המחברים מבקשים להודות לכל חברים במעבדה Ricke, בעבר ובהווה. אנו מודים לקלווין פאטן, הבן, DVM ובריז&#39;יט ראבה, רופאת וטרינרית, על הערות מועילות לגבי הפרוטוקול. ברצוננו להודות NIDDK, NCI, וNIEHS על התמיכה הכספית למחקרים אלה: R01DK093690, R01CA123199, RC2ESO18764. TMN הוא חניך בתכנית ההכשרה הרפואי מדען באוניברסיטת רוצ&#39;סטר שמומן על ידי NIH T32 GM07356; NIH תחת רות ל &#39;Kirschstein השירות הלאומי לחקר פרס F30DK093173 תומך גם בפרויקט זה. CDV נתמך על ידי T32CA157322 וABT נתמך על ידי T32ES007015 באוניברסיטת ויסקונסין במדיסון. התוכן הוא באחריות בלעדית של הכותבים ולא בהכרח מייצג את הדעות הרשמיות של המכון הלאומי למדעי רפואה כלליים או NIH.

1. הכנת דחוסה הורמונים / תרופות גלולה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הליך זה צריך להיעשות במנדף בטיחות כימי בזמן שהוא לובש מעיל מעבדה, כפפות, מסיכה, משקפי מגן, ומכסה מנוע. כדי למנוע זיהום צולב, זה קריטי, כי ציוד גלולה קבלת הוא ניקה ביסודיות עם אתנול 70% לפני ואחרי הייצור של כל סוג של גלולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בקנה מידה אנליטית ולשקול נייר, למדוד כמות רצויה של אבקת הורמון / סמים. כ 5% חומר נוסף מומלץ כדי להתאים הפסד בלחיצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כמה הורמונים / תרופות דורשות סוכן מחייב או מילוי, שהוא מעורב לפני גלולה ייצור. לדוגמה, כדי לייצר גלולה 2.5 מ&quot;ג 17β-אסטרדיול, ההורמון לשלב עם 22.5 מ&quot;ג של כולסטרול, שתוצאתה גלולה 25 מ&quot;ג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר בזהירות לתוך סט למות, מקום תחת לחץ ולדחוף את הידית בחוזקה כלפי מטה כדי לדחוס גלולה. השתמש בלחץ עקבי כדי לשמור על משטח קבוע הםיחס נפח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבא להפוך את בעל למות ולדחוף את הידית כלפי מטה שוב כדי לשחרר את הכדור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק גלולה לשלמות ולקבוע אם מסה סופית נמצאת בטווח רצוי. טווח מקובל הוא הבדל ± 5% במסה הסופית (לדוגמא, טווח מקובל לגלולת 25 מ&quot;ג הוא 23.8-26.3 מ&quot;ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלטות יכולות להתבצע לפני ניתוח ומאוחסן (תנאים ואורך של אחסון תלוי ביציבות של ההורמון או תרופה המשמש בייצור גלולה). ניתן לרכוש כדורי הורמון כחלופה לגלולת ייצור. רכישת כדורים תמנע את השימוש בתרופות בדרגה שאינן תרופתיות ומאז הם יגובשו ומורכבים. </li></ol> 2. הכנת הנייד xenografts רקומביננטי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קציר ועכבר עיקרי תרבות mesenchyme ואברי המין (UGM) תאי סטרומה בפחות מ -4 שבועות לפני שנאסף לספירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות הונצחה שורות תאי אפיתל בערמונית fash כרגיליון ולאסוף לספירה. בדוגמה זו, להכין תלי רקומביננטי תא על ידי ערבוב של 100,000 תאי האפיתל BPH-1 לכל שתל עם 250,000 תאי סטרומה UGM לשתל בהשעיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גלולה תאים יחד ומחדש להשעות קולגן עכברוש זנב הסוג נוטרל 1 מספיק כדי להפוך את המספר רצוי של שתלים, כל אחד בנפח של 25 μl 50 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבע שתלי רקומביננטי על 37 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות ולאחר מכן לכסות עם מדיום גידול לאחסון על 37 מעלות צלזיוס עד 48 שעות לפני השתלה. </li></ol> 3. הכנת xenografts רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על אמצעי זהירות אוניברסלית לפתוגנים דם נישא במהלך רכש רקמות והליך כירורגי. לאחר אישור דירקטוריון הסקירה מוסדי והסכמה מדעת, להשיג רקמת ערמונית טרי מכריתה כירורגית. ללימודים של צמיחת BPH, ניתן לקצור רקמות מכריתה של הערמונית או נהלי כריתת ערמונית פשוטים. xenografts העיקרית של PrCa או פרוסט השפירניתן להשיג רקמה אכלה מדגימות כריתה רדיקאלית של ערמונית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות שנקטפו רקמה בתקשורת איזוטוני נאגרה תא או מלח רגיל על קרח. בהתאם לתנאי הרקמות ואחסון, דגימות ניתן לאחסן לתקופה של עד 24 שעות לפני הכנת שתלי רקמה. מנהג נפוץ הוא לחלק את הדגימה לשלושה חלקים, עם סעיף אחד קבוע בפורמלין ושגרתי מעובד להיסטולוגיה, חתיכה אחת הצמד קפוא לניתוח מולקולרי וחתיכה אחת נוספת מחולקת לxenografts רקמות (1-3 מ&quot;מ בגודל). </li></ol> 4. הכנת האש מלוטש זכוכית פיפטה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כפפות להגנה על העין לבישת, מעיל מעבדה ועמידות בחום, מקום קצה פיפטה פסטר זכוכית לתוך להבת מבער בונזן בזווית של כ 60 ° להתחיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על תנועה מתמדת, קלה לפיפטה כדי למנוע נקודות חמות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למשוך את הקצה דק ואש פולנית במטרה להיות סוף מעוגל מעט עם מעוגל, נסגר קצה. </li></ol&gt; 5. הכנת מכשירים וחדרי ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיטוי כל המכשירים. לפני הניתוח, לבדוק את כל המכשירים, מקפיד לשמור על שדה סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את אזור ניתוח סטרילי עם רפידות סופגים, היקף לנתיחה, חרטומו הרדמה, מכשירי ניתוח ומנורת חימום המכוונים לאזור העבודה. לעקר כלים בין עכברים, מעקר את חרוז prewarm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב ומכשירי הרדמה בדיקה; שוקל נבלות גז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במיקרוגל, רפידות שעוות חום לתקופה של עד 5 דקות (במרווחים של 1 דקות, לישת משטח השעווה כדי לשלב שעווה נמסה ולא נמסה) ב70-80% כוח, עד שכל השעווה נמסה באופן שווה. על ידי מגע, להבטיח הכרית אינה חמה ומקום גם מתחת לכלוב התאוששות מכרסמים הריק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציוד מגן אישי לדון ניתוחי מכרסמים, כוללים מסיכת מנתחים, כובע, כפפות וגלימה. </li></ol> 6. הליך כירורגי: כליות קפסולת Xenografting<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל ההליכים הכרוכים בחיות מחקר צריכים להתבצע באישור של ועדות טיפול בבעלי חיים מוסדיים ולשימוש. לפני האינדוקציה של הרדמה, להתבונן בעכבר כדי להבטיח את בריאותם ורווחתם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר לתוך תא לאינדוקציה של הרדמה isoflurane ב3-5%. כאשר בעלי החיים הפסיקו לזוז וקצב הנשימה ירד, להעביר לחרטומו במצב המועדים, ולשמור על הרדמה ב1-3%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במידת צורך, השתמש בקוצץ לגלח את החלק האחורי של העכבר. זה אינו נחוץ כאשר ניצול עכברי עירום athymic (נו / נו). