار اعصاب من الببتيدات الغذائية في نموذج التعرض للكحول الجنين باستخدام العديد من التقنيات التي تنطوي على تربية، تغذية، microdissecting، وكشف عن موت الخلايا. العمل من مختبرنا قد ينطوي على حمية سائلة مختلطة مع الكحول كنموذج للشرب الكحول المعتدل، والتي قد تكون مشابهة لنموذج الشرب الإنسان في فترة من كمية الكحول المستهلكة 1-5. وقد حددت نحن وآخرون ثلاثة المشتقات الببتيد التي هي اعصاب ضد الآثار الضارة للتعرض الكحول الجنينية. دراسات التحقيق التعرض للكحول خلال المراحل الجنينية باستخدام نماذج حيوانية قد يؤدي إلى تحديد الآليات المحتملة من العصبية وتسمح للوضع إجراءات التدخل. قد توفر هذه المعلومات وافرة حول الآثار اعصاب والتوهين من الآثار الضارة من التعرض للكحول خلال الحمل. الوقاية الممكنة من آثار التعرض للكحول قبل الولادة قد تنطوي على معاملة الفئران الحوامل مع الببتيدات التي ثبت أن تشارك في الحماية العصبية في المختبر والمجراة 6،7 1،2،4،8،9. ومن بين هذه الببتيدات، SALLRSIPA، والمعروفة باسم ADNF-9 أو SAL، مشتق من النشاط التي تعتمد على عامل التغذية العصبية (ADNF) 7،10. الببتيد آخر مع تسلسل NAPVSIPQ الببتيد، برنامج العمل الوطني يطلق عليه، والمستمدة من البروتين اعصاب التي تعتمد على النشاط (ADNP) 6،11، أظهرت تأثير وقائي قوي ضد الاكسدة المرتبطة بالتعرض الكحول 12،13. وبالإضافة إلى ذلك، حددنا مؤخرا الجديدة توليفها الببتيد، colivelin الذي يظهر أن تلعب دورا رئيسيا في اعصاب الجنين الكحول نموذج التعرض 2. وتتألف Colivelin من ADNF-9 وAGA-(C8R) HNG17 (PAGASRLLLLTGEIDLP). أهمية استخدام هذه الببتيدات هو أن لديهم القدرة علىعبور حاجز الدم في الدماغ لمنع آثار موت الخلايا المبرمج الناجم عن الكحول والعجز نمو الدماغ. الطرق التجريبية المستخدمة C57BL / 6 الفئران لاختبار آثار اعصاب ضد الخلايا الناجم عن الكحول. اعتمدنا نافذة 2 ساعة بدلا من تربية ليلة وضحاها من أجل تقدير دقيق ليوم الجنينية 0 (E0)، كما أنه يمكن أن يكشف عنها الكشف عن المكونات الحيوانات المنوية ومسحة مهبلية 1-5. وقد استخدمنا نظام غذائي السائل مع أنابيب التغذية، لأن هذا يعتبر وصول الحرة بدلا من تقديم الكحول من خلال مسار أنبوب تغذية، والتي ربما تتسبب في الضغط على الفئران الحوامل. من ناحية أخرى، تسليخ مجهري يمكن أن يكون تحديا بسبب ليونة الأنسجة دماغ الجنين، التي قد تواجهها عند تشريح أدمغة الأجنة في المراحل الجنينية المبكرة. هنا، وتبين لنا تقنيات تصور للتعامل مع جميع التحديات التي تنطوي تسليخ مجهري. وعلاوة على ذلك، منذ باجتزاء دماغ الجنين ويمكن أيضا أن يكون تحديا، الذي اعتمدناهالاسلوب الذي ينطوي على تضمين أدمغة الأجنة في الجيلاتين باستخدام قشر بعيدا تضمين القوالب. وقد نجحنا في خفض أدمغة الأجنة في أقسام التعويم الحر في 50 ميكرون سماكة. وهذا يسمح لنا لتحقيق أي تعديلات من محتوى البروتين في أقسام دماغ الجنين، بما في ذلك تحديد موت الخلية.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of the reagent/equipment</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comments (optional)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Superfrost Plus Slides</td>
 <td>VWR</td>
 <td>48311-703</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PAP PEN</td>
 <td>Research Products Int. Corp.</td>
 <td>195506</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5-Plend Open Mailer </td>
 <td>Heathrow Scientific, LLC</td>
 <td>HS 15983G</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Peel away embedding molds</td>
 <td>Electron Microscopy Sciences</td>
 <td>70182</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>In situ cell death detection kit, POD</td>
 <td>Roche Diagnostics, Inc</td>
 <td>11684817910</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hanks' Balanced Salt Solution</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>14170-120 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Gelatin Type A</td>
 <td>FisherScientific</td>
 <td>G8-500</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Stereomicroscope</td>
 <td>W. NUHSBAUM, Inc </td>
 <td>Leica M60, KL 200 LED</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro-Vibratome</td>
 <td>Leica, Inc </td>
 <td>Leica VT 1000S</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Moria Ultra Fine Forceps </td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>11370-40</td>
 <td>2 pairs</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Graduate 30 ml feeding tubes</td>
 <td>Dyets, Inc </td>
 <td>900012 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vitamin Mix </td>
 <td>Bio-Serv. Inc. </td>
 <td>F8031 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mineral Mix</td>
 <td>Bio-Serv. Inc. </td>
 <td>F8598 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Maltose Dextrin</td>
 <td>Bio-Serv. Inc. </td>
 <td>3650 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethyl alcohol 190 Proof, 5 gallons</td>
 <td>111000190-SS05 </td>
 <td>Pharmco-AAPER</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Upright microscope</td>
 <td>W. NUHSBAUM, Inc</td>
 <td>LEICA DM 4000 </td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

