فإن الكتاب أود أن أشكر جميع أعضاء المختبر ريك، في الماضي والحاضر. نشكر كالفين باتن، الابن، DVM وبريجيت رابي، DVM، للحصول على تعليقات مفيدة بشأن البروتوكول. نود أن نعترف NIDDK، NCI، ومعهد علوم الصحة البيئية للحصول على الدعم المالي لهذه الدراسات: R01DK093690، R01CA123199، RC2ESO18764. TMN هو متدرب في برنامج التدريب الطبي العلماء في جامعة روتشستر بتمويل من المعاهد الوطنية للصحة T32 GM07356، والمعاهد الوطنية للصحة تحت L. روث كيرشتاين الخدمة الوطنية بحوث جائزة F30DK093173 كما يدعم هذا المشروع. معتمد من قبل CDV T32CA157322 وABT معتمد من قبل T32ES007015 في جامعة ويسكونسن ماديسون. المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للمعهد الوطني للعلوم الطبية العامة أو المعاهد الوطنية للصحة.

1. إعداد مضغوط هرمون / المخدرات بيليه <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي أن يتم هذا الإجراء في غطاء السلامة الكيميائية في حين يرتدي معطف المختبر، والقفازات، وقناع، ونظارات السلامة، وغطاء محرك السيارة. لمنع انتقال التلوث، فمن الأهمية بمكان أن المعدات صنع بيليه وتنظيفها مع الايثانول 70٪ قبل وبعد تصنيع كل نوع من بيليه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام نطاق والتحليلية وتزن الورق، وقياس المبلغ المطلوب من مسحوق هرمون / المخدرات. ينصح مواد اضافية ما يقرب من 5٪ لاستيعاب الخسارة خلال الضغط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعض الهرمونات / المخدرات تتطلب وكيل ملزمة أو حشو، والذي يخلط قبل بيليه تصنيع. على سبيل المثال، لصنع بيليه 2.5 ملغ من 17β استراديول، والجمع بين هذا الهرمون مع 22.5 ملغ من الكولسترول، مما يؤدي الى بيليه 25 ملغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل بعناية في مجموعة الموت، في ظل صحافة ودفع رافعة بقوة إلى أسفل لضغط بيليه. استخدام الضغط متسقة للحفاظ على سطح ثابت ووإلى نسبة الحجم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل عكس حامل يموت ودفع رافعة لأسفل مرة أخرى للافراج عن بيليه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تفقد بيليه للسلامة وتحديد ما إذا الشامل النهائي هو ضمن النطاق المطلوب. نطاق مقبول هو الفرق ± 5٪ في كتلة النهائية (على سبيل المثال، نطاق مقبول لبيليه 25 ملغ هو 23،8-26،3 ملغ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن إجراء الكريات قبل الجراحة وتخزينها (شروط ومدة التخزين يعتمد على استقرار هرمون أو عقار يستخدم في صنع بيليه). الكريات هرمون يمكن شراؤها كبديل لتكوير تصنيع. شراء الكريات يتجنب استخدام العقاقير الصف غير الدوائية لأنها سوف تصاغ وتتفاقم. </li></ol> 2. إعداد خلية المؤتلف Xenografts <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصاد والثقافة الابتدائية الماوس اللحمة المتوسطة البولي التناسلي (مادا) الخلايا اللحمية لمدة تقل عن 4 أسابيع قبل أن يتم جمعها لفرز الأصوات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثقافة خلد البروستاتا خطوط الخلايا الظهارية في فعاش المعتادأيون وجمع لفرز الأصوات. لهذا المثال، وإعداد الخلايا ترقيع المؤتلف عن طريق خلط 100،000 الخلايا الظهارية BPH-1 في الكسب غير المشروع مع 250،000 مادا الخلايا اللحمية في الكسب غير المشروع في التعليق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيليه الخلايا معا، وإعادة تعليق في نوع ما يكفي تحييد 1 ذيل فأر الكولاجين لجعل العدد المطلوب من الطعوم، كل في حجم 25 ميكرولتر إلى 50 ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين ترقيع المؤتلف عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقائق ثم تغطي مع متوسط ​​النمو للتخزين عند 37 درجة مئوية لمدة تصل إلى 48 ساعة قبل التطعيم. </li></ol> 3. إعداد Xenografts الأنسجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الاحتياطات العالمية لمسببات الأمراض التي تنتقل عن طريق الدم أثناء الشراء الأنسجة وإجراء العمليات الجراحية. بعد موافقة مجلس المراجعة المؤسسية والموافقة المسبقة، يجب الحصول أنسجة البروستاتا الطازجة من استئصال الجراحي. للدراسات النمو BPH، الأنسجة يمكن أن تحصد من استئصال البروستاتا عبر الاحليل من استئصال البروستاتا أو إجراءات بسيطة. xenografts الرئيسي للPRCA أو بروست حميدةويمكن الحصول على الأنسجة يأكلون من العينات استئصال البروستاتا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متجر تحصد الأنسجة في وسائل الإعلام خلية متساوي التوتر أو مخزنة المالحة العادي على الجليد. تبعا للظروف الأنسجة والتخزين، قد يتم تخزين العينات لمدة تصل إلى 24 ساعة قبل إعداد ترقيع الأنسجة. ممارسة شائعة هو تقسيم العينة إلى ثلاث قطع، مع مقطع واحد ثابت في الفورمالين وبشكل روتيني لمعالجة الأنسجة، قطعة واحدة المفاجئة المجمدة للتحليل الجزيئي وتقسيم قطعة واحدة الى مزيد من xenografts الأنسجة (1-3 ملم في الحجم). </li></ol> 4. إعداد النار مصقول ماصة الزجاج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ارتداء حماية العين، ومعطف المختبر وقفازات المقاومة للحرارة، ومكان الزجاج ماصة باستير طرف في بنسن لهب الموقد في ما يقرب من 60 درجة زاوية لبدء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على، حركة طفيفة المستمر لماصة وذلك لتجنب المناطق الساخنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم غيض رقيقة والنار البولندية بهدف كونه نهاية منحنية قليلا مع مدورة، أغلقت طرف. </li></رأ&gt; 5. إعداد أدوات وجناح للعمليات الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأوتوكلاف جميع الصكوك. قبل الجراحة، وفحص جميع الصكوك، مع الحرص على الحفاظ على مجال معقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انشاء منطقة الجراحية المعقمة مع منصات ماصة، نطاق تشريح، والتخدير مخروط الأنف، والأدوات الجراحية ومصباح التدفئة موجهة نحو منطقة العمل. لتعقيم الأدوات في بين الفئران، prewarm حبة تعقيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجميع وأجهزة التخدير الاختبار؛ تزن زبال الغاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الميكروويف، والحرارة منصات الشمع لمدة تصل إلى 5 دقائق (في 1 دقيقة الزيادات، والعجن وسادة الشمع من أجل الجمع بين ذاب الشمع وغير ذاب) في السلطة 70-80٪، حتى ذاب الشمع جميع بالتساوي. عن طريق اللمس، وضمان لوحة ليست ساخنة جدا ومكان