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל לחץ חזק לחגורה של כף הרגל האחורית המורחבת להערכת הלימות של הרדמה. אם העכבר מגיב ללחץ, יש צורך בזמן רב יותר להרדמה תיכנס לתוקף. במידת צורך, להתאים את זרימת הרדמה מעט כדי להשיג הרדמה נאותה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר סמן העכבר הוא מורדם כראוי, לחטא את האתר כירורגית עם יוד כירורגית פתרון (פולידין) ואחריואלכוהול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דון כפפות וחלוק סטרילי; להחיל סדינים מעוקרים לאתר כירורגית. הרם את העור חזרה עם זוג המלקחיים שיניים, ותוך שימוש במספריים הגסים לעשות חתך קו האמצע 2-3 סנטימטר הגבי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מספריים קהים או בדיקה, להפריד את הדרמיס שבבסיס מקיר הגוף (בשני הצדדים של החתך להשתלה דו צדדית או בצד אחד להשתלה חד צדדית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למקם את העכבר למקומו לרוחב, ולזהות את המיקום של הכליות על ידי הצגת פרופיל הכליות דרך קיר השריר. הפעלת לחץ ידני עדין עם האגודל ואצבע מורה על הבטן יכולה לסייע בהמחשת אברים פנימיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת המספריים איריס בסדר, ולטפל כדי למנוע ספינות גדולות ועצבים בעמוד השדרה, לעשות חתך 1 סנטימטר בקיר המקביל לגוף את עמוד השדרה. להרחיב את החתך הזה ל1.5-2.0 סנטימטר (מעט יותר מאשר הציר של הכליה הארוכה) בעדינות על ידי פתיחת המספריים רחבים יותר לאחר ביצועם בחתך הראשוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Exteriorize הכליות על ידי הפעלת לחץ עדין מחוץ לחומת השרירים בכל צד של הכליה באמצעות האצבע ואגודל. טאק עור קצוות מתחת לכליות exteriorized, שינוח על קיר הגוף. בעוד הכליות exteriorized, לשמור על לחות של הקפסולה הכליות על ידי יישום תמיסת מלח סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות # 5 מלקחיים בסדר בעדינות להרים את הקפסולה הכליות מparenchyma של הכליה ועם אזמל דק, לעשות חתך מ&quot;מ 2 -4 בכמוסה. גודל החתך נקבע על ידי הגודל של השתל, אך צריך להיות ממוזער על מנת לשמור על השלמות של הקפסולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניפולציות זכוכית פיפטה פסטר שכבר נמשכה דק ואש מלוטשת עם סוף סגור מעוגל תחת הקפסולה משיקה למשטח של הכליה. בעדינות לפתוח כיס כמוסה קטן לשתלים, תוך שימוש בזהירות רבה שלא לפגוע בparenchyma הכליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קצה החתך של הקפסולה הכליות יוסר עם המלקחיים בסדר, ואני השתלs מוכנס לתוך הכיס מתחת לכמוסה באמצעות פיפטה הזכוכית מלוטשת האש. ניתן להציב כמה שתלי תחת הקפסולה הכליות ומחולקים באופן שווה על פני השטח בכליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם, במהלך ההשתלה, הקפסולה הופכת מיובשת, זה צריך להיות טבול ידי החלת תמיסת מלח סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר השתלה היא מוחלטת, בעדינות להרים את צדי קיר שרירים החתך להחליף את הכליה בחזרה לתוך חלל הגוף. שים לב שהתלים לא להחליק מתחת לקפסולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את קיר השרירים עם תפר אחד (4-0, FS-2 תפר vicryl). הליך כירורגים ניתן לחזור על הכליות נגדי על ידי למקם מחדש את העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר השתלה היא מוחלטת, העכבר עשוי לעבור השתלה תת עורית גלולה באותה הפרוצדורה כירורגית (ראה שלב פרוטוקול 7). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים שיניים, ליישר את קצות חתך בעור ולהחיל 2-3 קליפים פצע ניתוח כדי לסגור את החתך. לנהל שיכוך כאבים (אנו משתמשים 5-10 מ&quot;ג / קילוגרם carprofen באמצעות הזרקה תת עורית) ולמקם את העכבר במצב שכיבה לרוחב בכלוב ההתאוששות. להבטיח שמירה על טמפרטורת גוף בחום ממנורה או כרית חימום. שים לב להחלמה מלאה של העכבר, שאמורה להתרחש בפחות מ -15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים יש לשים לב לשעות 24 הבאות לסימנים של כאב שלאחר ניתוח, דימום ו / או סיבוכים אחרים. באופן קבוע לבדוק חתך ניתוחי לסימנים של זיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת קליפים פצע עם מכשיר הסרת סרטון פצע ניתוח 7-14 ימים לאחר הניתוח. </li></ol> 7. הליך כירורגי: תת עורי גלולה השרשה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 6.1-6.5 מהקפסולה כליות xenografting הליך כירורגי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרם את העור חזרה עם זוג המלקחיים עור, ושימוש במספריים הגסים לעשות חתך קו האמצע 1-2 סנטימטר הגבי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מספריים קהים או בדיקה, להפריד את הדרמיס שבבסיס מהגוף הקיר בכיוון גולגולתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מלקחיים עור,בעדינות להרים את ההיבט גולגולתי של החתך בעור, ומחזיק את כדור ההורמון בעדינות עם מלקחיים ישרים, משוננים, הכנס את גלולה ולשחרר בעורף, בכיס שיצרת עם החללית הבוטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 6.18-6.20 מהקפסולה כליות xenografting הליך כירורגי. אם ביצוע השתלת גלולה התת עורית בלבד, להשתמש 1 קליפ פצע ניתוח כדי לסגור את החתך הניתוחי. </li></ol>