experimental methods for testing the effects of neurotrophic peptide, adnf-9, against alcohol-induced apoptosis during pregnancy in c57bl/6 mice

تصاميم تجريبية للتحقيق في الآثار المترتبة على التعرض للكحول قبل الولادة خلال المراحل الجنينية المبكرة في نمو دماغ الجنين تشكل تحديا. هذا يرجع في معظمه إلى صعوبة تسليخ مجهري من أدمغة الأجنة وباجتزاء من أجل تحديد الخلايا أفكارك التي يسببها التعرض قبل الولادة للكحول. التجارب الموصوفة هنا توفر تقنيات تصور من الفئران تربية لتحديد موت الخلايا في الجنين أنسجة المخ. استخدمت في هذه الدراسة C57BL / 6 الفئران كنموذج حيواني لدراسة التعرض للكحول الجنين ودور الببتيد الغذائية ضد الخلايا الناجم عن الكحول. يتكون تربية نافذة حصيرة 2 ساعة لتحديد المرحلة الدقيقة من عمر الجنين. وقد استخدم الجنين نموذج التعرض للكحول التي أنشئت في هذه الدراسة إلى تحديد آثار التعرض للكحول قبل الولادة في أدمغة الأجنة. وهذا ينطوي على حرية الوصول إلى الكحول أو الزوج التي تغذيها النظم الغذائية السائلة كمصدر وحيد من المواد المغذية للفئران الحوامل. ق = &quot;jove_content&quot;&gt; موصوفة التقنيات التي تنطوي على تشريح الأجنة وتسليخ مجهري من أدمغة الأجنة بعناية، لأن هذا الأخير يمكن أن يكون تحديا. تسليخ مجهري يتطلب stereomicroscope ملقط وغاية في الدقة. يتم توفير إجراءات خطوة بخطوة لتشريح أدمغة الأجنة بصريا. يتم تشريح أدمغة الجنين من قاعدة البصلة الشمية منشم إلى قاعدة الدماغ التالي. للتحقيق في موت الخلايا المبرمج، هي جزء لا يتجزأ أدمغة الأجنة لأول مرة في الجيلاتين باستخدام قالب التقشير بعيدا لتسهيل باجتزاء مع جهاز vibratome. أدمغة الأجنة جزءا لا يتجزأ من وثابتة في بارافورمالدهيد هي مقطوع بسهولة، ويمكن تركيبه المقاطع التعويم الحر في superfrost الشرائح بالإضافة لتحديد الخلايا أو موت الخلية. وقد استخدمت مقايسة لتحديد موت الخلية أو الخلايا أفكارك:؛ TUNEL (محطة deoxynucleotidyl ترانسفيراز TDT TDT بوساطة dUTP نيك نهاية وصفها). ومن الجدير بالذكر أن APوتتميز optosis والسمسة الخلية بوساطة من قبل تفتيت الحمض النووي. وهكذا، فإن إيجابية الخلايا TUNEL تصور تدل على موت الخلية أو الخلايا أفكارك. التصاميم التجريبية هنا تقديم معلومات حول استخدام نظام غذائي السائلة التي أنشئت لدراسة آثار الكحول ودور الببتيد العصبي أثناء فترة الحمل في أدمغة الأجنة. وهذا ينطوي على تربية وتغذية الفئران الحوامل، microdissecting أدمغة الأجنة، وتحديد موت الخلايا المبرمج. معا، قد تكون هذه التقنيات البصرية والنصية مصدر للتحقيق التعرض قبل الولادة لعوامل ضارة في أدمغة الأجنة.

