وأيد هذا العمل من قبل دراسية من جامعة ادنبره (NSK) وجامعة كارنيجي الثقة (LL؛ هنري مخطط Dryerre) وبتمويل من مؤسسة القلب البريطانية (PWFH، BRW، DJW؛ RG / 05/008؛ PG / 05/007. PG / 08/068/25461) ويلكوم ترست (JRS، BRW، DJW؛ 08314 / Z / 07 / Z). المؤلفون ممتنون لدعم لعملهم التي يقدمها المركز بتمويل فتقول لجائزة التميز البحثي لمركز القلب والأوعية الدموية العلوم. المؤلفون ممتنون بشكل خاص للحصول على المشورة من أستاذ ماساتاكا ساتا (جامعة توكوشيما) والدكتور ايغور Chersehnev (في مجموعة الدكتور Ernane ريس &#39;في مدرسة جبل سيناء للطب) على إنشاء نماذج الجراحية الإنتاج neointimal الآفة. إنتاج الفيديو وإتاحتها ساتا وآخرون (http://plaza.umin.ac.jp/~msata/english.htm) كان مفيدا للغاية.

1. الحث الجراحي لNeointimal الآفات في الشريان الفخذي ماوس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التجارب باستخدام الحيوانات يجب أن يتم تنفيذ وفقا لمتطلبات الأخلاق الوطنية والمؤسسية. يجب أن يتم تنفيذ كل عملية جراحية باستخدام تقنية العقيم المناسبة. ويتحقق تحريض الآفات neointimal باستخدام تعديل لهذه التقنية التي وصفها روكي وآخرون. 12 وساتا وآخرون. 13. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن الذكور C57Bl6 / J الفئران (العمر 10-12 أسابيع؛ وزن 25-30 جم) ثم تخدير عن طريق تقديم 4-5٪ الأيزوفلورين في غرفة الاستقراء. مرة واحدة وقد تم بفعل التخدير، ونقل الماوس إلى حصيرة ساخنة للحفاظ على درجة حرارة الجسم عند 37 درجة مئوية. تواصل إدارة الأيزوفلورين (2-3٪) عن طريق قناع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة وقد يتسبب على مستوى مناسب من التخدير (عدم استجابة إلى أخمص قدميه قرصة)، وتوفير غطاء مسكن من قبل إدارة البوبرينورفين (0.1 ملغم / كغم -1). ثم ضع الماوس في موقف ضعيف لد حلق السطح البطني للhindlimb اليسار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق لفضح عضلات hindlimb العلوي، وبين التشعب مع الشريان المأبضي وجدار البطن، استخدم تشريح حادة لعزل الشريان الفخذي والوريد من العصب الفخذي. ري الجرح كما هو مطلوب باستخدام 1٪ ث / ت يجنوكائين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الداني (على مقربة من جدار البطن) والبعيدة (مباشرة أسفل الفرع مع الشريان المأبضي) الحروف المركبة مؤقتة (6/0 Mersilk) حول الشريان الفخذي والوريد للسيطرة على تدفق الدم. ثم عزل الشريان المأبضي (ما يقرب من 2-5 ملم البعيدة إلى فرع مع الشريان الفخذي) وligate بشكل أقصى. وضع الثاني، ضمد غير مقيدة تحت الشريان المأبضي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير (بضع الشريان) في الشريان المأبضي، البعيدة على الفور إلى فرع مع الشريان الفخذي، ومنع النزيف عن طريق الضغط على ربطة مؤقت الداني. دفع على التوالي، انتشرت 0.014 &quot;سلك التوجيه1-1.5 سم على طول الشريان الفخذي في اتجاه جدار البطن وتترك في مكان لمدة 30 ثانية (الشكل 1A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة سلك التوجيه وligate الشريان المأبضي فوق بضع الشريان، وذلك باستخدام رباط وضعت لهذا الغرض، ومع الحرص على عدم انسداد الشريان الفخذي. ملاحظة: للحصول على الإصابة الناجمة عن ربط. Neointimal إعادة دون وقوع إصابات داخل اللمعة يمكن أن يتسبب كتبها ligating الشرايين الفخذية أو المأبضية (1B الشكل و1C). ولتحقيق ذلك اتبع الخطوات من 1،1-1،5. ومع ذلك، لا تجعل بضع الشريان ولكن (تجنب الخطوة 1.6) إما (ط) ligate الشريان المأبضي البعيدة على الفور إلى الشريان الفخذي أو (ب) ligate الشريان الفخذي مشترك في نقطة تفرع مع الشريان المأبضي. ثم المضي قدما في الخطوة 1.8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الحروف المركبة مؤقتة، أغلق الجرح مع خياطة الخارجية متقطع (5/0 Mersilk) وتطبيق كريم EMLA (2.5٪ ليدوكائين، 2.5٪ بريلوكائين). السماح للحيوانات لإعادة<html> اكتساب الوعي (عادة 5-10 دقيقة) وتأكد من أنهم يتحركون بحرية في جميع أنحاء القفص (قد يكون عرج طفيف واضحا في المحطة المتضررة ولكن هذا يجب حل خلال 2-3 أيام الأولى بعد الجراحة) قبل أن تعود إلى غرف القابضة. الفئران لا يجب أن يكون مقر منفردة بعد الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للحيوانات لاسترداد لمدة تصل إلى 3 أشهر. وسوف تبدأ الآفات الصغيرة لتظهر ~ 7 أيام بعد الإصابة الأسلاك وسوف تصل إلى الحد الأقصى لحجم مستقر بعد ~ 21-28 يوما. </li></ol> 2. تحريض تصلب الآفات في ئي E - / - الفئران <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة النظام الغذائي الغربي (0.2٪ الكوليسترول في الدم؛ الحمية البحوث، USA) للذكور، 6 أسابيع الفئران APOE-باطل القديم (ولدت في بيت) لمدة 12 أسبوعا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> آفات تصلب الشرايين وغالبا ما تكون مرئية على التفتيش الإجمالي من قوس الأبهر والفروع الأساسية (الشكل 2). </li></ol> 3. تحليل الشرياني الآفات باستخدام الإسقاط الضوئي المقطعي (الأراضي الفلسطينية المحتلة) الإقليم الشمالي &quot;&gt; ملاحظة: تم الحصول على الصور من الأراضي الفلسطينية المحتلة آفات في الشرايين الفخذية الفئران وعينات قوس الأبهر باستخدام التصوير المقطعي الإسقاط الضوئية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الفئران عن طريق تثبيت transcardiac نضح واستنزاف تحت التخدير الطرفي (80 ملغ / كغ بنتوباربيتال الصوديوم)، وذلك باستخدام heparinised (10 U / مل) الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) تليها 10٪ من الفورمالين محايدة مخزنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الشرايين الفخذية أو قوس الأبهر والفروع الأساسية (يسار الشريان السباتي، الشريان تحت الترقوة الأيسر والجذع العضدي الرأسي)، حسب الاقتضاء، وإزالة المواد شبه براني الدخيلة. ما بعد الإصلاح في 10٪ من الفورمالين مخزنة O / N، قبل تخزينها في الايثانول 70٪ لحين الحاجة إليها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشرايين تضمين في 1.5٪ نقطة انصهار منخفضة الاغاروز وتصفيتها قبل من خلال هتما 113 V الورق. نعلق كل عينة إلى الأراضي الفلسطينية المحتلة المغناطيسي جبل مع لاصقة cyanoacrylate مع محور السفينة وتمشيا مع هذا الجبل. تقليم الاغاروز الزائدة إلى شكل مخروطي. يذوى في الميثانول بنسبة 100٪ لمدة 12 ساعة على الأقل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cسفن لير عن طريق الغمر (لمدة 12-24 ساعة) في خليط من الكحول البنزيل بنزوات البنزيل و(1: 2 ت / ت). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع عينات مسح في التصوير المقطعي معايرة. تعيين دقة إلى 1024 X 1024، وتحديد والتكبير البصري الذي يسمح للمنطقة بأكملها من الفائدة أن ينظر إليها. حجم الأرض الفلسطينية المحتلة هي الخواص يتم بناؤها محور Z إلى نفس القرار (أي 1024 X 1024 X 1024)، وحجم فوكسل ~ 200 ميكرون. وهذا قد يمثل الإفراط في تقدير قرار كما أن هناك احتمالا أن تكون القطع الأثرية إعادة الإعمار. ضبط الموقف العينة بحيث تدور على محورها الخاص في مركز مجال الرؤية في حقل مشرق، وقناة الإرسال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في قناة الانبعاثات مرشح GFP1 (فلتر الإثارة 425 نانومتر مع 40 نانومتر الفرقة تمرير؛ تصفية الانبعاثات: 475 تمريرة طويلة نانومتر)، والتركيز على العينة وضبط وقت التعرض لتعظيم المدى الديناميكي للصورة الناتجة (تجنب الإفراط في التشبع). تفحص سفينة في القناة الانبعاثات GFP1 فقط، مع خطوة 0،9 درجة دوران. &lt;/ لى&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الإنجاز، تأكيد الجودة من الحصول على البيانات باستخدام برنامج DataViewer. إزالة عينة من الماسح الضوئي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للسماح للتحليل النسيجي لاحق، عينة مكان في الميثانول بنسبة 100٪ ل&gt; 24 ساعة قبل تجهيزها لشمع البارافين كالمعتاد. </li></ol> 4. صورة إعادة الإعمار وتحليل يتم إجراء تصوير الشعاعي الطبقي إعادة البناء التي تمت تصفيتها الخلفية الإسقاط باستخدام برنامج NRecon أو ما شابه ذلك. إعادة البناء لا يمكن أن يؤديها غير المراقب، على دفعات. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحسين جودة الصورة من خلال التعويض عن اختلال وتعديل مستويات شدة الصورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من جودة الصورة باستخدام برنامج إعادة الإعمار DataViewer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد القسم المناسب للعينة لتحليلها. الحفاظ على هذا الطول متناسقا بين السفن إذا أبعاد اللمعية هي ليتم تسجيلها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد الخطوط العريضة للآفات من خلال تتبع يدويا الحدود المناسبة ل1 في كل 50 شيدت إعادة العابرة للأقسام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التحقق من كل معشق المقطع العرضي لضمان الزيادات الحاسوب ولدت صحيحة. ضبط يدويا الحدود عند الضرورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين عتبة مستوى الرمادي بحيث يتم تحديد فقط الآفة وتصدير بيانات القياس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل فحص، وتحديد منطقة عمودية من الفائدة التي تحتوي على الآفة وتتبع الحدود بين وسائل الإعلام وneointima (أي.، موقف الصفيحة المرنة الداخلية) لكل ال 50 خط مسح. أقحم الحدود البطانية / وسائل الإعلام للخطوط المسح معشق في مجال البرمجيات، والتحقق من وتصحيح صالح عند الاقتضاء. المزيد من هذه الشريحة تعريف ثلاثة مجلدات الأبعاد إلى عتبة كثافة محددة يدويا لإنتاج مجموعة صورة الثنائي الذي بكسل البيضاء تمثل neointima وبكسل سوداء تمثل التجويف البراءة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> القياسات التي اتخذت في ما يلي: إجمالي حجم الآفة (حجم الكائن)، وحجم اللمعية (السعة الإجمالية - حجم الكائن) وتوزيع الآفة والتجويف عبر طائفةمنطقة IONAL على طول المحوري للسفينة التي شملتها الدراسة. </li></ol>

<ol>
	<li>Luis, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerosis.">Atherosclerosis.</a> Nature. 407, 233-241 (2000).</li><li>Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerosis&#8211;an+inflammatory+disease.">Atherosclerosis&#8211;an inflammatory disease.</a> N Engl J Med. 340, 115-126 (1999).</li><li>Deuse, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+In-Stent+Restenosis:+An+Inexpensive,+Reliable,+and+Rapid+Preclinical+Model.">Imaging In-Stent Restenosis: An Inexpensive, Reliable, and Rapid Preclinical Model.</a> J Vis Ex. (31), (2009).</li><li>McAteer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+and+3D+reconstruction+of+atherosclerotic+plaque+components+in+apolipoprotein+E+knockout+mice+using+ex+vivo+high-resolution+MRI.">Quantification and 3D reconstruction of atherosclerotic plaque components in apolipoprotein E knockout mice using ex vivo high-resolution MRI.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 2384-2390 (2004).</li><li>Martinez, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+Computed+Tomography-Based+Virtual+Histology+for+Visualization+and+Morphometry+of+Atherosclerosis+in+Diabetic+Apolipoprotein+E+Mutant+Mice.">Microscopic Computed Tomography-Based Virtual Histology for Visualization and Morphometry of Atherosclerosis in Diabetic Apolipoprotein E Mutant Mice.</a> Circulation. 