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Facts Figures. 4, (2010).</li><li>McVary, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BPH:+epidemiology+and+comorbidities.">BPH: epidemiology and comorbidities.</a> Am. J. Manag. Care. 12, S122-S128 (2006).</li><li>Nicholson, T. M., Ricke, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgens+and+estrogens+in+benign+prostatic+hyperplasia:+past,+present+and+future.">Androgens and estrogens in benign prostatic hyperplasia: past, present and future.</a> Differentiation. 82, 184-199 (2011).</li><li>Ricke, W. A., Wang, Y., Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormones+and+carcinogenesis+of+the+prostate:+the+role+of+estrogens.">Steroid hormones and carcinogenesis of the prostate: the role of estrogens.</a> Differentiation. 75, 871-882 (2007).</li><li>Ricke, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormones+stimulate+human+prostate+cancer+progression+and+metastasis.">Steroid hormones stimulate human prostate cancer progression and metastasis.</a> Int. J. Cancer. 118, 2123-2131 (2006).</li><li>Belanger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+serum+concentrations+of+conjugated+and+unconjugated+steroids+in+40-+to+80-year-old+men.">Changes in serum concentrations of conjugated and unconjugated steroids in 40- to 80-year-old men.</a> J. Clin. Endocrinol. 79, 1086-1090 (1994).</li><li>Nicholson, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testosterone+and+17beta-estradiol+induce+glandular+prostatic+growth,+bladder+outlet+obstruction,+and+voiding+dysfunction+in+male+mice.">Testosterone and 17beta-estradiol induce glandular prostatic growth, bladder outlet obstruction, and voiding dysfunction in male mice.</a> Endocrinology. 153, 5556-5565 (2012).</li><li>Str&#246;m, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomy+and+17&#946;-estradiol+Replacement+in+Rats+and+Mice:+A+Visual+Demonstration.">Ovariectomy and 17&#946;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration.</a> J. Vis. Exp. (64), e4013 (2012).</li><li>Szot, G. L., Koudria, P., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+Pancreatic+Islets+Into+the+Kidney+Capsule+of+Diabetic+Mice.">Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice.</a> J. Vis. Exp. (9), e404 (2007).</li><li>Aamdal, S., Fodstad, O., Nesland, J. M., Pihl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+human+tumour+xenografts+transplanted+under+the+renal+capsule+of+immunocompetent+mice.">Characteristics of human tumour xenografts transplanted under the renal capsule of immunocompetent mice.</a> Brit. J. Cancer. 51, 347-356 (1985).</li><li>Cunha, G. R., Lung, B., Reese, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glandular+epithelial+induction+by+embryonic+mesenchyme+in+adult+bladder+epithelium+of+BALB/c+mice.">Glandular epithelial induction by embryonic mesenchyme in adult bladder epithelium of BALB/c mice.</a> Investigative urology. 17, 302-304 (1980).</li><li>Norman, J. T., Cunha, G. R., Sugimura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+induction+of+new+ductal+growth+in+adult+prostatic+epithelium+in+response+to+an+embryonic+prostatic+inductor.">The induction of new ductal growth in adult prostatic epithelium in response to an embryonic prostatic inductor.</a> The Prostate. 8, 209-220 (1986).</li><li>Hayward, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+adult+human+prostatic+epithelium+and+rat+urogenital+sinus+mesenchyme+in+a+tissue+recombination+model.">Interactions between adult human prostatic epithelium and rat urogenital sinus mesenchyme in a tissue recombination model.</a> Differentiation. 63, 131-140 (1998).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+prostatic+epithelial+model+of+hormonal+carcinogenesis.">A human prostatic epithelial model of hormonal carcinogenesis.</a> Cancer Res. 61, 6064-6072 (2001).</li><li>Ricke, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+hormone+action+in+prostatic+carcinogenesis:+stromal+androgen+receptors+mediate+prostate+cancer+progression,+malignant+transformation+and+metastasis.">Androgen hormone action in prostatic carcinogenesis: stromal androgen receptors mediate prostate cancer progression, malignant transformation and metastasis.</a> Carcinogenesis. 33, 1391-1398 (2012).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+efficient+xenograft+models+for+benign+and+malignant+human+prostate+tissue.">Development and characterization of efficient xenograft models for benign and malignant human prostate tissue.</a> The Prostate. 64, 149-159 (2005).</li><li>Goto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximal+prostatic+stem+cells+are+programmed+to+regenerate+a+proximal-distal+ductal+axis.">Proximal prostatic stem cells are programmed to regenerate a proximal-distal ductal axis.</a> Stem Cells. 24, 1859-1868 (2006).</li><li>Xin, L., Ide, H., Kim, Y., Dubey, P., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+regeneration+of+murine+prostate+from+dissociated+cell+populations+of+postnatal+epithelia+and+urogenital+sinus+mesenchyme.">In vivo regeneration of murine prostate from dissociated cell populations of postnatal epithelia and urogenital sinus mesenchyme.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 11896-11903 (2003).</li><li>Priolo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+genomic+characterization+of+mouse+xenografts+of+human+primary+prostate+tumors.">Establishment and genomic characterization of mouse xenografts of human primary prostate tumors.</a> Am. J. Pathol. 176, 1901-1913 (2010).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Mulder, G. B., Luo, Y., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+Rodent+Surgery+for+the+New+Surgeon.">Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), e2586 (2011).</li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