الطرق التجريبية وصفها هنا تبين أن نافذة تربية 2 ساعة أمر ضروري لتقدير مرحلة الحمل دقيقة. لقد أظهر تشريح الأجنة في سن ال E13. أثبتنا أيضا تسليخ مجهري من أدمغة الأجنة في E13. الإجراء ينطوي على عدة مراحل (AC)، كما هو موضح في الشكل رقم 1. يتم تشريح أدمغة الجنين من قاعدة ا...

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice

التصاميم التجريبية المقترحة هنا التركيز على دراسة آثار التعرض للكحول في موت الخلايا المبرمج وتطبيق الببتيد العصبي أثناء فترة الحمل في دماغ الجنين. يوصف وصفا مفصلا من تربية لجمع العقول الجنين. موصوفة تقنيات لتحديد الخلايا أيضا بالتفصيل.

الطرق التجريبية لاختبار آثار الببتيد عصبية، ADNF-9، ضد موت الخلايا المبرمج الناجم عن الكحول أثناء فترة الحمل في C57BL / 6 الفئران

Experimental designs for investigating the effects of prenatal alcohol exposure during early embryonic stages in fetal brain growth are challenging. This ...

experimental-methods-for-testing-effects-neurotrophic-peptide-adnf-9

Research

JoVE Journal

Neuroscience

11.6K Views.  University of Toledo. التصاميم التجريبية المقترحة هنا التركيز على دراسة آثار التعرض للكحول في موت الخلايا المبرمج وتطبيق الببتيد العصبي أثناء فترة الحمل في دماغ الجنين. يوصف وصفا مفصلا من تربية لجمع العقول الجنين. موصوفة تقنيات لتحديد الخلايا أيضا بالتفصيل.

Video: Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice

Methods for Experimental Manipulations after Optic Nerve Transection in the Mammalian CNS

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. The optic nerve can be accessed within the orbit of the eye and completely transected (axotomized), cutting the axons of the entire RGC population. Optic nerve transection is a reproducible model of apoptotic neuronal cell death in the adult CNS 1-4. This model is particularly attractive because the vitreous chamber of the eye acts as a capsule for drug delivery to the retina, permitting experimental manipulations via intraocular injections. The diffusion of chemicals through the vitreous fluid ensures that they act upon the entire RGC population. Viral vectors, plasmids or short interfering RNAs (siRNAs) can also be delivered to the vitreous chamber in order to infect or transfect retinal cells 5-12. The high tropism of Adeno-Associated Virus (AAV) vectors is beneficial to target RGCs, with an infection rate approaching 90% of cells near the injection site 6, 7, 13-15. Moreover, RGCs can be selectively transfected by applying siRNAs, plasmids, or viral vectors to the cut end of the optic nerve 16-19 or injecting vectors into their target the superior colliculus 10. This allows researchers to study apoptotic mechanisms in the injured neuronal population without confounding effects on other bystander neurons or surrounding glia. RGC apoptosis has a characteristic time-course whereby cell death is delayed 3-4 days postaxotomy, after which the cells rapidly degenerate. This provides a window for experimental manipulations directed against pathways involved in apoptosis. Manipulations that directly target RGCs from the transected optic nerve stump are performed at the time of axotomy, immediately after cutting the nerve. In contrast, when substances are delivered via an intraocular route, they can be injected prior to surgery or within the first 3 days after surgery, preceding the initiation of apoptosis in axotomized RGCs. In the present article, we demonstrate several methods for experimental manipulations after optic nerve transection.