تحت فارغة الانتعاش القوارض القفص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دون معدات الوقاية الشخصية للإجراءات الجراحية القوارض، بما في ذلك قناع جراحي، قلنسوة، والقفازات وثوب. </li></ol> 6. الإجراءات الجراحية: كبسولة الكلوي Xenografting<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب أن يتم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات البحوث بموافقة لجان رعاية الحيوان المؤسسية واستخدامها. قبل التخدير، ومراقبة الماوس لضمان الصحة والرفاه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في غرفة لتحريض التخدير isoflurane وعلى 3-5٪. عند الحيوان قد توقفت عن الحركة وانخفض معدل التنفس، ونقل إلى مخروط الأنف في وضعية الانبطاح، والحفاظ على التخدير في 1-3٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا لزم الأمر، واستخدام كليبرز حلق الخلفي من الماوس. ليست هناك حاجة هذا عند استخدام athymic عارية (نو / نو) الفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق الضغط على الشركة حزام من القدم الخلفية ممتدة لتقييم مدى كفاية تخدير. إذا يستجيب الماوس للضغط، هناك حاجة إلى مزيد من الوقت للتخدير نافذة المفعول. إذا لزم الأمر، وضبط تدفق التخدير قليلا لتحقيق التخدير الكافي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يتم تخدير الماوس بشكل كاف، وتطهير موقع الجراحية مع اليود الجراحية (بتدين) حل تليها70٪ كحول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دون قفازات معقمة وثوب، وتطبيق الستائر العقيمة إلى موقع الجراحية. رفع الجلد مرة أخرى مع زوج من ملقط مسنن، واستخدام مقص الخشنة جعل 2-3 سم خط الوسط الظهرية شق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص حادة أو التحقيق، فصل الأدمة الكامنة من جدار الجسم (على كلا الجانبين من شق لتطعيم الثنائية أو على جانب واحد من جانب واحد لترقيع). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة الماوس في الموقف الجانبي، وتحديد مكان وجود الكلى عن طريق عرض الملف الشخصي الكلوي من خلال جدار العضلات. تطبيق الضغط اليدوي لطيف مع الإبهام والسبابة على البطن قد تساعد في تصور الأعضاء الداخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص القزحية الجميلة، ومع الحرص على تجنب السفن الرئيسية والأعصاب في العمود الفقري، وجعل شق 1 سم في الجسم موازية لجدار العمود الفقري. توسيع هذا الشق إلى 1.5-2.0 سم (أطول قليلا من محور طويل من الكلى) عن طريق فتح بلطف مقص أوسع بعد وضعها في شق الأولي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من الداخل للظاهر الكلى من خلال تطبيق ضغط لطيف خارج الجدار العضلي على جانبي الكلى باستخدام السبابة والإبهام. شد حواف الجلد تحت الكلى exteriorized، والتي ستقع على جدار الجسم. بينما exteriorized الكلى، والحفاظ على ترطيب الكبسولة الكلوي من خلال تطبيق ملحي معقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط غرامة # 5 رفع بلطف الكبسولة الكلى من لحمة في الكلى مع وجود غرامة مشرط، وجعل 2 -4 مم شق في الكبسولة. يتم تحديد حجم شق حسب حجم الكسب غير المشروع، ولكن ينبغي أن يكون الحد الأدنى من أجل الحفاظ على سلامة الكبسولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التلاعب ماصة باستير الزجاج التي تم استخلاصها رقيقة وإطلاق النار مصقول مع نهاية مغلقة تقريب تحت الكبسولة عرضية إلى السطح في الكلى. بلطف فتح جيب كبسولة صغيرة للترقيع، وذلك باستخدام عناية كبيرة لا يلحق الضرر حمة الكلى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع حافة قطع من كبسولة الكلى مع ملقط غرامة، وأنا الكسب غير المشروعق إدراجها في جيب تحت الكبسولة باستخدام ماصة الزجاج المصقول النار. يمكن وضع عدة ترقيع تحت كبسولة الكلى ومتباعدة على سطح الكلى بالتساوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا، خلال التطعيم، يصبح كبسولة المجففة، ينبغي ترطيبها ذلك من خلال تطبيق ملحي معقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند اكتمال التطعيم، ورفع بلطف جانبي شق الجدار العضلي لتحل محل الكلى مرة أخرى إلى تجويف الجسم. نلاحظ أن ترقيع لا يخرج من تحت الكبسولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الجدار العضلي مع خياطة واحدة (4-0، FS-2 VICRYL خياطة). ويمكن تكرار العملية الجراحية على الكلى من خلال اعادة تموضع المقابل الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما تطعيم كاملة، والماوس قد يخضع تحت الجلد بيليه زرع خلال نفس العملية الجراحية (انظر البروتوكول الخطوة 7). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط مسنن، قم بمحاذاة حواف شق الجلد وتطبيق 2-3 مقاطع الجرح الجراحي لإغلاق الجرح. إدارة التسكين (نستخدم 5-10 ملغ / كغ carprofأون باستخدام الحقن تحت الجلد) ووضع الماوس في موقف راقد الجانبي في القفص الانتعاش. ضمان صيانة درجة حرارة الجسم مع حرارة من مصباح أو وسادة التدفئة. مراقبة عن الشفاء التام من الفأرة، والتي ينبغي أن تحدث في أقل من 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ينبغي التقيد الفئران للساعة 24 المقبل لعلامات الألم بعد الجراحة، والنزيف و / أو غيرها من المضاعفات. بانتظام تفتيش شق جراحي لعلامات العدوى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة مقاطع الجرح مع جهاز الجراحية إزالة مقطع الجرح بعد 7-14 أيام من الجراحة. </li></ol> 7. الإجراءات الجراحية: زرع تحت الجلد بيليه <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 6،1-6،5 من كبسولة الكلوي xenografting إجراء العمليات الجراحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع الجلد مرة أخرى مع زوج من ملقط الجلد، واستخدام مقص الخشنة جعل 1-2 سم خط الوسط الظهرية شق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص حادة أو التحقيق، فصل الأدمة الكامنة من جدار الجسم في اتجاه الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الجلد باستخدام ملقط،رفع بلطف الجانب الجمجمة من شق الجلد، وعقد هرمون بيليه بلطف مع مستقيم، ملقط مسنن، إدراج بيليه والافراج في القفا من الرقبة، في جيب قمت بإنشائه مع التحقيق حادة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات 6،18-6،20 من كبسولة الكلوي xenografting إجراء العمليات الجراحية. إذا أداء زرع تحت الجلد بيليه فقط، استخدم 1 الجراحية مقطع الجرح لإغلاق شق جراحي. </li></ol>