120, 821-822 (2009).</li><li>Langheinrich, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerotic+Lesions+at+Micro+CT:+Feasibility+for+Analysis+of+Coronary+Artery+Wall+in+Autopsy+Specimens.">Atherosclerotic Lesions at Micro CT: Feasibility for Analysis of Coronary Artery Wall in Autopsy Specimens.</a> Radiology. 231, 675-681 (2004).</li><li>Ambrosi, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virtual+histology+of+the+human+heart+using+optical+coherence+tomography.">Virtual histology of the human heart using optical coherence tomography.</a> J Biomed Opt. 14, 054002 (2009).</li><li>Ku, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoacoustic+microscopy+with+2-micron+transverse+resolution.">Photoacoustic microscopy with 2-micron transverse resolution.</a> J Biomed Opt. 15, 021302 (2010).</li><li>Sharpe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+projection+tomography+as+a+tool+for+3D+microscopy+and+gene+expression+studies.">Optical projection tomography as a tool for 3D microscopy and gene expression studies.</a> Science. 296, 541-545 (2002).</li><li>Sharpe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+projection+tomography.">Optical projection tomography.</a> Annu Rev Biomed Eng. 6, 209-228 (2004).</li><li>Kirkby, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+3-Dimensional+Imaging+of+Murine+Neointimal+and+Atherosclerotic+Lesions+by+Optical+Projection+Tomography.">Quantitative 3-Dimensional Imaging of Murine Neointimal and Atherosclerotic Lesions by Optical Projection Tomography.</a> PloS ONE. 6 (2), e16906 (2011).</li><li>Roque, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+femoral+artery+denudation+injury+associated+with+the+rapid,+accumulation+of+adhesion+molecules+on+the+luminal+surface+and+recruitment+of+neutrophils.">Mouse model of femoral artery denudation injury associated with the rapid, accumulation of adhesion molecules on the luminal surface and recruitment of neutrophils.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 20, 335-342 (2000).</li><li>Sata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+vascular+injury+that+induces+rapid+onset+of+medial+cell+apoptosis+followed+by+reproducible+neointimal+hyperplasia.">A mouse model of vascular injury that induces rapid onset of medial cell apoptosis followed by reproducible neointimal hyperplasia.</a> J Mol Cell Cardiol. 32, 2097-2104 (2000).</li><li>Richards-Kortum, R., Sevick-Muraca, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+optical+spectroscopy+for+tissue+diagnosis.">Quantitative optical spectroscopy for tissue diagnosis.</a> Annu Rev Phys Chem. 47, 555-606 (1996).</li><li>Kirkby, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-endothelial+cell+endothelin-B+receptors+limit+neointima+formation+following+vascular+injury.">Non-endothelial cell endothelin-B receptors limit neointima formation following vascular injury.</a> Cardiovascular Research. 95, 19-28 (2012).</li><li>Kipari, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=11-hydroxysteroid+dehydrogenase+type+1+deficiency+in+bone+marrow-derived+cells+reduces+atherosclerosis.">11-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 deficiency in bone marrow-derived cells reduces atherosclerosis.</a> FASEB J. 27 (4), 1519-1531 (2013).</li><li>Mackinnon, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+galectin-3+reduces+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E+deficient+mice.">Inhibition of galectin-3 reduces atherosclerosis in apolipoprotein E deficient mice.</a> Glycobiology. 23 (6), 654-663 (2013).</li><li>Kumar, A., Lindner, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remodeling+with+neointima+formation+in+the+mouse+carotid+artery+after+cessation+of+blood+flow.">Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 17, 2238-2244 (1997).</li><li>Walls, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+artefacts+in+optical+projection+tomography.">Correction of artefacts in optical projection tomography.</a> Phys Med Biol. 50, 4645-4665 (2005).</li><li>Walls, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolution+improvement+in+emission+optical+projection+tomography.">Resolution improvement in emission optical projection tomography.</a> Phys Med Biol. 52, 2775-2790 (2007).</li><li>Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+methods+for+three-dimensional+reconstructions+from+confocal+images:+I.+tissue+shrinking+and+axial+scaling.">Correction methods for three-dimensional reconstructions from confocal images: I. tissue shrinking and axial scaling.</a> Journal of Neuroscience Methods. 100, 135-143 (2000).</li><li>Alanentalo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tomographic+molecular+imaging+and+3D+quantification+within+adult+mouse+organs.">Tomographic molecular imaging and 3D quantification within adult mouse organs.</a> Nat Methods. 4, 31-33 (2007).</li></ol>

The authors have no competing financial interest.