Optic Nerve transection is a widely used model of adult CNS injury. This model is ideal for performing a number of experimental manipulations that target the retina globally or directly target the injured neuronal population of retinal ganglion cells.

أساليب التلاعب التجريبية بعد Transection العصب البصري الثدييات في الجهاز العصبي المركزي

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. The optic nerve can be ...

Organotypic Cerebellar Cultures: Apoptotic Challenges and Detection

Organotypic cultures of neuronal tissue were first introduced by Hogue in 1947 1,2 and have constituted a major breakthrough in the field of neuroscience. Since then, the technique was developed further and currently there are many different ways to prepare organotypic cultures. The method presented here was adapted from the one described by Stoppini et al. for the preparation of the slices and from Gogolla et al. for the staining procedure 3,4.
A unique feature of this technique is that it allows you to study different parts of the brain such as hippocampus or cerebellum in their original structure, providing a big advantage over dissociated cultures in which all the cellular organization and neuronal networks are disrupted. In the case of the cerebellum it is even more advantageous because it allows the study of Purkinje cells, extremely difficult to obtain as dissociated primary culture. This method can be used to study certain developmental features of the cerebellum in vitro, as well as for electrophysiological and pharmacological experiments in both wild type and mutant mice.
The method described here was designed to study the effect of apoptotic stimuli such as Fas ligand in the developing cerebellum, using TUNEL staining to measure apoptotic cell death. If TUNEL staining is combined with cell type specific markers, such as Calbindin for Purkinje cells, it is possible to evaluate cell death in a cell population specific manner. The Calbindin staining also serves the purpose of evaluating the quality of the cerebellar cultures.

This method describes the generation of organotypic cerebellar cultures and the effect of certain apoptotic stimuli on the viability of different cerebellar cell types.

مخيخي الثقافات عضوي النمط : التحديات والكشف عن أفكارك

Organotypic cultures of neuronal tissue were first introduced by Hogue in 1947 1,2 and have constituted a major breakthrough in the field of neuroscience. ...

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

In utero electroporation is a widely used technique for fast and efficient spatiotemporal manipulation of various genes in the rodent central nervous system. Overexpression of desired genes is just as possible as shRNA mediated loss-of-function studies. Therefore it offers a wide range of applications. The feasibility to target particular cells in a distinct area further increases the range of potential applications of this very useful method. For efficiently targeting specific regions knowledge about the subtleties, such as the embryonic stage, the voltage to apply and most importantly the position of the electrodes, is indispensable.
Here, we provide a detailed protocol that allows for specific and efficient in utero electroporation of several regions of the C57BL/6 mouse central nervous system. In particular it is shown how to transfect regions the develop into the retrosplenial cortex, the motor cortex, the somatosensory cortex, the piriform cortex, the cornu ammonis 1-3, the dentate gyrus, the striatum, the lateral septal nucleus, the thalamus and the hypothalamus. For this information about the appropriate embryonic stage, the appropriate voltage for the corresponding embryonic stage is provided. Most importantly an angle-map, which indicates the appropriate position of the positive pole, is depicted. This standardized protocol helps to facilitate efficient in utero electroporation, which might also lead to a reduced number of animals.

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

This protocol describes in detail how to specifically transfect different regions in the C57BL/6 central nervous system via in utero electroporation. Included in this protocol are detailed instructions for transfections of regions that develop into the cortex, hippocampus, thalamus, hypothalamus, lateral septal nucleus and striatum.