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Facts Figures. 4, (2010).</li><li>McVary, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BPH:+epidemiology+and+comorbidities.">BPH: epidemiology and comorbidities.</a> Am. J. Manag. Care. 12, S122-S128 (2006).</li><li>Nicholson, T. M., Ricke, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgens+and+estrogens+in+benign+prostatic+hyperplasia:+past,+present+and+future.">Androgens and estrogens in benign prostatic hyperplasia: past, present and future.</a> Differentiation. 82, 184-199 (2011).</li><li>Ricke, W. A., Wang, Y., Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormones+and+carcinogenesis+of+the+prostate:+the+role+of+estrogens.">Steroid hormones and carcinogenesis of the prostate: the role of estrogens.</a> Differentiation. 75, 871-882 (2007).</li><li>Ricke, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormones+stimulate+human+prostate+cancer+progression+and+metastasis.">Steroid hormones stimulate human prostate cancer progression and metastasis.</a> Int. J. Cancer. 118, 2123-2131 (2006).</li><li>Belanger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+serum+concentrations+of+conjugated+and+unconjugated+steroids+in+40-+to+80-year-old+men.">Changes in serum concentrations of conjugated and unconjugated steroids in 40- to 80-year-old men.</a> J. Clin. Endocrinol. 79, 1086-1090 (1994).</li><li>Nicholson, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testosterone+and+17beta-estradiol+induce+glandular+prostatic+growth,+bladder+outlet+obstruction,+and+voiding+dysfunction+in+male+mice.">Testosterone and 17beta-estradiol induce glandular prostatic growth, bladder outlet obstruction, and voiding dysfunction in male mice.</a> Endocrinology. 153, 5556-5565 (2012).</li><li>Str&#246;m, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomy+and+17&#946;-estradiol+Replacement+in+Rats+and+Mice:+A+Visual+Demonstration.">Ovariectomy and 17&#946;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration.</a> J. Vis. Exp. (64), e4013 (2012).</li><li>Szot, G. L., Koudria, P., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+Pancreatic+Islets+Into+the+Kidney+Capsule+of+Diabetic+Mice.">Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice.</a> J. Vis. Exp. (9), e404 (2007).</li><li>Aamdal, S., Fodstad, O., Nesland, J. M., Pihl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+human+tumour+xenografts+transplanted+under+the+renal+capsule+of+immunocompetent+mice.">Characteristics of human tumour xenografts transplanted under the renal capsule of immunocompetent mice.</a> Brit. J. Cancer. 51, 347-356 (1985).</li><li>Cunha, G. R., Lung, B., Reese, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glandular+epithelial+induction+by+embryonic+mesenchyme+in+adult+bladder+epithelium+of+BALB/c+mice.">Glandular epithelial induction by embryonic mesenchyme in adult bladder epithelium of BALB/c mice.</a> Investigative urology. 17, 302-304 (1980).</li><li>Norman, J. T., Cunha, G. R., Sugimura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+induction+of+new+ductal+growth+in+adult+prostatic+epithelium+in+response+to+an+embryonic+prostatic+inductor.">The induction of new ductal growth in adult prostatic epithelium in response to an embryonic prostatic inductor.</a> The Prostate. 8, 209-220 (1986).</li><li>Hayward, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+adult+human+prostatic+epithelium+and+rat+urogenital+sinus+mesenchyme+in+a+tissue+recombination+model.">Interactions between adult human prostatic epithelium and rat urogenital sinus mesenchyme in a tissue recombination model.</a> Differentiation. 63, 131-140 (1998).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+prostatic+epithelial+model+of+hormonal+carcinogenesis.">A human prostatic epithelial model of hormonal carcinogenesis.</a> Cancer Res. 61, 6064-6072 (2001).</li><li>Ricke, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+hormone+action+in+prostatic+carcinogenesis:+stromal+androgen+receptors+mediate+prostate+cancer+progression,+malignant+transformation+and+metastasis.">Androgen hormone action in prostatic carcinogenesis: stromal androgen receptors mediate prostate cancer progression, malignant transformation and metastasis.</a> Carcinogenesis. 33, 1391-1398 (2012).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+efficient+xenograft+models+for+benign+and+malignant+human+prostate+tissue.">Development and characterization of efficient xenograft models for benign and malignant human prostate tissue.</a> The Prostate. 64, 149-159 (2005).</li><li>Goto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximal+prostatic+stem+cells+are+programmed+to+regenerate+a+proximal-distal+ductal+axis.">Proximal prostatic stem cells are programmed to regenerate a proximal-distal ductal axis.</a> Stem Cells. 24, 1859-1868 (2006).</li><li>Xin, L., Ide, H., Kim, Y., Dubey, P., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+regeneration+of+murine+prostate+from+dissociated+cell+populations+of+postnatal+epithelia+and+urogenital+sinus+mesenchyme.">In vivo regeneration of murine prostate from dissociated cell populations of postnatal epithelia and urogenital sinus mesenchyme.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 11896-11903 (2003).</li><li>Priolo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+genomic+characterization+of+mouse+xenografts+of+human+primary+prostate+tumors.">Establishment and genomic characterization of mouse xenografts of human primary prostate tumors.</a> Am. J. Pathol. 176, 1901-1913 (2010).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Mulder, G. B., Luo, Y., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+Rodent+Surgery+for+the+New+Surgeon.">Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), e2586 (2011).</li></ol>