מאמר זה והפרוטוקול שתואר במסמך זה מתארים את הייצור של הורמון דחוס ו / או כדורי סמים, וההליך כירורגי להשתלת גלולה תת עורית של עכברים. בהתאם לשאלת המחקר יש לטפל, טכניקה זו יכולה להתבצע ביחידים, או בשילוב עם xenografting הקפסולה הכליות של שתלי תא ערמונית רקומביננטי או xenografts רקמת ערמונית, שהם טכניקות בשימוש נרחב במחקר ערמונית 17-19. יחדיו, טכניקות אלה מציעות גישה רבת עוצמה כדי לחקור את היווצרות סרטן והסדרה של גידול שפיר בערמונית האדם ועכבר הורמונלי. ייצור גלולה הוא פשוט לביצוע, לשחזור בקלות, ודורש ציוד מוגבל. זה יכול להיות מיושם על הכנות הורמון והתרופות שונות. זה קריטי כדי לבצע בטכניקה זו במנדף בטיחות כימית, וללבוש ציוד מגן אישי מתאים. עבור ניסויי הערכת סרטן ערמוניתnd אינדוקציה של חסימת מוצא שלפוחית ​​עכברית אנו משתמשים 25 T מ&quot;ג ו2.5 מ&quot;ג E 2 5,7,15. מינונים אלה נבחרו משום שהם מייצרים רצויים בתגובה vivo ובגלל שהם יוצרים את רמות הורמון בסרום שרלוונטיות מבחינה פיזיולוגית לזכרים אנושיים עם תהליך המחלה של עניין 6. תבניות גלולה מאפשרות גדלים שונים של כדורים שיוצרו, אנחנו משתמשים בדרך כלל 25 כדורי מ&quot;ג להערכת סרטן וגידול שפיר. בחירה של הגודל גלולה תלויה בהשערה לטפל, כמו גם את הייצור של אפקט הרצוי, הייצור של רמות במחזור רצויה ואת משך הזמן של הניסוי. אם בתרופות או הורמונים בשילוב עם סוכן מחייב (כמו כולסטרול) אנו ממליצים תערובת הומוגנית של הורמון וסוכן מחייב. בהתאם למחקר, השתלה תת עורית גלולה ניתן לבצע סירוס של מארח זכר 15 הבא. מניסיוננו,השתלה של 25 מ&quot;ג של T גורמת עיכוב משוב של ציר ההיפותלמוס, יותרת המוח, אשכים, עיכוב הפרשת אנדוגני. לכן אנו בוחרים להשוות את העכברים שטופלו 25 T מ&quot;ג כדי לדמות את הסביבה אנדרוגנית של הזכר האנושי לזכרים ללא פגע, אך לא טופלו, עם הפרשת T אנדוגני נשמרה. אנחנו לא באופן שיגרתי לנצל מארח לסרס בשל תגובת המכולה של xenografts הערמונית וסרטן הערמונית לנסיגת אנדרוגן. פרוטוקול זה מתאר גם את הקמתה של פיסת ציוד מיוחד עבור xenografting הקפסולה כליות, זכוכית פיפטה פסטר האש מלוטשת. זה יכול להתבצע בקלות עם ציוד קיים ברוב המעבדות, וכתוצאה מכך מכשיר לניתוח מותאם אישית יותר יכול להיות מיוצר ומעוקר לפני השימוש בהליך כירורגי. לבישת ציוד מגן אישי היא חשובה כדי להבטיח את בטיחות צוות בעת יצירת פיפטה הזכוכית מלוטשת האש. לפני embarking על כל אחד מהניתוחים המפורטים בפרוטוקול זה, כל הטכניקות חייבת להיות נבדקו ואושרו על ידי ועדת טיפול בבעלי החיים ושימוש המוסדית. ניתוחים שבוצעו במכרסמים דורשים אימון ותרגול בשני ההיבטים הטכניים של ההליך, כמו גם את העקרונות ותרגול של טכניקת aseptic. לקבלת מבוא לציוד והטכניקות החשוב בהליכים אלה אנו ממליצים צוות להציג את כתב יד הווידאו דיווח לאחרונה על ידי Prichett-Corning et al. (2011) 20. כמו כן אנו ממליצים לכל צוות מקבל הדרכה מעשית בפרוצדורות כירורגיות מכרסמים וטכניקת aseptic. במעבדה שלנו, נהלים אלה מבוצעים בדרך כלל עם שני אנשי צוות. העוזר כירורגית מנהל הרדמה, מציין בעלי חיים במהלך התאוששות, מסייע למנתח בהיבטים שאינם סטרילי של ההליך ומתעד את כל ההליכים. המנתח שומר על שדה סטרילי, מנהל שיכוך כאביםnd מבצע את הניתוחים המפורטים בפרוטוקול זה. עם תכנון והכשרה מתאימים, ההליך הכירורגי של השתלת גלולה הורמון תת עורי הוא פשוט וקל לביצוע. ישנם מספר שיקולי עיצוב ניסיוני לxenografting רקומביננטי תא. כמו בכל ניסויי ניצול שורות תאים הונצחו, זיהום הוא חשוב כדי למזער ולזהות. לניסויים באמצעות שורות תאים BPH-1, אנו ממליצים על מספר נמוך מעבר (פחות מ 25). כדי לשלוט על השפעות של stroma, אנו מנצלים בשתלים המכילים תאי BPH-1 רק כליה אחת ושתלים המכילים BPH-1 וUGM בכליה הנגדית. בניסויים שנועדו לתת מענה סרטן הורמונליים, בדרך כלל יש לנו מצב ביקורת שלא טופל (עכבר לא מושתל עם גלולה, או שהוא מושתל עם גלולה כולסטרול). בקרות חיוביות (עכבר מארח הוא מושתל עם T + E 2 כדורים) חשובות באותה מידה בעת הערכת tha תנאים אחרלא עשוי לקדם היווצרות סרטן עם מערכת מודל זה. בהתאם לשאלת המחקר יש לטפל, משך ההשתלה גלולה ו / או צמיחת xenograft עשוי לנוע בין מספר שבועות לארבעה חודשים; לניסויים המתוכננים יעלה על ארבעה חודשים, אנו ממליצים השתלת גלולה נוספת כדי לשמור על רמות הורמונים אקסוגניים. לניסויים מעורבים xenografts רקמת ערמונית שפירה, חשוב ללבוש ציוד מגן אישי מתאים ולשמור על אמצעי זהירות אוניברסלית לפתוגנים דם נישא. רקמה שנקטפו זה עתה יכול להיות מאוחסן לפני xenografting ל12-72 שעה. הטכניקה כירורגית לxenografting הקפסולה הכליות דורשת תכנון, אימון וכמה מיומנות ידנית. צמצום משך הזמן של ההליך כירורגי, שמירה על טמפרטורת גוף וטכניקה ניתוחית זהירה יכול להקטין תמותה סביב ניתוח וסיבוכים כירורגיים. הסיכוי למוות סביב ניתוח בניסיון שלנו עולה עם משך suהליך rgical; מסיבה זו אנו מגבילים את ההליך כירורגי כדי לא יותר מ 20-25 דק &#39;. שימוש במנורת חימום ומשטח שעווה התחמם במהלך ניתוח וההחלמה הוא אידיאלית לשמירה על טמפרטורת גוף. טיפול שלאחר ניתוח שיגרתי הוא היבט חשוב נוסף להצלחתה של טכניקה זו. עכברים צריכים להיות שנצפו במהלך התאוששות הרדמה, והיום לאחר ניתוח לסימנים של כאב ומצוקה. לנהל שיכוך כאבים מתאימים כדי למזער את הכאב ומצוקה שלאחר פרוצדורליים.