تحليل 3-الأبعاد لديها امكانات كبيرة لاستبدال أو إضافة إلى التقنيات النسيجية 2-الأبعاد التي لا تزال تدعم غالبية التحقيقات في تشكيل آفة الشرايين. هنا يظهر الأراضي الفلسطينية المحتلة في شرايين الفئران الصغيرة (مع الشرايين الفخذية الفئران ربما تمثل أصغر الأوعية التي يمكن تحليلها بنجاح باستخدام هذه التقنية). غير أنه، ومناسبة أيضا للاستخدام مع الشرايين (والآفات) من الأنواع الأخرى، بما في ذلك سفن الإنسان الحجم الصغيرة والمتوسطة. وقد استخدمت مجموعتنا بنجاح هذه التقنية لتحليل الآفات في أرنب الشريان الأورطي (Bezuidenhout وآخرون؛ غير منشورة). الأراضي الفلسطينية المحتلة يعد أسرع التحليل وزيادة المعلومات الهيكلية مقارنة مع الأنسجة التقليدية ولها ميزة عدم منع التحليل اللاحق للعينة باستخدام تقنيات كلا النسيجية والمناعية. الصور المنتجة باستخدام الأراضي الفلسطينية المحتلة أعطت التفاصيل التشريحية، والتي تبين مواقع تشكيل الآفةوحجم الآفات في هذه المجالات. الشرايين المستخدمة في هذه التحقيقات هي على الأرجح قريبة من الحد من قرار للتقنية وجودة الصورة وبالتالي تضعف إلى درجة معينة من خلال الأعمال الفنية (وربما الناتجة عن دوران اختلال والمقاصة غير مكتملة، والانعكاس / الانكسار في القمم الاغاروز ومشاكل التركيز) . على الرغم من هذا، والتفاصيل المطلوبة (أي طبقات من جدار الوعاء الدموي) لا تزال ملحوظ، وبالتالي فإن أسلوب مفيد للغاية لتقدير حجم طبقات الفردية. في الواقع، يمكن أن يكون كميا الصور بسرعة وبتكاثر لتوفير قياسات الآفة وحجم اللمعية في أقسام تحمل لوحة للسفينة، وكذلك المناطق مستعرضة الآفة والتجويف في مواقع مختارة في العينة. الكبيرة (الشريان الأورطي) والمتوسطة (الفخذ، السباتي، تحت الترقوة) شرايين الفئران - تلك التي تستخدم عادة لتحليل تشكيل الآفة تصلب الشرايين وneotintimal في الفئران - كانت بنجاحتحليلها باستخدام هذا الأسلوب. في الواقع نحن لم تستخدم الآن الأراضي الفلسطينية المحتلة لإثبات تأثير التدخلات الدوائية والتلاعب الجيني على تصلب الشرايين وneointimal حجم الآفة. على سبيل المثال، endothelin مستقبلات الحصار تغيير تشكيل الآفة neointimal حين حذف انتقائي لمستقبلات endothelin B من بطانة الأوعية الدموية لم يكن 15. في تصلب الشرايين الفئران المعرضة، عرضت حذف الجينية للأنزيمات 11β-HSD1 16 أو galectin 3 17 إلى تقليص حجم آفات تصلب الشرايين. الكمي لحجم الآفة هو فائدة واضحة من الأراضي الفلسطينية المحتلة. أنه يعطي مؤشرا أكثر إفادة من عبء الآفة الكلي في أحد الشرايين 4 من عادة يتم الحصول عليها بطرق النسيجية. تحليل الآفة كلها يقلل من التحيز في الاختيار والخطأ الذي سيحدث حتما عندما يتم اختيار أقسام منفصلة من سفينة لتحليلها. إنتاج لمحات الآفة الطولية هو مصدر قوة إضافية من الأراضي الفلسطينية المحتلة، أكد المقارنة من الآفات التي تسببها أنواع مختلفة من إصابة 13،16 (الشكل 5). على سبيل المثال، على حد سواء الربط الكامل والأسلاك الإدراج يسببها انسداد شبه كامل على مقربة من التشعب-femero المأبضية. إصابة الأسلاك، والآفات ولكن، أنتجت التي امتدت على طول القسم الممسوحة ضوئيا، في حين أن الآفات الناجمة عن عملية ربط الشرايين تتقلص بشكل سريع في حجم وتختفي. وينسجم هذا النمط مع أكبر قدر من الضرر الناجم عن إدخال سلك التوجيه الاوعية الدموية. توليد نتائج مماثلة باستخدام المقاطع النسيجية مكلفة ومستهلكة للوقت وكثيفة العمالة. مزايا الأراضي الفلسطينية المحتلة وتشمل نوعية الصور التي تنتج والسرعة النسبية وبساطتها (لقد تم مسحها ضوئيا بشكل روتيني 20 سفينة يوميا). ويبدو أن نوعية صورة متفوقة، أو قابلة للمقارنة على الأقل، إلى أساليب أخرى لتوليد الصور 3 الابعاد خارج الجسم الحي (مثل التصوير بالرنين المغناطيسي والتصوير المقطعي الصغرى)، صوآخرون الأراضي الفلسطينية المحتلة تتطلب مرات المسح أقصر (الوقت التكامل لدراستنا كانت 1-2sec عادة / الصورة) وأقل تكلفة. إعداد نموذج يمتد على مدى عدة أيام ولكن يتطلب العمل القليل، والأوعية يمكن أن تكون مستعدة على دفعات، والبيانات التي يمكن الحصول عليها في جلسة واحدة. ونتيجة لذلك، سرعة عالية ولا تتطلب التوسع في استخدام الماسح الضوئي. الأهم من ذلك أن طبيعة غير مدمرة للأرض الفلسطينية المحتلة يعني أنها يمكن أن تستخدم لتحديد المواقع ذات الأهمية للفحص المناعى. وبالتالي تقليل كمية من قطع وتلطيخ المطلوبة. فمن الممكن أن تطوير عالية الدقة الموجات فوق الصوتية ستوفر طريقة بديلة للالكمي الحجمي للآفات في الشرايين بهذا الحجم، ولكن الكتاب لا يدركون أي المنشورات التي تثبت هذا التطبيق. ربما لا يثير الدهشة، جودة الصورة في الأراضي الفلسطينية المحتلة هي أدنى من التقنيات المجهرية (التي يمكن، بطبيعة الحال، إلا أن يؤديها على عينات أصغر). التحسينات المقترحة لreconstructioن من البيانات قد تعالج هذا القيد من خلال السماح للتحسن في المستقبل من جودة الصورة 19،20. القلق المنهجي آخر هو أن معالجة الأنسجة يغير خصائص العينة. على سبيل المثال عن طبيعة المادة وكيل المقاصة، البنزيل الكحول / بنزوات البنزيل (BABB)، ومن المرجح أن إزالة الدهون من آفات تصلب الشرايين، في حين الجفاف مسبق قد يسبب انكماش (على الرغم من وبطبيعة الحال، والجفاف وإزالة الدهون الخطوات هي أيضا سمة من سمات إعداد نموذج مبنية شمع البارافين). وقد استخدم BABB في هذا التحقيق كما، بالمقارنة مع وكلاء التخليص ماء (مثل الجلسرين 21) أنه يسبب تغييرات طفيفة فقط في التشكل. هناك عدة احتمالات لمزيد من التطوير والتحسين