Cortex-، Hippocampus-، Thalamus-، Hypothalamus-، الجانبي الحاجزي Nucleus- والمخطط محددة<em&gt; في الرحم</em&gt; Electroporation للفي C57BL / 6 الماوس

In utero electroporation is a widely used technique for fast and efficient spatiotemporal manipulation of various genes in the rodent central nervous ...

Experimental Models to Study the Neuroprotection of Acidic Postconditioning Against Cerebral Ischemia

Stroke is one of the leading causes of mortality and disability worldwide, with limited therapeutic approaches. As an endogenous strategy for neuroprotection, postconditioning treatments have proven to be promising therapies against cerebral ischemia. However, complicated procedures and potential safety issues limit their clinical application. To overcome these disadvantages, we have developed acidic postconditioning (APC) as a therapy for experimental focal cerebral ischemia. APC refers to the mild acidosis treatment by inhaling CO2 during reperfusion following ischemia. Here we present two models to execute APC in vitro and in vivo, respectively. The oxygen-glucose deprivation (OGD) treatment of mice and the corticostriatal occlusion and middle cerebral artery occlusion (MCAO) of mice were employed to mimic cerebral ischemia. APC can be simply achieved by transferring brain slices to acidic buffer bubbled with 20% CO2, or by mice inhaling 20% CO2. APC showed significant protective effects against cerebral ischemia, as reflected by tissue viability and brain infarct volume.

Acidic postconditioning protects against cerebral ischemia. Here we present two models to execute APC. They are achieved respectively by transferring corticostriatal slices to acidic buffer after oxygen-glucose deprivation in vitro and by inhaling 20% CO2 after middle cerebral artery occlusion in vivo.

نماذج تجريبية لدراسة الحماية العصبية من الوضعية الحمضية ضد نقص التروية الدماغية

Stroke is one of the leading causes of mortality and disability worldwide, with limited therapeutic approaches. As an endogenous strategy for ...

Sagittal Plane Kinematic Gait Analysis in C57BL/6 Mice Subjected to MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Kinematic gait analysis in the sagittal plane has frequently been used to characterize motor deficits in multiple sclerosis (MS). We describe the application of these techniques to identify gait deficits in a mouse model of MS, known as experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). Paralysis and motor deficits in mice subjected to EAE are typically assessed using a clinical scoring scale. However, this scale yields only ordinal data that provides little information about the precise nature of the motor deficits. EAE disease severity has also been assessed by rotarod performance, which provides a measure of general motor coordination. By contrast, kinematic gait analysis of the hind limb in the sagittal plane generates highly precise information about how movement is impaired. To perform this procedure, reflective markers are placed on a hind limb to detect joint movement while a mouse is walking on a treadmill. Motion analysis software is used to measure movement of the markers during walking. Kinematic gait parameters are then derived from the resultant data. We show how these gait parameters can be used to quantify impaired movements of the hip, knee, and ankle joints in EAE. These techniques may be used to better understand disease mechanisms and identify potential treatments for MS and other neurodegenerative disorders that impair mobility.

Kinematic gait analysis in the sagittal plane yields highly precise information about how movement is executed. We describe the application of these techniques to identify gait deficits for mice subjected to autoimmune-mediated demyelination. These methods may also be used to characterize gait deficits for other mouse models featuring impaired locomotion.

تحليل مشيه الحركية الطائرة السهمي في الفئران C57BL/6 تعرض إلى MOG35-55 التي يسببها التجريبية النخاع المناعة الذاتية

Kinematic gait analysis in the sagittal plane has frequently been used to characterize motor deficits in multiple sclerosis (MS). We describe the ...