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

هذه الورقة والبروتوكول المبينة في هذه الوثيقة تصف تصنيع هرمون مضغوط و / أو الكريات المخدرات، وإجراء العمليات الجراحية لزرع تحت الجلد بيليه من الفئران. اعتمادا على سؤال البحث إلى معالجة، هذه التقنية يمكن القيام بها منفردة، أو مجتمعة مع الكلوي xenografting كبسولة من الخلاي?...

سرطان البروستاتا (PRCA) وتضخم البروستاتا الحميد (BPH) هي أعباء صحية كبيرة. PRCA هو الثاني الأكثر انتشارا سرطان الجهاز الصلبة في الرجال والسبب الرئيسي للسرطان وفاة 1 ذات الصلة. BPH هو أيضا واسع الانتشار بين كبار السن من الرجال، وتشير التقديرات إلى أن مظاهر سريرية من BPH، وانخفاض أعراض المسالك البولية (طرفيات)، وسوف تؤثر على 50-90٪ من الرجال 2. بينما يعرف الاندروجين والاستروجين إلى أن تكون مهمة في PRCA وBPH، فهمنا لآليات التسرطن الهرمونية التي تكمن وراء والنمو لا تزال غير مكتملة 3،4. نماذج حيوانية بسيطة ولين العريكة وراثيا تدعم الدراسات التي من شأنها معالجة هذه الأولويات في مجال البحوث البروستاتا. في استجابة هرمون الأمراض مثل PRCA وBPH، واستخدام تحت الجلد، وبطء الكريات هرمون الإفراج عنهم، في عزلة أو بالاشتراك مع كبسولة الكلوي xenografting (نقل الخلايا أو الأنسجة أو الأعضاء من نوع واحد إلى آخر) في immunocompالمضيف الماوس romised، يوفر طريقة بسيطة وقابلة للتكرار لدراسة التنظيم الهرموني للنمو والتسرطن. تحت الجلد هرمون بيليه الزرع هو تقنية بسيطة وقابلة للتكرار لدراسة التنظيم الهرموني التسرطن والنمو حميدة في البروستات 5. زرع تحت الجلد من الفئران الذكور البالغين مع 25 ملغ هرمون تستوستيرون (T) و 2.5 ملغ 17β استراديول (E 2)، يسبب زيادة في المصل ض 2 والانخفاض التدريجي في خميس، وإعادة البيئة الهرمونية الحيوية من كبار السن من الرجال 5،6. بالإضافة إلى ذلك، هذا النموذج يلخص العديد من المظاهر السريرية لBPH-طرفيات 5،7. طرق بديلة لإدارة هرمون تشمل تناوله عن طريق الفم / التغذية الأنبوبية أو الحقن داخل الصفاق، والذي يسبب الضيق إلى القوارض، هي أقل اتساقا في تقديم نفس الكمية من المخدرات على مر الزمن، وأكثر من مرة واحدة الزرع الجراحية التي تتطلب عمالة مكثفة. وسائط أخرى تحت الجلد لحormone و / أو تسليم المخدرات تشمل كبسولات Silastic 8. في حين لدينا أيضا تجربة مع استخدام كبسولات Silastic، ويفضل الكريات مضغوط لسهولة استخدامها والتكاثر. وعلاوة على ذلك، فإن معدلات الافراج عن الكريات هرمون مضغوط أفضل تحاكي الجنس ديناميكية نسب هرمون الستيرويد لوحظ في كبار السن من الرجال 5،7. منذ تطوير الفئران المناعة وراثيا، وقد تم تطوير العديد من أنظمة الجسم الحي في نموذج دمج تقنيات xenografting لدراسة مجموعة واسعة من الأنسجة الطبيعية والمريضة. هناك عدة فئات أساسية من xenografting. تتكون xenografts أنسجة قطعة صغيرة من الأنسجة سليمة، والتي يمكن أن تكون بنية عادية، ورم خبيث، أو النمو حميدة. Szot وآخرون (2007) لقد أضاءت مؤخرا الكلوي xenografting كبسولة من الجزر البنكرياسية 9. وصف Aamdal وآخرون (1985) الكلوي xenografting كبسولة من 27 خطوط الخلايا السرطانية البشرية في ايمالماوس munocompromised يستضيف 10. ويمكن أيضا أن تتكون من ترقيع خط خلية واحدة مخلد (سرطانية أو غير مكون للأورام)، أو يمكن أن تتكون من خط خلية خلد جنبا إلى جنب مع الخلايا المعزولة من اللحمة المتوسطة (خلية الكسب غير المشروع المؤتلف). نؤيد xenografting من recombinants خلية لبحث دور كل من سدى وظهارة في تطوير PRCA وBPH. كان كونها وآخرون (1980) أول من أشار إلى أنه عندما يتم الجمع بين الكبار الفئران الجنينية مع ظهارة المثانة البولية التناسلية اللحمة المتوسطة الجيوب الأنفية (مادا) وxenografted تحت كبسولة الكلى الجنود الفئران الذكور، والأنسجة تطور الى هياكل تشبه البروستاتا عنيبات ​​11. أظهر نورمان وآخرون (1986) أن الفأر الكبار البروستاتا ظهارة الأقنية ومادا، عند دمجها في recombinants الأنسجة، والخضوع لنمو الأقنية المتفرعة والتشكل 12. أظهرت هايوارد وآخرون (1988) أن ظهارة البروستاتا الإنسان يستجيب لحثي متر الجنينesenchyme بطريقة مماثلة 13. نموذج الهرمونية التسرطن في البروستاتا، من خلال الجمع بين خلد البروستاتا البشرية خط الخلايا الظهارية، أفيد BPH-1 مع مادا أول مرة من قبل وانغ وآخرون 14 (2001)، واستخدمت على نطاق واسع في مختبرنا 15. هذا النموذج هو مناسبة تماما لفهم تطور PRCA لأن ظهارة البروستاتا الحميد يتحول إلى المرض المنتشر، والنمذجة المتقدمة PRCA في البشر 5. لأن مكونات محددة يمكن التلاعب بها وراثيا، خلية تطعيم المؤتلف مفيد بشكل خاص كنهج لتقييم التفاعلات اللحمية الظهارية. مواقع أخرى مناسبة لxenografting هي داخل الجلد، تحت الجلد ومواقع مثلي 16. اعتمادا على عملية نسيج والمرض من الاهتمام، قد تكون هذه النهج البديلة مناسبة. لدراسة التسرطن الهرمونية البروستاتا وتنظيم النمو حميدة، نختار الكبسولة الكلويموقع لxenografting بسبب الكسب غير المشروع أعلى معدل لها، وإمدادات وفيرة من الدم، والقدرة على زرع عدد أكبر من xenografts في موقع واحد يقتصر 16 اتخاذها. وعلاوة على ذلك، والتلاعب الهرمونية من الفأرة المضيف الذي يؤدي إلى ضمور البروستاتا يحد من استخدام البروستاتا تطعيم مثلي 16. يحدد هذا البروتوكول تقنيات ضغط هرمون / المخدرات بيليه تصنيع وزرع جراحية، وكذلك الكلوي xenografting كبسولة من الخلايا في البروستاتا البشرية والأنسجة الطعوم. معا، توفر هذه التقنيات مقايسة حساسة لتحديد ما إذا كان الماوس المعدلة وراثيا هي أكثر عرضة للPRCA و / أو الشروع BPH من سلالات السيطرة. Xenografting هي تقنية قوية لفي الجسم الحي تقييم إمكانات الخلايا التجريبية لتطوير نسيجية والميزات الجزيئية الخباثة، فضلا عن فحص لاستراتيجيات العلاج الرواية لطائفة واسعة من الأمراض الحميدة والخبيثة.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EQUIPMENT &amp; MATERIALS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pellet press</td>
			<td>PARR Industries </td>
			<td>2815</td>
			<td>3mm Punch &amp; Die set</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Analytical Balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>1918302</td>
			<td>Voyager or other</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Bunsen burner</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-962Q</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>L2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Deltaphase Pad Kit (reheatable wax)</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>39DP</td>