في الأراضي الفلسطينية المحتلة، وخاصة فيما يتعلق تتبع الترتيب 3-الأبعاد من الخلايا الرئيسية ويشير العوامل التي تدخل في إعادة الشرايين. تألق ذاتي قوي من الأنسجة في الشرايين، والذي هو من هذا القبيلن ميزة في توليد الصور التشريحية، لا تطفأ بالطرق الحالية للتبييض 22 و قد تقيد استخدام تحقيقات الفلورسنت لتقييم RNA والبروتين أنماط التوزيع. استخدام المجسات اللونية (على سبيل المثال β غالاكتوزيداز) تصور بواسطة التصوير الإرسال قد تغلب على هذا القيد. وفي الختام، الأراضي الفلسطينية المحتلة لديها امكانات كبيرة للتصوير 3 الأبعاد للآفات في البطانية الشرايين الفئران. أنها تمثل تقدما كبيرا على أساليب 2-الأبعاد التي عادة ما تكون كثيفة العمالة ولا تمثل على نحو فعال إجمالي حجم الآفة. الأراضي الفلسطينية المحتلة هو سريع نسبيا ومريحة وغير مدمرة. تطورات جديدة في تحليل الصور وعد لزيادة قوة وفائدة هذه التقنية.

تشكيل الآفات الشريانية أمر أساسي لارتفاع معدلات المراضة والوفيات المرتبطة بأمراض القلب والأوعية الدموية 1. يعتبر تشكيل الآفة أن يكون ناجما عن استجابة التهابية غير المقيدة لالشرايين إصابة 2. تشكل آفات تصلب الشرايين ببطء في الاستجابة لإصابة مزمنة لجدار الشرايين في حين الآفات restenotic وضعها بعد بسرعة التلف الميكانيكي الحاد (على سبيل المثال، بعد الدعامة الزرع). وقد تم توضيح الآليات التي تسهم في تطوير الآفات الشريانية إلى حد كبير عن طريق استخدام نماذج حيوانية مناسبة، في كثير من الأحيان في تركيبة مع التلاعب الجيني ذات الصلة 1. تحليل حجم الآفة والتكوين الكلاسيكي يعتمد بشكل كبير على المجراة سابقا، 2-الأبعاد الأنسجة (على الرغم من أن هذا بدأ يتغير مع تطور أساليب محسنة في الجسم الحي وخارج الحي كشف وتحليل الآفات في الحيوانات الصغيرة &lt;سوب&gt; 3). التحليل النسيجي للآفات الشريانية هي عمالة كثيفة، تستغرق وقتا طويلا، ويوفر معلومات محدودة من هيكل 3-الأبعاد. على سبيل المثال، يتم تقييم عبء الآفة عادة عن طريق قياس مساحة المقطع العرضي للآفة (إما في مواقع مختارة عشوائيا أو في موقع الأقصى انسداد). وهذا يوفر تحليلا غير مكتمل من عبء الآفة بشكل عام. كله يشن تقدم تكنولوجيا التصوير 3 الأبعاد والحلول الممكنة لهذه المشكلة ولكن تم وصفها قليلة للغاية نهج مناسبة. قد يكون هذا يرجع أساسا إلى حجم الشرايين الماوس التي تكون كبيرة جدا لاحد الفوتون المجهري متحد البؤر ولكنها صغيرة جدا للتصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) 4 والأشعة السينية التصوير المقطعي (CT) 5. تطبيق فيفو السابقين التصوير بالرنين المغناطيسي والصغرى CT لدراسة آفات تصلب الشرايين في فئران يوحي أنها توفر قرار محدود، حتى في الشرايين الكبيرة نسبيا. يضاف إلى كل ذلك، ومرات الاستحواذ طويلة نسبيا المطلوبةلحد الإنتاجية (وزيادة تكاليف المسح الضوئي) 4،6. تطوير طرائق التصوير الضوئي الجديدة (مثل التصوير المقطعي البصري التماسك 3،7 والصورة الصوتية التصوير المقطعي 8) تقدم الكثير من الإمكانيات لتحسين التصوير الآفات في شرايين الفئران. يظهر إمكانات مماثلة من قبل المقطعي الإسقاط الضوئية (الأراضي الفلسطينية المحتلة) التي وضعت للسماح للتحليل أجنة الفئران. وقد تم تصميم الأراضي الفلسطينية المحتلة لعينات صورة تتراوح بين ~ 0،3 حتي 10 مم وقطرها 9. التصوير نقل يسجل غموض عينة شبه شفافة للضوء المرئي متعدد الألوان، ويمكن أن تستخدم لتحديد الهياكل التشريحية. الانبعاثات سجلات التصوير انبعاث الضوء التالية الإثارة في موجات محددة من الذاتية (على سبيل المثال، الكولاجين، الإيلاستين) وfluorophores الخارجية في العينة. هذا ويمكن أيضا توفير المعلومات التشريحية (منذ مكونات الأنسجة المختلفة يمكن أن تختلف في نوع وكثافة الأنواع autofluorescentالحالي). بالإضافة إلى ذلك، يمكن تحديد توزيع مناعية أو التعبير الجيني باستخدام تحقيقات الفلورسنت المناسب (10). إما وضع التصوير (نقل أو الانبعاثات)، يركز الضوء على جهاز إلى جانب المسؤول عن السماح تكرارية التقاط الصور كما تدور عينة (عادة 400 صورة في 0.9 درجة الزيادات). هذه يمكن استخدامها لحساب حجم التداول بنسبة أساليب إعادة الإعمار تصوير الشعاعي الطبقي القياسية (مثل المصفاة الخلفية الإسقاط (باستخدام خوارزمية مخروط) أو إعادة تكراري). يوضح هذا الفيديو تطبيق رواية لدينا من الأراضي الفلسطينية المحتلة لتحليل 3-الأبعاد السريع، وقابلة للقياس الكمي وفعالة من حيث التكلفة لآفات تصلب الشرايين وneointimal، كما هو موضح سابقا في كيركبي وآخرون. 11. وقد أظهرت هذه التقنية لتكون مناسبة لقياس حجم الآفة في ثلاثة نماذج شائعة الاستخدام: (ط) الفخذ الشريان الأسلاك الإصابات؛ (ب) الفخذ الشريان الربط، و (ج) تصلب الشرايين الناجم عن النظام الغذائي في apolipoproteiن E ناقصة (APOE - / -) الفئران.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="691">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Name of Reagent/Material</td>
			<td style="width:180px;">Company</td>
			<td style="width:137px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:180px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Operating Microscope</td>
			<td style="width:180px;">Zeiss, Germany</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;">OPMI Pico i</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Anaesthetic Machine</td>
			<td style="width:180px;">Vet Tech, UK</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Fluovac</td>