סרטן הערמונית (PrCa) והיפרפלזיה שפירה של הערמונית (BPH) הן מעמסה בריאותית משמעותית. PrCa הוא הסרטן השני הנפוץ ביותר מוצק האיבר אצל גברים וגורם מוביל לסרטן הקשורים למוות 1. BPH הוא גם נפוץ מאוד בקרב גברים מבוגרים, והערכה הוא כי הביטוי הקליני של BPH, תסמינים בדרכי שתן תחתון (LUTS), ישפיע 50-90% מהגברים 2. בעוד אנדרוגנים ואסטרוגנים ידועים להיות חשוב בPrCa וBPH, ההבנה של מנגנונים הורמונליים העומדים בבסיס היווצרות סרטן וצמיחה שלנו נשארה שלמה 3,4. מודלים של בעלי חיים פשוטים וגנטי צייתנים לחזק את המחקרים שיעסקו בסדרי עדיפויות אלה במחקר ערמונית. במחלות הורמון מגיבות כמו PrCa וBPH, השימוש בתת עור, כדורי הורמון שחרור איטיים, בבידוד או בשילוב עם xenografting הקפסולה הכליות (ההעברה של תאים, רקמות או איברים ממין אחד למשנו) לimmunocompמארח עכבר romised, מספק שיטה פשוטה לשחזור ללימוד רגולציה הורמונלית של צמיחה והיווצרות סרטן. השתלת גלולה הורמון תת עורי היא טכניקה פשוטה ולשעתק ללמוד ויסות הורמונלי של סרטן וגידול שפיר בערמונית 5. השתלה תת עורית של עכברי זכרים מבוגרים עם 25 טסטוסטרון מ&quot;ג (T) ו17β-אסטרדיול 2.5 מ&quot;ג (ה 2), גורמת לעלייה בסרום E 2 וירידה הדרגתית בT, יצירה מחדש של הסביבה ההורמונלית הדינמית של גברים מזדקנים 5,6. בנוסף, מודל זה משחזר רבים של המאפיינים הקליניים של 5,7 BPH-LUTS. שיטות חלופיות של ממשל הורמון כוללות אוראלי / gavage או זריקת intraperitoneal, אשר גורם למצוקה למכרסמים, הם פחות עקביים באספקת אותה הכמות של תרופה לאורך זמן, ויותר עתיר עבודה מאשר השתלה כירורגית חד פעמית. מצבים תת עורית אחרים לשעותormone ו / או אספקת סמים כוללות כמוסות Silastic 8. אמנם יש לנו גם ניסיון עם שימוש בכמוסות Silastic, כדורים דחוסים הם העדיפו עבור קלות שימוש שלהם ושחזור. יתר על כן, שיעורי שחרורו של כדורי הורמון דחוסים יותר טובים לחקות את היחסים הדינמיים מין סטרואידי ההורמון נצפו בגברים מזדקנים 5,7. מאז הפיתוח של עכברים גנטי חיסון, in vivo מערכות מודל רבים המשלבות טכניקות xenografting פותחו עבור המחקר של מגוון רחב של רקמות בריאות וחולות. ישנן מספר קטגוריות בסיסיות של xenografting. xenografts הרקמה מורכבת של פיסה קטנה של רקמה שלמה, אשר יכול להיות מבנה נורמלי, גידול ממאיר, או גידול שפיר. Szot et al. (2007) לאחרונה מואר xenografting הקפסולה כליות של איי לבלב 9. Aamdal et al. (1985) תאר xenografting הקפסולה כליות של 27 שורות תאי סרטן אנושיים בimעכבר munocompromised מארח 10. יכולים גם להיות מורכבים תלים של שורה אחת הנציחה תא (סרטנית או שאינה סרטנית), או יכולים להיות מורכב משורת תאים הונצחו בשילוב עם תאים מבודדים מmesenchyme (שתל רקומביננטי תא). אנו דוגלים xenografting של recombinants תא כדי לבחון את תפקידיהם של stroma והאפיתל בפיתוח PrCa וBPH. Cunha et al. (1980) היה הראשון לדווח כי כאשר אפיתל שלפוחית ​​העכברי מבוגר בשילוב עם mesenchyme עוברי ואברי המין סינוס (UGM) וxenografted תחת הקפסולה הכליות של מארחים עכברי זכרים, הרקמה מתפתחת למבנים הדומים acini ערמונית 11. נורמן et al. (1986) הראה כי אפיתל עכבר הבוגר של הערמונית ductal וUGM, כאשר הוא משולב בrecombinants רקמות, עוברים צמיחת ductal והסתעפות המורפוגנזה 12. הייוורד et al. (1988) הראה כי אפיתל ערמונית אדם מגיב לאינדוקטיביים מ &#39;עובריesenchyme באופן דומה 13. מודל ההורמונלית של הסרטן בערמונית, על ידי שילוב של שורת תאי אפיתל הונצח ערמונית אדם BPH-1 עם UGM, דווח לראשונה על ידי וואנג et al. 14 (2001) ונעשה שימוש נרחב במעבדה שלנו 15. מודל זה גם מתאים להבנת התקדמות PrCa כי אפיתל השפיר של הערמונית הופך למחלה גרורתית, דוגמנות PrCa המתקדמת בבני האדם 5. מכיוון שניתן להשפיע על רכיבים ספציפיים גנטי, השתלת רקומביננטי תא שימושית במיוחד כגישה להעריך אינטראקציות סטרומה-אפיתל. אתרים אחרים המתאימים לxenografting הם intradermal, תת עורית ובמקומות orthotopic 16. בהתאם לתהליך הרקמות ומחלות של עניין, אלה עשויים להיות גישות חלופיות מתאימות. לצורך המחקר של סרטן ערמונית הורמונליים ורגולציה גידול שפירה, אנו בוחרים את הקפסולה הכליותאתר לxenografting בשל השתל גבוה יותר שלה לקחת שיעור, אספקת דם בשפע, ויכולת להשתיל מספר רב יותר של xenografts לאתר מוגבל אחד 16. יתר על כן, מניפולציה הורמונלית של עכבר המארח כי תוצאות בניוון של הערמונית מגבילה את השימוש בהשתלת orthotopic ערמונית 16. פרוטוקול זה מתאר טכניקות של ייצור הורמון דחוס / סמים גלולה והשתלה כירורגית, כמו גם xenografting הקפסולה כליות של שתלי תא ערמונית אנושי ורקמות. יחד, טכניקות אלה מספקים assay רגיש כדי לקבוע אם עכבר מהונדס גנטי הוא רגיש יותר לPrCa ו / או ייזום BPH מאשר זני שליטה. Xenografting הוא טכניקה רבת עוצמה עבור in vivo הערכה של הפוטנציאל של תאים ניסיוניים כדי לפתח היסטולוגית ותכונות מולקולריות של ממאירות, כמו גם assay לאסטרטגיות טיפול חדשניים במגוון רחב של מחלות שפירים וממאירים.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EQUIPMENT &amp; MATERIALS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pellet press</td>
			<td>PARR Industries </td>
			<td>2815</td>
			<td>3mm Punch &amp; Die set</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Analytical Balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>1918302</td>
			<td>Voyager or other</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Bunsen burner</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-962Q</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>L2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Deltaphase Pad Kit (reheatable wax)</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>39DP</td>
			<td>Alternative to an electric heating pad</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Hot Bead sterilizer</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>18000-45</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Isoflurane Vaporizer</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>VAP3000</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Induction Chamber</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>RES644</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>F/AIR Canister</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>80120</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>4 port Manifold</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>RES536</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Rebreathing Circuits</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>CIR529</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Inlet/Outlet Fittings</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>VAP203/4</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pressure Reg/Gauge</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>OXY508</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Oxygen Flowmeter</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>OXY660</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>21mm Clear Tubing</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>301-150</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Small Mice Nose Cone</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>ACC526</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile surgical gown</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>350.79866.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Surgical mask</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>350.50111.2</td>
			<td>2-ply w/ earloops</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile gauze</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.14100.2</td>
			<td>2 x 2 inches</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile Gloves</td>
			<td>Kimberly Clark</td>
			<td>55092</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Bouffant</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.27100.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cotton Tip Applicator</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.06220.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Surgical Scrub Wash</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>733.80010.3</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile Fields (Fenestrated)</td>
			<td>General Econopak, Inc</td>
			<td>88VCSTF</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>REAGENTS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C-3292</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Testosterone Proprionate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T-1875</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>17&beta;-estradiol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E-2758</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.33161.3</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.70200.3</td>
			<td>Injectable (Rimadyl)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Webster Veterinary</td>
			<td>07-836-3379</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.74504.3</td>
			<td>NaCl 0.9%, Injectable</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>SURGICAL INSTRUMENTS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Straight Sharp/Blunt Scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tools (F.S.T.)</td>
			<td>14054-13</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Toothed, Curved)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11055-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fine Iris scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14090-09</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe Scalpel</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>10071-12</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dumont #5 forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glass Pasteur pipets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S67050</td>
			<td>5" length</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Curved)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Straight)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11050-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Vicryl Suture</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>295-92100.2</td>
			<td>4-0, FS-2, Absorbable</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Needle Holder w/ scissor action</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12002012</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Wound Clips</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>ACS CS</td>
			<td>May use 7mm or 9mm clips</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Reflex Wound Clipper</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12031-09</td>
			<td>Correspond w/ wound clip size</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Would Clip Remover</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12033-00</td>
			<td>Universal</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterilization Container</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>20810-01</td>
			<td>Any autoclavable container will do</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Syringe w/ needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>148292C</td>
			<td>1cc, 25Gx1</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ear Tag Applicator</td>
			<td>National Band &amp; Tag Co.</td>
			<td>1005s1</td>
			<td>Alternative to ear notching</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Small Animal Ear Tags</td>
			<td>National Band &amp; Tag Co.</td>
			<td>1005-1</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