			<td>Alternative to an electric heating pad</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Hot Bead sterilizer</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>18000-45</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Isoflurane Vaporizer</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>VAP3000</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Induction Chamber</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>RES644</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>F/AIR Canister</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>80120</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>4 port Manifold</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>RES536</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Rebreathing Circuits</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>CIR529</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Inlet/Outlet Fittings</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>VAP203/4</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pressure Reg/Gauge</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>OXY508</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Oxygen Flowmeter</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>OXY660</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>21mm Clear Tubing</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>301-150</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Small Mice Nose Cone</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>ACC526</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile surgical gown</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>350.79866.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Surgical mask</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>350.50111.2</td>
			<td>2-ply w/ earloops</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile gauze</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.14100.2</td>
			<td>2 x 2 inches</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile Gloves</td>
			<td>Kimberly Clark</td>
			<td>55092</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Bouffant</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.27100.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cotton Tip Applicator</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.06220.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Surgical Scrub Wash</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>733.80010.3</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile Fields (Fenestrated)</td>
			<td>General Econopak, Inc</td>
			<td>88VCSTF</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>REAGENTS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C-3292</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Testosterone Proprionate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T-1875</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>17&beta;-estradiol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E-2758</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.33161.3</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.70200.3</td>
			<td>Injectable (Rimadyl)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Webster Veterinary</td>
			<td>07-836-3379</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.74504.3</td>
			<td>NaCl 0.9%, Injectable</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>SURGICAL INSTRUMENTS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Straight Sharp/Blunt Scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tools (F.S.T.)</td>
			<td>14054-13</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Toothed, Curved)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11055-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fine Iris scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14090-09</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe Scalpel</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>10071-12</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dumont #5 forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glass Pasteur pipets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S67050</td>
			<td>5" length</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Curved)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Straight)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11050-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Vicryl Suture</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>295-92100.2</td>
			<td>4-0, FS-2, Absorbable</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Needle Holder w/ scissor action</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12002012</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Wound Clips</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>ACS CS</td>
			<td>May use 7mm or 9mm clips</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Reflex Wound Clipper</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12031-09</td>
			<td>Correspond w/ wound clip size</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Would Clip Remover</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12033-00</td>
			<td>Universal</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterilization Container</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>20810-01</td>
			<td>Any autoclavable container will do</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Syringe w/ needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>148292C</td>
			<td>1cc, 25Gx1</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ear Tag Applicator</td>
			<td>National Band &amp; Tag Co.</td>
			<td>1005s1</td>
			<td>Alternative to ear notching</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Small Animal Ear Tags</td>
			<td>National Band &amp; Tag Co.</td>
			<td>1005-1</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