			<td style="width:180px;">Harvard Apparatus UK</td>
			<td style="width:137px;">340387</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Fluosorber</td>
			<td style="width:180px;">Harvard Apparatus UK</td>
			<td style="width:137px;">340415</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Bead Steriliser</td>
			<td style="width:180px;">Fine Science Tools, UK</td>
			<td style="width:137px;">1800-45</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Heated Mat</td>
			<td style="width:180px;">Fine Sceince Tools, UK</td>
			<td style="width:137px;">21061-10</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Balance</td>
			<td style="width:180px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:137px;">MS1602S</td>
			<td style="width:180px;">PB1502 or equivalent</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Sutures</td>
			<td style="width:180px;">Ethicon, UK</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:180px;">5/0 Mersilk</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Guidewire</td>
			<td style="width:180px;">Cook Inc, USA</td>
			<td style="width:137px;">C-PMS-251</td>
			<td style="width:180px;">0.014&#8221;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Suture Silk</td>
			<td style="width:180px;">Fine Science Tools, UK</td>
			<td style="width:137px;">18020-60</td>
			<td style="width:180px;">6/0 Mersilk</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="169" rowspan="6" style="height:169px;width:195px;">Surgical Tools</td>
			<td rowspan="6" style="width:180px;">Fine Science Tools, UK</td>
			<td style="width:137px;">14058-09</td>
			<td style="width:180px;">Toughcut Iris scissors</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:137px;">15000-01</td>
			<td style="width:180px;">Cohan-Vannas Spring Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:137px;">11251-35</td>
			<td style="width:180px;">Dumont #5/45 Forceps</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:137px;">11370-31</td>
			<td style="width:180px;">Moria Iris Forceps</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:137px;">13008-12</td>
			<td style="width:180px;">Halsted-Mosquito Haemostat</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:137px;">18050-35</td>
			<td style="width:180px;">Bulldog clips</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Bioptonics 3001 Tomograph&#160;</td>
			<td style="width:180px;">Bioptonics, UK</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Magnetic OPT Mount</td>
			<td style="width:180px;">Bioptonics, UK</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Computer</td>
			<td style="width:180px;">Dell Inc, UK</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Peristaltic pump</td>
			<td style="width:180px;">Gilson</td>
			<td style="width:137px;">F117606</td>
			<td style="width:180px;">Minipuls 3</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">DataViewer software&#160;</td>
			<td style="width:180px;">Skyscan, Belgium</td>
			<td style="width:137px;">v.1.4.4</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">NRecon software&#160;</td>
			<td style="width:180px;">Skyscan, Belgium</td>
			<td style="width:137px;">v.1.6.8</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">CTan software</td>
			<td style="width:180px;">Skyscan, Belgium</td>
			<td style="width:137px;">v.1.12</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:195px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:195px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:180px;">Merial Animal Health Ltd, UK</td>
			<td style="width:137px;">AP/Drugs/220/96</td>
			<td style="width:180px;">100% Inhalation vapour, liquid</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Medical Oxygen</td>
			<td style="width:180px;">BOC Medical, UK</td>
			<td style="width:137px;">UN1072</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:195px;">Vetergesic</td>
			<td style="width:180px;">Alstoe Animal Health Ltd, UK</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;">0.3mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:195px;">1% Lignocaine</td>
			<td style="width:180px;">Hamlen Pharmaceuticals, UK</td>
			<td style="width:137px;">LD1010</td>
			<td style="width:180px;">10ml ampoule</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">EMLA Cream</td>
			<td style="width:180px;">Astra Zeneca, UK</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:195px;">Sodium Pentobarbital</td>
			<td style="width:180px;">Ceva Animal Health Ltd, UK</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Western Diet</td>
			<td style="width:180px;">Research Diets, USA</td>