renal capsule xenografting and subcutaneous pellet implantation for the evaluation of prostate carcinogenesis and benign prostatic hyperplasia

טיפולים חדשים עבור שתי מחלות נפוצות בבלוטת ערמונית, סרטן הערמונית (PrCa) והיפרפלזיה שפירה של הערמונית (BPH), תלויים באופן קריטי על ניסויי הערכת הוויסות הורמונלי שלהם. הורמוני סטרואידי מין (בעיקר אנדרוגנים ואסטרוגנים) הם חשובים בPrCa וBPH; לחקור התפקידים שלהם בזירוז צמיחת ערמונית וסרטן בעכברים עם ניסויים באמצעות כדורי הורמון דחוסים. כדורי הורמון ו / או תרופה מיוצרים בקלות עם עיתונות גלולה, וניתוח מושתלים לתוך הרקמה תת עורית של מארח עכבר הזכר. גם אנו מתארים פרוטוקול להערכת הסרטן הורמונלי על ידי שילוב של השתלת גלולה הורמון תת עורית עם xenografting של recombinants תא ערמונית תחת הקפסולה הכליות של עכברי מדוכאי חיסון. יתר על כן, השתלת גלולה הורמון תת עורי, בשילוב עם xenografting הקפסולה הכליות של רקמת BPH, כדאי להבין ויסות הורמונלי של פרוסט השפיר טוב יותראכלתי צמיחה, וכדי לבחון טיפולים חדשים מיקוד מסלולי הורמון מין סטרואידים.

<html> בהתאם להשערה להיבדק, xenografting הקפסולה הכליות של recombinants רקמה או תא יכול להתבצע בבידוד, או בשילוב עם השתלת גלולה הורמון תת עורית. סכמטי של ניסוי היפותטי שילוב ניסוי xenografting הקפסולה כליות עם השתלת גלולה הורמון תת עורית מודגמת באיור 1. מגוון רחב של חומרי אבקה ו / או גבישים יכול לשמש בייצור של כדוריות דחוסות עם עיתונות גלולה. איור 2 מראה 25 מ&quot;ג, מ&quot;ג 12 ו6 מ&quot;ג דחוס כדורי הורמונים. איור 3 מראה דוגמא של פיפטה זכוכית האש מלוטשת המשמשת במהלך ההליך הכירורגי. עובר מרובה של זכוכית פיפטה פסטר באמצעות להבת מבער בונזן לגרום לקצה אש מלוטשת, מעוגל המשמש ליצירת כיס עבור שתלים תחת הקפסולה הכליות ולתפעל את השתלים מתחת להקפסולה הכליות. <html> ntent &quot;&gt; כפי שניתן לראות בתרשים 4, xenografts העיקרית רקמה מחולים עם BPH, בתוספת טסטוסטרון אקסוגני (גלולה תת עורית 25 מ&quot;ג) כדי לדמות את הסביבה ההורמונלית האנושית הגברית, לשרוד וארכיטקטורת הרקמה נשמרה (איור 4 א). כמו כן מוצג ב איור 4, השתלת הקפסולה כליות יכול לשמש כדי להעריך את היווצרות הסרטן הורמונלי. Recombinants תא המכיל אפיתל שפירים ערמונית (BPH-1) וmesenchyme אינדוקטיביים ואברי המין (UGM) גדל בעכברים שלא טופלו בצורת גידולים שפירים (איור 4). אותו השתל, גדל ב מארח שקיבל כדורים תת עורית של הורמון 25 T מ&quot;ג ו2.5 מ&quot;ג E 2 במשך ארבעה חודשים, מתפתח לסרטן הערמונית שפולש הקפסולה הכליות (איור 4C) 5,14. upload/50574/50574fig1.jpg &quot;/&gt; איור 1. סכמטי של xenografting הקפסולה כליות והליך השתלת גלולה. Xenografting הקפסולה כליות מתבצע באמצעות גישת קו האמצע גב. במהלך אותה הפרוצדורה כירורגית, העכבר מושתל בניתוח עם הורמון איטי שחרור תת עורית דחוס ו / או כדורי תרופה בצוואר עורף האזור. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/50574/50574fig2.jpg" /> איור 2. דוגמאות של כדורי הורמון דחוסים מיוצרים עם הפרוטוקול הנוכחי. גלולה מ&quot;ג א 12. ב גלולה 6 מ&quot;ג. ג 25 גלולה מ&quot;ג. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/50574/50574fig3.jpg" /> איור 3. זכוכית פיפטה פסטר אש מלוטשת. פיפטה המוגמרת היא מעוגלת, עם קצה מעוגל חלק מתאים ליצירת נקבet לxenograft תחת הקפסולה הכליות. פיפטה משמשת גם כדי לתפעל את השתל מתחת להקפסולה הכליות. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/50574/50574fig4.jpg" /> איור 4. דוגמא לxenografts הקפסולה כליות. Xenografts א רקמות (ראשי חץ) של רקמת BPH אדם גדלים במשך חודש אחד תחת הקפסולה הכליות של עכבר עירום גברי. מארח העכבר בתוספת 25 גלולה טסטוסטרון מ&quot;ג כדי לדמות את הסביבה ההורמונלית של הזכר האנושי. Xenografts B. תא רקומביננטי (ראשי חץ) המכילה קו אנושי של הערמונית אפיתל תאים (BPH-1) וmesenchyme אינדוקטיביים ואברי המין (UGM) גדל בכליות כמוסה של עכבר בעירום שלא מושתל עם גלולה הורמון תת עורי במשך ארבעה חודשים. xenograft רקומביננטי הנייד ג מכילה BPH-1 וUGM, גדל תחת הקפסולה הכליות של עכבר בעירום שעבר גם תתהשתלת גלולה עורית של טסטוסטרון 25 מ&quot;ג ו2.5 מ&quot;ג 17β-אסטרדיול במשך ארבעה חודשים.