renal capsule xenografting and subcutaneous pellet implantation for the evaluation of prostate carcinogenesis and benign prostatic hyperplasia

علاجات جديدة لاثنين من الأمراض الشائعة في البروستاتا، وسرطان البروستاتا (PRCA) وتضخم البروستاتا الحميد (BPH)، وتعتمد بشكل كبير على التجارب تقييم تنظيمها الهرمونية. الهرمونات الجنسية الستيرويد (وخاصة الاندروجين والاستروجين) مهمة في PRCA وBPH، ونحن سبر دور كل منهما في إحداث نمو البروستاتا والتسرطن في الفئران مع التجارب باستخدام الكريات هرمون مضغوط. يتم تصنيع الهرمون و / أو المخدرات الكريات بسهولة مع الصحافة بيليه، وجراحيا زرعها في الأنسجة تحت الجلد للمضيف الماوس الذكور. نحن أيضا وصف بروتوكول لتقييم التسرطن الهرمونية تحت الجلد عن طريق الجمع بين هرمون زرع بيليه مع xenografting من recombinants خلية البروستاتا تحت كبسولة الكلى من الفئران المناعة. علاوة على ذلك، هرمون تحت الجلد بيليه الزرع، بالاشتراك مع الكلوي xenografting كبسولة من الأنسجة BPH، من المفيد أن نفهم على نحو أفضل من التنظيم الهرموني بروست حميدةأكلت النمو، واختبار علاجات جديدة تستهدف الجنس هرمون الستيرويد مسارات.

<html> اعتمادا على فرضية لفحصها، الكلوي xenografting كبسولة من الأنسجة أو الخلايا recombinants لا يمكن أن يؤديها في عزلة، أو بالاشتراك مع هرمون تحت الجلد بيليه الزرع. ويتضح التخطيطي للتجربة افتراضية تجمع بين التجربة كبسولة الكلوي xenografting مع هرمون تحت الجلد بيليه الزرع في الشكل ...

Watch this Scientific Journal Video about Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia at JoVE.com

Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

وصفنا تصنيع الكريات هرمون مضغوط، فضلا عن زرع جراحية تحت الجلد في الفئران. هذه الاستراتيجية يمكن دمجها مع نمو الخلية والأنسجة xenografts تحت كبسولة الكلى من الفئران عارية athymic لتقييم التسرطن الهرمونية وتنظيم نمو البروستاتا الحميد.

كبسولة الكلوي Xenografting وتحت الجلد بيليه الزرع لتقييم البروستات التسرطن وتضخم البروستاتا الحميد

New therapies for two common prostate diseases,  prostate cancer (PrCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH), depend  critically on experiments ...

renal-capsule-xenografting-subcutaneous-pellet-implantation-for

Research

JoVE Journal

Medicine

24.9K Views.  University of Wisconsin-Madison.  وصفنا تصنيع الكريات هرمون مضغوط، فضلا عن زرع جراحية تحت الجلد في الفئران. هذه الاستراتيجية يمكن دمجها مع نمو الخلية والأنسجة xenografts تحت كبسولة الكلى من الفئران عارية athymic لتقييم التسرطن الهرمونية وتنظيم نمو البروستاتا الحميد. 

Video: Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

تقييم امتصاص الجسيمات النانوية في الأورام في الوقت الحقيقي باستخدام التصوير Intravital

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Cell Population Analyses During Skin Carcinogenesis

Cancer development is a multiple-step process involving many cell types including cancer precursor cells, immune cells, fibroblasts and endothelial cells. Each type of cells undergoes signaling and functional changes during carcinogenesis. The current challenge for many cancer researchers is to dissect these changes in each cell type during the multiple-step process in vivo. In the last few years, the authors have developed a set of procedures to isolate different cell populations during skin cancer development using K14creER/R26-SmoM2YFP mice. The procedure is divided into 6 parts: 1) generating appropriate mice for the study (K14creER+ and R26-SmoM2YFP+ mice in this protocol); 2) inducing SmoM2YFP expression in mouse skin; 3) preparing mouse skin biopsies; 4) isolating epidermis from skin; 5) preparing single cells from epidermis; 6) labeling single cell populations for flow cytometry analysis. Generation of sufficient number of mice with the right genotype is the limiting step in this protocol, which may take up to two months. The rest of steps take a few hours to a few days. Within this protocol, we also include a section for troubleshooting. Although we focus on skin cancer, this protocol may be modified to apply for other animal models of human diseases.