A Simple Approach to Induce Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice for Functional and Neuropathological Assessments

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by immunizing mice with neurogenic peptides to direct an inflammatory attack toward components of the peripheral nervous system (PNS). Recent advances have enabled the induction of EAN in the relatively resistant C57BL/6 mouse line using myelin protein zero (P0)106-125 or P0180-199 peptides delivered in adjuvant combined with the injection of pertussis toxin. The ability to induce EAN in the C57BL/6 strain allows for the use of the numerous genetic tools that exist on this mouse background, and thus allows the sophisticated study of disease pathogenesis and interrogation of the mechanistic action of novel therapeutics in combination with transgenic approaches. In this study, we demonstrate a simple approach to successfully induce EAN using the P0180-199 peptide in C57BL/6 mice. We also outline a protocol for the assessment of functional deficits that occur in this model, accompanied by an array of neuropathological features. Thus, this model is a powerful experimental model to study the pathogenesis of human peripheral demyelinating neuropathies, and to determine the efficacy of potential therapies that aim to promote myelin repair and protect against nerve damage in autoimmune neuritis.

This report outlines a simple approach to successfully induce experimental autoimmune neuritis (EAN) using the myelin protein zero (P0)180-199 peptide in combination with Freund&#39;s complete adjuvant and pertussis toxin. We present a sophisticated paradigm capable of accurately assessing the extent of functional deficits and neuropathology that occur in this EAN.

نهج بسيط للحث على العصب الذاتية التجريبية في الفئران C57BL/6 للتقييمات الفنية ولاثيل

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by ...

Cochlear Implant Surgery and Electrically-evoked Auditory Brainstem Response Recordings in C57BL/6 Mice

Cochlear implants (CIs) are neuroprosthetic devices that can provide a sense of hearing to deaf people. However, a CI cannot restore all aspects of hearing. Improvement of the implant technology is needed if CI users are to perceive music and perform in more natural environments, such as hearing out a voice with competing talkers, reflections, and other sounds. Such improvement requires experimental animals to better understand the mechanisms of electric stimulation in the cochlea and its responses in the whole auditory system. The mouse is an increasingly attractive model due to the many genetic models available. However, the limited use of this species as a CI model is mainly due to the difficulty of implanting small electrode arrays. More details about the surgical procedure are therefore of great interest to expand the use of mice in CI research.
In this report, we describe in detail the protocol for acute deafening and cochlear implantation of an electrode array in the C57BL/6 mouse strain. We demonstrate the functional efficacy of this procedure with electrically-evoked auditory brainstem response (eABR) and show examples of facial nerve stimulation. Finally, we also discuss the importance of including a deafening procedure when using a normally hearing animal. This mouse model provides a powerful opportunity to study genetic and neurobiological mechanisms that would be of relevance for CI users.

Animal models of cochlear implants can advance knowledge of the technological bases of treating permanent sensorineural hearing loss with electrical stimulation. This study presents a surgical protocol for acute deafening and cochlear implantation of an electrode array in mice as well as the functional assessment with auditory brainstem response.

جراحة زرع cochlear وتسجيلات استجابة جذع الدماغ السمعية أثارت كهربائياً في الفئران C57BL/6

Cochlear implants (CIs) are neuroprosthetic devices that can provide a sense of hearing to deaf people. However, a CI cannot restore all aspects of ...

Quantitative Measurement of Intrathecally Synthesized Proteins in Mice

Cerebrospinal fluid (CSF), a fluid found in the brain and the spinal cord, is of great importance to both basic and clinical science. The analysis of the CSF protein composition delivers crucial information in basic neuroscience research as well as neurological diseases. One caveat is that proteins measured in CSF may derive from both intrathecal synthesis and transudation from serum, and protein analysis of CSF can only determine the sum of these two components. To discriminate between protein transudation from the blood and intrathecally produced proteins in animal models as well as in humans, CSF protein profiling measurements using conventional protein analysis tools must include the calculation of the albumin CSF/serum quotient (Qalbumin), a marker of the integrity of the blood-brain interface (BBI), and the protein index (Qprotein/Qalbumin), an estimate of intrathecal protein synthesis. This protocol illustrates the entire procedure, from CSF and blood collection to quotients and indices calculations, for the quantitative measurement of intrathecal protein synthesis and BBI impairment in mouse models of neurological disorders.

Elevated spinal fluid protein levels can either be the result of diffusion of plasma protein across an altered blood-brain barrier or intrathecal synthesis. An optimized testing protocol is presented in this article that helps to discriminate both cases and provides quantitative measurements of intrathecally synthesized proteins.