Watch this Scientific Journal Video about Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia at JoVE.com

Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

אנו מתארים את הייצור של הורמון כדורים דחוסים, כמו גם השתלה כירורגית תת עורית לעכברים. אסטרטגיה זו יכולה להיות משולבת עם הצמיחה של xenografts תא והרקמה תחת הקפסולה הכליות של עכברים בעירום athymic להעריך היווצרות סרטן ורגולציה של צמיחת ערמונית שפירה הורמונלי.

כליות קפסולת Xenografting ותת עור מכבישי השרשה להערכת הערמונית Carcinogenesis והיפרפלזיה שפירה של הערמונית

New therapies for two common prostate diseases,  prostate cancer (PrCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH), depend  critically on experiments ...

renal-capsule-xenografting-subcutaneous-pellet-implantation-for

Google

Research

JoVE Journal

Medicine

24.9K Views.  University of Wisconsin-Madison.  אנו מתארים את הייצור של הורמון כדורים דחוסים, כמו גם השתלה כירורגית תת עורית לעכברים. אסטרטגיה זו יכולה להיות משולבת עם הצמיחה של xenografts תא והרקמה תחת הקפסולה הכליות של עכברים בעירום athymic להעריך היווצרות סרטן ורגולציה של צמיחת ערמונית שפירה...

Video: Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

הערכה של ספיגת nanoparticle ב גידולים בזמן אמת באמצעות הדמיה Intravital

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Cell Population Analyses During Skin Carcinogenesis

Cancer development is a multiple-step process involving many cell types including cancer precursor cells, immune cells, fibroblasts and endothelial cells. Each type of cells undergoes signaling and functional changes during carcinogenesis. The current challenge for many cancer researchers is to dissect these changes in each cell type during the multiple-step process in vivo. In the last few years, the authors have developed a set of procedures to isolate different cell populations during skin cancer development using K14creER/R26-SmoM2YFP mice. The procedure is divided into 6 parts: 1) generating appropriate mice for the study (K14creER+ and R26-SmoM2YFP+ mice in this protocol); 2) inducing SmoM2YFP expression in mouse skin; 3) preparing mouse skin biopsies; 4) isolating epidermis from skin; 5) preparing single cells from epidermis; 6) labeling single cell populations for flow cytometry analysis. Generation of sufficient number of mice with the right genotype is the limiting step in this protocol, which may take up to two months. The rest of steps take a few hours to a few days. Within this protocol, we also include a section for troubleshooting. Although we focus on skin cancer, this protocol may be modified to apply for other animal models of human diseases.

Carcinogenesis is a process involving interactions between cancer cells and the cancer microenvironment. To dissect the molecular events, one needs to isolate different cell populations at different stages during cancer development. Using a mouse model for basal cell carcinoma, we describe a protocol for cell analyses during carcinogenesis.

ניתוח אוכלוסיית תאים בעור Carcinogenesis

Cancer development is  a multiple-step process involving many cell types including cancer precursor  cells, immune cells, fibroblasts and endothelial ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or subvert anti-tumor immune responses in order to survive and flourish. Tumors take advantage of a number of different mechanisms of immune &#8220;escape,&#8221; including the recruitment of tolerogenic DC, immunosuppressive regulatory T cells (Tregs), and myeloid-derived suppressor cells (MDSC) that inhibit cytotoxic anti-tumor responses. Conversely, anti-tumor effector immune cells can slow the growth and expansion of malignancies: immunostimulatory dendritic cells, natural killer cells which harbor innate anti-tumor immunity, and cytotoxic T cells all can participate in tumor suppression. The balance between pro- and anti-tumor leukocytes ultimately determines the behavior and fate of transformed cells; a multitude of human clinical studies have borne this out. Thus, detailed analysis of leukocyte subsets within the tumor microenvironment has become increasingly important. Here, we describe a method for analyzing infiltrating leukocyte subsets present in the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Mouse B16 melanoma tumor cells were inoculated subcutaneously in C57BL/6 mice. At a specified time, tumors and surrounding skin were resected en bloc and processed into single cell suspensions, which were then stained for multi-color flow cytometry. Using a variety of leukocyte subset markers, we were able to compare the relative percentages of infiltrating leukocyte subsets between control and chemerin-expressing tumors. Investigators may use such a tool to study the immune presence in the tumor microenvironment and when combined with traditional caliper size measurements of tumor growth, will potentially allow them to elucidate the impact of changes in immune composition on tumor growth. Such a technique can be applied to any tumor model in which the tumor and its microenvironment can be resected and processed.

This protocol describes a method for the detailed evaluation of leukocyte subsets within the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Chemerin-expressing B16 melanoma cells were implanted subcutaneously into syngeneic mice. Cells from the tumor microenvironment were then stained and analyzed by flow cytometry, allowing for detailed leukocyte subset analyses.

הערכה של תת-יקוציט חדירת גידול בדגם גידול תת עורי

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine balloon denudation model, which is comparable with established vessel injury models in large animals. The aorta denudation model with balloon catheters mimics the clinical setting and leads to comparable pathobiological and physiological changes. Briefly, after performing a horizontal incision in the aorta abdominalis, a balloon catheter will be inserted into the vessel, inflated, and introduced retrogradely. Inflation of the balloon will lead to intima injury and overdistension of the vessel. After removing the catheter, the aortic incision will be closed with single stiches. The model shown in this article is reproducible, easy to perform, and can be established quickly and reliably. It is especially suitable for evaluating expensive experimental therapeutic agents, which can be applied in an economical fashion. By using different knockout-mouse strains, the impact of different genes on MH development can be assessed.

This article demonstrates a murine model to study the development of myointimal hyperplasia (MH) after aortic balloon injury.

מבוסס על בלון פציעה לזירוז היפרפלזיה Myointimal באבי העורקים בטן העכבר

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the quality of life. BPH includes 2 major treatments: medication and surgery. Surgical treatment is often the most effective and final intervention. Holmium laser enucleation of the prostate (HoLEP), one of the most efficient surgical procedures for BPH, is conducted transurethrally. During surgery, the most important and most difficult part is to locate the surgical capsule of the prostate, which is consistent to the idea of anatomic surgery. Different skills may be needed in treating different parts of the prostate. HoLEP tends to be efficient and safe with good hemostatic properties, and able to treat bladder calculus, which may be the complications of BPH. The technique is particularly suitable for prostate of varying volumes and sizes. Indeed, HoLEP also presents certain disadvantages, such as a long learning curve and costly equipment. Regardless, this method may be the "new standard" and the excellent method for the surgical treatment of BPH.