			<td style="width:137px;">D12079B</td>
			<td style="width:180px;">0.2% cholesterol</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:180px;">Sigma UK</td>
			<td style="width:137px;">P4417</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Heparin (Mucous)</td>
			<td style="width:180px;">Leo Laboratories, UK</td>
			<td style="width:137px;">PL0043/003GR</td>
			<td style="width:180px;">25, 0000 Units</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Neutral Buffered Formalin</td>
			<td style="width:180px;">Sigma, UK</td>
			<td style="width:137px;">HT501128</td>
			<td style="width:180px;">10%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Ethanol</td>
			<td style="width:180px;">VWR BDH Prolabo, UK</td>
			<td style="width:137px;">20821.33</td>
			<td style="width:180px;">Absolute AnalaR&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Agarose</td>
			<td style="width:180px;">Invitrogen, UK</td>
			<td style="width:137px;">16020050</td>
			<td style="width:180px;">Low melting point</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Filter Paper</td>
			<td style="width:180px;">GE Healthcare, UK</td>
			<td style="width:137px;">113v</td>
			<td style="width:180px;">Whatman</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Cyanoacrylate adhesive</td>
			<td style="width:180px;">Henkel, UK</td>
			<td style="width:137px;">4304</td>
			<td style="width:180px;">Loctite</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Benzyl alcohol</td>
			<td style="width:180px;">Sigma, UK</td>
			<td style="width:137px;">B6630</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Benzyl benzoate</td>
			<td style="width:180px;">Sigma, UK</td>
			<td style="width:137px;">402834</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Methanol</td>
			<td style="width:180px;">VWR BDH Prolabo, UK</td>
			<td style="width:137px;">20856.296</td>
			<td style="width:180px;">100%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation and 3-dimensional quantitation of arterial lesions in mice using optical projection tomography

توليد وتحليل الآفات الوعائية في النماذج الحيوانية المناسبة هو حجر الزاوية للبحث في أمراض القلب والأوعية الدموية، وتوليد معلومات هامة عن التسبب في تشكيل الآفة والعمل من علاجات جديدة. استخدام الفئران المعرضة للتصلب الشرايين، الأساليب الجراحية من آفة التعريفي، وتعديل النظام الغذائي قد تحسنت بشكل كبير فهم الآليات التي تساهم في تطور المرض واحتمال علاجات جديدة. تقليديا، يتم إجراء تحليل للآفات خارج الجسم الحي باستخدام تقنيات النسيجية 2-الأبعاد. توضح هذه المقالة تطبيق التصوير المقطعي الإسقاط الضوئية (الأراضي الفلسطينية المحتلة) إلى الكميات 3 الأبعاد للآفات الشريانية. لأن هذا الأسلوب هو غير مدمرة، يمكن استخدامه كمساعد للالتحليلات النسيجية والمناعية القياسية. استميلت الآفات Neointimal بواسطة سلك الإدراج أو ربط الماوس الفن الفخذتم إنشاء ريها بينما آفات تصلب الشرايين عن طريق إدارة نظام غذائي تصلب الشرايين على الفئران APOE التي تعاني من نقص. تم فحص الآفات باستخدام التصوير الأراضي الفلسطينية المحتلة من الانبعاثات autofluorescent تليها النسيجية التكميلية وتحليل المناعى. الأرض الفلسطينية المحتلة الآفات المتميزة بوضوح من جدار الأوعية الدموية الأساسي. تم حساب حجم الآفة في القسمين 2-الأبعاد باستخدام planimetry، مما يتيح حساب حجم الآفة والحد الأقصى من مساحة المقطع العرضي. وكانت البيانات التي تم إنشاؤها باستخدام الأراضي الفلسطينية المحتلة بما يتفق مع القياسات التي تم الحصول عليها باستخدام الأنسجة، مما يؤكد دقة هذه التقنية وإمكاناتها كتكملة (بدلا من البديل) إلى الأساليب التقليدية للتحليل. يوضح هذا العمل إمكانات الأراضي الفلسطينية المحتلة لتصوير تصلب الشرايين وneointimal الآفات. وهو يوفر، خارج الحي التقنية السريعة التي تشتد الحاجة إليها لتقدير 3-الأبعاد الروتيني لإعادة الأوعية الدموية.

مسح أولي لصحية (unlesioned) الشرايين الفخذية الفئران (ن = 5) أثبت أن التصوير لم نقل لا توفر الصور المفيدة. وكان هذا نتيجة للشرايين مسح تصبح شفافة جدا (وليس مبهمة للغاية) لimaging.However انتقال، وهذا مفيد للتصوير الانبعاثات حيث لا يوجد الامتصاصية / تناثر الإشارة المنبعثة. في المقابل، الشرايين الفخذية autofluoresce بقوة في القناة الانبعاثات، مع أكبر إشارة التالية الإثارة في 405-445 نانومتر (بما يتفق مع الإثارة ذروتها 410 نانومتر لالإيلاستين 14). شرائح 2-الأبعاد بناؤها من هذه الصور تتميز بوضوح وسائل الإعلام من التجويف والبرانية والتجويف. في الشرايين الفخذية الفئران التي تحصد بعد 28 يوما wire- (ن = 6) أو ligation- (ن = 5) وكانت الإصابة الناجمة عن neointimal سماكة واضحة في توقعات الانبعاثات غير تصوير الشعاعي الطبقي (الشكل 3A). في إعادة بنائها 2-dimensشرائح IONAL، يمكن تمييز الآفات neointimal متحدة المركز من وسائل الاعلام الخاصة بانبعاث الأضعف (الشكل 3B) والشكل (S1). صور الانبعاثات الأراضي الفلسطينية المحتلة من عينات جبل بأكمله من قوس الأبهر والفروع الرئيسية لها من الفئران تصلب