القياس الكمي للبروتينات التركيبية داخل الفئران

Cerebrospinal fluid (CSF), a fluid found in the brain and the spinal cord, is of great importance to both basic and clinical science. The analysis of the ...

Murine Corneal Nerve Abrasion for the Induction of Neurotrophic Keratitis

To begin corneal abrasion, place an anesthetized mouse on a table. Apply a drop of artificial tear on the eye undergoing the surgery. Apply a drop of ocular gel on the contralateral eye.Next, position the mouse on its side on a heated plate. Gently use a cotton swab to absorb the artificial tear, and brush aside the mouse's eyelashes without making contact with the eye. Turn on the ocular burr, and carefully open the mouse's eyelid with two fingers.Simultaneously shield the vibrancy to prevent them from entangling in the burr. Locate the pupil or the eye center and gently apply the ocular burr to the eye's surface in circular motions until the epithelium is removed. Alternatively, perform about 20 circular movements on the cornea.Now apply a drop of fluorescent staining solution on the abraided eye. After 20 seconds, dab the eye with a tissue to absorb the solution. Then rinse it with a drop of artificial tear.Finally, absorb the artificial tear with a tissue, and illuminate the eye using a blue cobalt lamp. Prior to the surgery, the basal epithelium was intact and the nerve fibers in the sub basal plexus formed a vortex. The burr tip removed the outer corneal layer, leaving the stroma and endothelium intact with a visible gap at the basal epithelium and sub basal plexus.Regeneration of the epithelium occurred over a week post-surgery. However, the vortex remained absent from the corneal center.

الفئران تآكل العصب القرني لتحريض التهاب القرنية العصبي

نموذج الإجهاد الاجتماعي للمراهقين في الفئران C57BL / 6 للبحث السلوكي

Social Defeat Stress Model for Adolescent C57BL&#47;6 Male and Female Mice

Social adversity in adolescence is prevalent and can negatively impact mental health trajectories. Modeling social stress in adolescent male and female rodents is needed to understand its effects on ongoing brain development and behavioral outcomes. The chronic social defeat stress paradigm (CSDS) has been widely used to model social stress in adult C57BL/6 male mice by leveraging on the aggressive behavior displayed by an adult male rodent to an intruder invading its territory. An advantage of this paradigm is that it allows to categorize defeated mice into resilient and susceptible groups based on their individual differences in social behavior 24 h after the last defeat session. Implementing this model in adolescent C57BL/6 mice has been challenging because adult or adolescent mice do not typically attack early adolescent male or female mice and because adolescence is a short period of life, encompassing discreet temporal windows of vulnerability. This limitation was overcome by adapting an accelerated version of the CSDS to be used for adolescent male and female mice. This 4-day stress paradigm with 2 physical attack sessions per day uses a C57BL/6 male adult to prime the CD-1 mouse for aggressiveness such that it readily attacks the male or female adolescent mouse. This model was termed accelerated social defeat stress (AcSD) for adolescent mice. Adolescent exposure to AcSD induces social avoidance 24 h later in both males and females, but only in a subset of defeated mice. This vulnerability occurs despite the number of attacks being consistent across sessions between resilient and susceptible groups. The AcSD model is short enough to allow exposure during discrete periods within adolescence, allows the segregation of mice according to the presence or absence of social avoidance behavior, and is the first model available to study social defeat stress in adolescent C57BL/6 female mice.

تسليط الضوء على المؤلف: فهم آثار الشدائد الاجتماعية للمراهقين على النمو العصبي في الفئران

We developed an accelerated social defeat stress model for adolescent C57BL/6 mice, which works in both males and females and allows exposure during discrete adolescent periods. Exposure to this model induces social avoidance, but only in a subset of defeated male and female mice.

نموذج الإجهاد للهزيمة الاجتماعية للمراهقين C57BL / 6 ذكور وإناث الفئران

Social adversity in adolescence is prevalent and can negatively impact mental health trajectories. Modeling social stress in adolescent male and female ...