Carcinogenesis is a process involving interactions between cancer cells and the cancer microenvironment. To dissect the molecular events, one needs to isolate different cell populations at different stages during cancer development. Using a mouse model for basal cell carcinoma, we describe a protocol for cell analyses during carcinogenesis.

تحليلات السكان الخلية خلال الجلد التسرطن

Cancer development is  a multiple-step process involving many cell types including cancer precursor  cells, immune cells, fibroblasts and endothelial ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or subvert anti-tumor immune responses in order to survive and flourish. Tumors take advantage of a number of different mechanisms of immune &#8220;escape,&#8221; including the recruitment of tolerogenic DC, immunosuppressive regulatory T cells (Tregs), and myeloid-derived suppressor cells (MDSC) that inhibit cytotoxic anti-tumor responses. Conversely, anti-tumor effector immune cells can slow the growth and expansion of malignancies: immunostimulatory dendritic cells, natural killer cells which harbor innate anti-tumor immunity, and cytotoxic T cells all can participate in tumor suppression. The balance between pro- and anti-tumor leukocytes ultimately determines the behavior and fate of transformed cells; a multitude of human clinical studies have borne this out. Thus, detailed analysis of leukocyte subsets within the tumor microenvironment has become increasingly important. Here, we describe a method for analyzing infiltrating leukocyte subsets present in the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Mouse B16 melanoma tumor cells were inoculated subcutaneously in C57BL/6 mice. At a specified time, tumors and surrounding skin were resected en bloc and processed into single cell suspensions, which were then stained for multi-color flow cytometry. Using a variety of leukocyte subset markers, we were able to compare the relative percentages of infiltrating leukocyte subsets between control and chemerin-expressing tumors. Investigators may use such a tool to study the immune presence in the tumor microenvironment and when combined with traditional caliper size measurements of tumor growth, will potentially allow them to elucidate the impact of changes in immune composition on tumor growth. Such a technique can be applied to any tumor model in which the tumor and its microenvironment can be resected and processed.

This protocol describes a method for the detailed evaluation of leukocyte subsets within the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Chemerin-expressing B16 melanoma cells were implanted subcutaneously into syngeneic mice. Cells from the tumor microenvironment were then stained and analyzed by flow cytometry, allowing for detailed leukocyte subset analyses.

تقييم-التسلل ورم خلايا الدم البيضاء مجموعات فرعية في ورم تحت الجلد نموذج

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine balloon denudation model, which is comparable with established vessel injury models in large animals. The aorta denudation model with balloon catheters mimics the clinical setting and leads to comparable pathobiological and physiological changes. Briefly, after performing a horizontal incision in the aorta abdominalis, a balloon catheter will be inserted into the vessel, inflated, and introduced retrogradely. Inflation of the balloon will lead to intima injury and overdistension of the vessel. After removing the catheter, the aortic incision will be closed with single stiches. The model shown in this article is reproducible, easy to perform, and can be established quickly and reliably. It is especially suitable for evaluating expensive experimental therapeutic agents, which can be applied in an economical fashion. By using different knockout-mouse strains, the impact of different genes on MH development can be assessed.

This article demonstrates a murine model to study the development of myointimal hyperplasia (MH) after aortic balloon injury.

إصابة القائم على البالون لحمل ميوينتيمال تضخم في الشريان الاورطي البطني الماوس

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the quality of life. BPH includes 2 major treatments: medication and surgery. Surgical treatment is often the most effective and final intervention. Holmium laser enucleation of the prostate (HoLEP), one of the most efficient surgical procedures for BPH, is conducted transurethrally. During surgery, the most important and most difficult part is to locate the surgical capsule of the prostate, which is consistent to the idea of anatomic surgery. Different skills may be needed in treating different parts of the prostate. HoLEP tends to be efficient and safe with good hemostatic properties, and able to treat bladder calculus, which may be the complications of BPH. The technique is particularly suitable for prostate of varying volumes and sizes. Indeed, HoLEP also presents certain disadvantages, such as a long learning curve and costly equipment. Regardless, this method may be the "new standard" and the excellent method for the surgical treatment of BPH.

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate HoLEP.

Here we present a safe and efficient protocol, holmium laser enucleation of the prostate, to treat benign prostatic hyperplasia.

المعالجة الجراحية لتضخم البروستاتا الحميد: انوكلييشن ليزر هولميوم البروستات (هليب).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the ...

Enucleation of the Prostate for the Treatment of Benign Prostatic Hyperplasia Using a 980 nm Diode Laser

In the aging male population, the occurrence of lower urinary tract symptoms (LUTS) caused by benign prostatic hyperplasia (BPH) is a common problem. Here, we introduce a new technique called 980 nm diode laser enucleation (DiLEP) to treat BPH1. Diode lasers can absorb both water and hemoglobin at the same time, so they are good for cutting and hemostasis2. The diode laser was approved by the FDA in 2007, and has been used in the treatment of BPH because of its effective cutting and hemostasis effect3. DiLEP presents several advantages over other techniques, such as TURP, HoLEP, and PVP. During the procedure, we define the boundary of a high-volume prostate and separate it into three lobes with a diode laser by burning two rings and one groove (like a Cupid&#39;s arrow). Compared to other procedures, mDiLEP has fewer intraoperative complications, a shorter learning curve, and achieves more tissue resection.

Here, we present a protocol for modified 980 nm diode laser enucleation to treat large volume benign prostatic hyperplasia.