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate HoLEP.

Here we present a safe and efficient protocol, holmium laser enucleation of the prostate, to treat benign prostatic hyperplasia.

טיפול כירורגי עבור הגדלה שפירה: לייזר הולמיום העקירה של הערמונית (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the ...

Enucleation of the Prostate for the Treatment of Benign Prostatic Hyperplasia Using a 980 nm Diode Laser

In the aging male population, the occurrence of lower urinary tract symptoms (LUTS) caused by benign prostatic hyperplasia (BPH) is a common problem. Here, we introduce a new technique called 980 nm diode laser enucleation (DiLEP) to treat BPH1. Diode lasers can absorb both water and hemoglobin at the same time, so they are good for cutting and hemostasis2. The diode laser was approved by the FDA in 2007, and has been used in the treatment of BPH because of its effective cutting and hemostasis effect3. DiLEP presents several advantages over other techniques, such as TURP, HoLEP, and PVP. During the procedure, we define the boundary of a high-volume prostate and separate it into three lobes with a diode laser by burning two rings and one groove (like a Cupid&#39;s arrow). Compared to other procedures, mDiLEP has fewer intraoperative complications, a shorter learning curve, and achieves more tissue resection.

Here, we present a protocol for modified 980 nm diode laser enucleation to treat large volume benign prostatic hyperplasia.

חינוך הערמונית לטיפול בהגדלה שפירה של הערמונית באמצעות לייזר דיודה 980 ננומטר

In the aging male population, the occurrence of lower urinary tract symptoms (LUTS) caused by benign prostatic hyperplasia (BPH) is a common problem. ...

Direct Drug Delivery to Kidney via the Renal Artery

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research field. Accumulation of drugs in certain organs may give rise to adverse and unwanted effects, depending on the nature of injectate. To minimize spillover and/or accumulation in other tissues, the herein described method directs the formulation into the renal artery bloodstream by inserting a catheter in the infra renal aorta, just below where it branches into the renal artery, resulting in the kidney as first reached organ and distributing of formulation throughout the kidney.
This manuscript provides a detailed description of the method, as well as its challenges and difficulties. It guides the experimenter to become skillful with this type of microsurgery that requires accuracy under sterile conditions. Speed is crucial for minimizing the ischemia and practicing the procedure will increase the chance of successful injections without adverse effects. By modulating the time between injection and reperfusion as well as the injected volume, the risk of spillover to other organs is mitigated. 
Note that this technique is suitable for single dosing strategies.

This manuscript describes a method for targeted delivery to a single kidney via a catheter placed in the infrarenal abdominal aorta in the mouse.

משלוח תרופות ישיר לכליות דרך עורק הכליה

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to detect drug exposure. The rat blood sampling method determines the quality of the plasma and further affects the precision of the test results. The subclavian vein blood collection method described in this protocol collects blood samples repeatedly in the conscious state of animals to meet the needs of PK and TK tests. The skills of restraint handling and appropriate procedure of needle incision ensure the success rate of blood collection. It is easy to operate while ensuring the quality of plasma and at the same time catering to animal welfare. However, this method requires skilled operation, and an improper one may cause animal weakness, pain, lameness, and even mortality. The current method has been used in the testing facility for a 4-week oral toxicity study in Sprague Dawley (SD) rats with TK. The maximum amount of blood collected within 24 h did not exceed 20% of the animal's total blood. The animals' body weight was more than 200 g for males and females. The data showed that the animals' bodyweight increased steadily every week, and the clinical observation was normal after repetitive sample collection.

The present protocol describes a simple and efficient method for collecting blood from the subclavian vein in rats. It enables rapid, timely, and easily identifiable sampling without anesthesia and obtains high-quality blood through repetitive sample collection.

דגימת דם חוזרת מהווריד הסובקלבי של חולדה מודעת

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...

A Retrograde Implantation Approach for Peritoneal Dialysis Catheter Placement in Mice

Murine models are employed to probe various aspects of peritoneal dialysis (PD), such as peritoneal inflammation and fibrosis. These events drive peritoneal membrane failure in humans, which remains an area of intense investigation due to its profound clinical implications in managing patients with end-stage kidney disease (ESKD). Despite the clinical importance of PD and its related complications, current experimental murine models suffer from key technical challenges that compromise the models&#39; performance. These include PD catheter migration and kinking and usually warrant earlier catheter removal. These limitations also drive the need for a greater number of animals to complete a study. Addressing these drawbacks, this study introduces technical improvements and surgical nuances to prevent commonly observed PD catheter complications in a murine model. Moreover, this modified model is validated by inducing peritoneal inflammation and fibrosis using lipopolysaccharide injections. In essence, this paper describes an improved method to create an experimental model of PD.

This article describes modifications of a procedure to implant a peritoneal dialysis catheter in a murine model to avoid major technical issues observed with the conventional techniques.

גישת השתלה מדרדרית למיקום צנתר דיאליזה פריטוניאלית בעכברים

Murine models are employed to probe various aspects of peritoneal dialysis (PD), such as peritoneal inflammation and fibrosis. These events drive ...

Systematic Hearing Performance Evaluation Process for Adolescents with Cochlear Implantation at Early Ages

Cochlear implant (CI) provision is the most effective clinical treatment to restore hearing performance in individuals with profound sensorineural hearing loss (SNHL). It has been successful in providing improved speech perception outcomes, especially in quiet environments. However, speech perception performance within complex environments, lexical tone recognition, and music perception have been shown to only improve with newer fine structure coding strategies or related techniques. Therefore, the methods used to assess hearing performance in noisy environments, lexical tone recognition, and music perception are of vital importance. These assessments must reflect the postoperative outcomes and also provide guidance for the programming, rehabilitation, and application of new coding strategies. In this study, hearing performance in simple and complex situations was evaluated before and after upgrading to a fine structure strategy. The participants were a cohort of Mandarin-speaking adolescents, who were experienced CI users. The comprehensive clinical workflow involved assessments of speech in quiet conditions, speech in noisy conditions, lexical tone recognition, and music perception. This battery of tests is explained in detail, from the coding strategy to the test methods, including the test process, environment, device, material, and order. The details that require special attention are discussed, such as the position of the participants, the angle of the loudspeaker, the intensity of the sound, the noise type, the practice test, and the way of answering questions. Each test step, method, and material for speech, lexical tone, and music perception is presented in detail. Finally, the clinical results are discussed.

This paper describes a battery of tests used to clinically assess the hearing performance of adolescent, Mandarin-speaking, experienced cochlear implant users upgraded to a new fine structure coding strategy. The battery of tests include speech in quiet conditions, speech in noisy conditions, lexical tone, and music perception.

תהליך הערכה שיטתי של ביצועי שמיעה בקרב מתבגרים עם השתלת שבלול בגילאים מוקדמים

Cochlear implant (CI) provision is the most effective clinical treatment to restore hearing performance in individuals with profound sensorineural hearing ...