استئصال البروستاتا لعلاج تضخم البروستاتا الحميد باستخدام ليزر 980 نانومتر

In the aging male population, the occurrence of lower urinary tract symptoms (LUTS) caused by benign prostatic hyperplasia (BPH) is a common problem. ...

Direct Drug Delivery to Kidney via the Renal Artery

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research field. Accumulation of drugs in certain organs may give rise to adverse and unwanted effects, depending on the nature of injectate. To minimize spillover and/or accumulation in other tissues, the herein described method directs the formulation into the renal artery bloodstream by inserting a catheter in the infra renal aorta, just below where it branches into the renal artery, resulting in the kidney as first reached organ and distributing of formulation throughout the kidney.
This manuscript provides a detailed description of the method, as well as its challenges and difficulties. It guides the experimenter to become skillful with this type of microsurgery that requires accuracy under sterile conditions. Speed is crucial for minimizing the ischemia and practicing the procedure will increase the chance of successful injections without adverse effects. By modulating the time between injection and reperfusion as well as the injected volume, the risk of spillover to other organs is mitigated. 
Note that this technique is suitable for single dosing strategies.

This manuscript describes a method for targeted delivery to a single kidney via a catheter placed in the infrarenal abdominal aorta in the mouse.

توصيل الأدوية مباشرة إلى الكلى عبر الشريان الكلوي

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to detect drug exposure. The rat blood sampling method determines the quality of the plasma and further affects the precision of the test results. The subclavian vein blood collection method described in this protocol collects blood samples repeatedly in the conscious state of animals to meet the needs of PK and TK tests. The skills of restraint handling and appropriate procedure of needle incision ensure the success rate of blood collection. It is easy to operate while ensuring the quality of plasma and at the same time catering to animal welfare. However, this method requires skilled operation, and an improper one may cause animal weakness, pain, lameness, and even mortality. The current method has been used in the testing facility for a 4-week oral toxicity study in Sprague Dawley (SD) rats with TK. The maximum amount of blood collected within 24 h did not exceed 20% of the animal's total blood. The animals' body weight was more than 200 g for males and females. The data showed that the animals' bodyweight increased steadily every week, and the clinical observation was normal after repetitive sample collection.

The present protocol describes a simple and efficient method for collecting blood from the subclavian vein in rats. It enables rapid, timely, and easily identifiable sampling without anesthesia and obtains high-quality blood through repetitive sample collection.

أخذ عينات الدم المتكررة من الوريد تحت الترقوة للفأر الواعي

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...

A Retrograde Implantation Approach for Peritoneal Dialysis Catheter Placement in Mice

Murine models are employed to probe various aspects of peritoneal dialysis (PD), such as peritoneal inflammation and fibrosis. These events drive peritoneal membrane failure in humans, which remains an area of intense investigation due to its profound clinical implications in managing patients with end-stage kidney disease (ESKD). Despite the clinical importance of PD and its related complications, current experimental murine models suffer from key technical challenges that compromise the models&#39; performance. These include PD catheter migration and kinking and usually warrant earlier catheter removal. These limitations also drive the need for a greater number of animals to complete a study. Addressing these drawbacks, this study introduces technical improvements and surgical nuances to prevent commonly observed PD catheter complications in a murine model. Moreover, this modified model is validated by inducing peritoneal inflammation and fibrosis using lipopolysaccharide injections. In essence, this paper describes an improved method to create an experimental model of PD.

This article describes modifications of a procedure to implant a peritoneal dialysis catheter in a murine model to avoid major technical issues observed with the conventional techniques.

نهج الزرع الرجعي لوضع قسطرة غسيل الكلى البريتوني في الفئران

Murine models are employed to probe various aspects of peritoneal dialysis (PD), such as peritoneal inflammation and fibrosis. These events drive ...

Systematic Hearing Performance Evaluation Process for Adolescents with Cochlear Implantation at Early Ages

Cochlear implant (CI) provision is the most effective clinical treatment to restore hearing performance in individuals with profound sensorineural hearing loss (SNHL). It has been successful in providing improved speech perception outcomes, especially in quiet environments. However, speech perception performance within complex environments, lexical tone recognition, and music perception have been shown to only improve with newer fine structure coding strategies or related techniques. Therefore, the methods used to assess hearing performance in noisy environments, lexical tone recognition, and music perception are of vital importance. These assessments must reflect the postoperative outcomes and also provide guidance for the programming, rehabilitation, and application of new coding strategies. In this study, hearing performance in simple and complex situations was evaluated before and after upgrading to a fine structure strategy. The participants were a cohort of Mandarin-speaking adolescents, who were experienced CI users. The comprehensive clinical workflow involved assessments of speech in quiet conditions, speech in noisy conditions, lexical tone recognition, and music perception. This battery of tests is explained in detail, from the coding strategy to the test methods, including the test process, environment, device, material, and order. The details that require special attention are discussed, such as the position of the participants, the angle of the loudspeaker, the intensity of the sound, the noise type, the practice test, and the way of answering questions. Each test step, method, and material for speech, lexical tone, and music perception is presented in detail. Finally, the clinical results are discussed.

This paper describes a battery of tests used to clinically assess the hearing performance of adolescent, Mandarin-speaking, experienced cochlear implant users upgraded to a new fine structure coding strategy. The battery of tests include speech in quiet conditions, speech in noisy conditions, lexical tone, and music perception.

عملية تقييم الأداء السمعي المنهجي للمراهقين الذين خضعوا لزراعة قوقعة الأذن في سن مبكرة

Cochlear implant (CI) provision is the most effective clinical treatment to restore hearing performance in individuals with profound sensorineural hearing ...