الشرايين (ن = 8) الآفات التي تم تحديدها مع التوزيع التشريحي المتوقع (أي، في انحناء أقل من قوس الأبهر، الشريان العضدي الرأسي، وأصول من الشريان السباتي الأيسر والشرايين تحت الترقوة اليسرى (الشكل 4A). صورا مقطعية وأشارت إلى أن هذه الأمور عادة آفات غريب الأطوار، وكانت بسهولة حاليا من وسائل الإعلام والتجويف (الشكل 4B، أرقام S2 و S3). وأكدت معالجة الشرايين للتحليل النسيجي التالية الأراضي الفلسطينية المحتلة طبيعة غير مدمرة للأرض الفلسطينية المحتلة، مع أقسام ملطخة بنجاح باستخدام النسيجية (الولايات المتحدة ثلاثي الألوان، Picrosirius الأحمر) والمناعى (α-SMA، ماك-2) تقنيات (أرقام 3C و4C). وقد تبين قياس حجم الآفة باستخدام الأراضي الفلسطينية المحتلة لتكون متسقة مع القياسات التي تم الحصول عليها باستخدام تحليل الصور من المقاطع النسيجية المأخوذة من نفس الشريان 11. قياسات Planimetric من منطقة الآفة التي حصلت عليها الأراضي الفلسطينية المحتلة والأنسجة المترابطة بشكل وثيق من قبل الانحدار الخطي لwire- (R 2 = 0.92) والتي يسببها ربط (R 2 = 0.89) الآفات neointimal وويحات تصلب الشرايين (R 2 = 0.85). المهم الاستفادة من الأراضي الفلسطينية المحتلة هو قدرته على تمكين تحليل 3-الأبعاد. من خلال تطوير الكمي الحجمي للآفات مع هذه التقنية، تمكنا من تسجيل أحجام الآفة في wire- (0.1100 ± 0.0091 مم 3، ن = 6) والشرايين بجروح ربط الفخذ (0.0200 ± 0.0089 مم 3، ن = 5)، وكذلك في شرايين عضدي رأسي تصلب الشرايين (0.180 ± 0.018 مم 3. ن = 8). وكانت القياسات استنساخه للغاية (معامل التغير 5.4٪، 11.4٪ و 4.8٪ على التوالي، ن = 4) لجميع أنواع الآفة. وكانت الآفات Neointimal في السفن جرح سلك أكبر (P &lt;0.0001) من تلك التي تنتجها ربط، بما يتفق مع درجة أكبر من الأضرار التي لحقت السابق. ويمكن أيضا أن يتم التعبير عن البيانات التي تم إنشاؤها لمحات الآفة (الشكل 5) وجعل لدينامية التقييم، النوعي (أنظر الشكلين S1 - S3). أثبت هذا النهج بوضوح مدى تشكيل الآفة ردا على الإجراءات إصابة مختلفة، وسلط الضوء على التوزيع غير المتكافئ للتشكيل الآفة في الأوعية الدموية المصابة. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/50627/50627fig1.jpg" /> الشكل 1: طرق للبدء في تشكيل آفة في الشريان الفخذي الفئران &amp; #.160؛ (A) الإدراج إلى الوراء لقسطرة سلك التوجيه في الشريان الفخذي، وذلك عن طريق بضع الشريان في الشريان المأبضي يحفز تشكيل الآفة في استجابة لتمتد الإصابة والتخلص من البطانة. وإعادة تأسيس تدفق الدم خلال القسم المصاب من السفينة. (B) انتشار Neointimal في غياب داخل اللمعة وتمتد، وتعرية أو انقطاع تدفق الدم يمكن أن يسببها ligating إما الفخذ أو الشريان المأبضي البعيدة على الفور إلى الشريان الفخذي التشعب. (C) A أشد غير تجريد استجابة الإصابة / الانتشار يمكن أن يسببها ligating كل من شرايين الفخذ والمأبضية عبر نقطة تفرع الشريان الفخذي مشترك. وهذه التقنية أيضا عرقلة تدفق الدم في الجزء الأعلى من الشريان الفخذي. <img alt="الرقم 2" src="/files/ftp_upload/50627/50627fig2.jpg" /> الشكل 2: ترسب المميزة من التصلب في قوس الأبهر الماوس تصلب الشرايين المعرضة (Apolipopotein E الفئران ناقصة) غذى ارتفاع نسبة الكولسترول الغذائي الغربي لمدة 12 أسبوعا تطوير نمط مميز من ترسب الآفة في قوس الأبهر والفروع الرئيسية. كما هو موضح، والآفات واضحة (الأسهم)، عن طريق التفتيش الإجمالي تحت المجهر تشريح، في قوس الأبهر، الشريان العضدي الرأسي، وفي فوهات الشريان السباتي الأيسر والشريان تحت الترقوة الأيسر. <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/50627/50627fig3.jpg" /> الرقم 3: تشكيل الآفات التالية ربط الشريان الفخذي الأيمن (A) الصور الانبعاثات مضان عدم تصوير الشعاعي الطبقي (مقلوب لزيادة وضوح - المناطق المظلمة تتوافق مع انبعاث أقوى) يمكن التعرف على باطنة سماكة (arrowhe الأحمرالإعلانات). (B) مناطق الأوعية الدموية متميزة والتجويف يمكن تمييزها في إعادة البناء تصوير الشعاعي الطبقي. (C) التحليل النسيجي (الولايات المتحدة ثلاثي الألوان) يؤكد تشابه واضح مع الصور التي تم الحصول عليها باستخدام الأراضي الفلسطينية المحتلة. الحانات النطاق في (AC) هي 200 ملم. مقتبس من كيركبي وآخرون 11 أشرطة النطاق في (AC) هي 200 ميكرون. <img alt="الرقم 4" src="/files/ftp_upload/50627/50627fig4.jpg" /> الرقم 4: التصوير من تصلب الشرايين في قوس الأبهر تصلب الشرايين الفئران المعرضة (A) عصيدة (السهام الحمراء) هو واضح بسهولة في صور غير تصوير الشعاعي الطبقي (مقلوب بحيث المناطق الداكنة تشير الانبعاثات أقوى، وبالتالي تحسين وضوح) من قوس الأبهر، في مواقع تنبأ كما عصيدة الحمل عن طريق التفتيش تحت المجهر الضوئي (انظر الشكل 2). (B) ويؤكد هذا النمط من التوزيع في كر الشعاعي الطبقيتابعنا المقاطع. ويبين (C) النسيجية (الولايات المتحدة ثلاثي الألوان) تلطيخ تشابه وثيق مع أقسام تصوير الشعاعي الطبقي، والمناعية باستخدام أجسام مضادة عديدة تؤكد على الطابع التكاملي للأرض الفلسطينية المحتلة مع الأساليب التقليدية لتحليل الآفة. الحانات النطاق في (A-B) هي 1 مم؛ شريط النطاق في (C) هو 250 ميكرون. RSA، الشريان تحت الترقوة اليمنى. RCA، الشريان السباتي الأيمن. LCA، الشريان السباتي الأيسر. LSA، غادر الشريان تحت الترقوة. BCA، الشريان العضدي الرأسي. تعالوا، الصعود الشريان الأورطي. داو، تنازلي الشريان الأورطي. مقتبس من كيركبي وآخرون 11 <img alt="الرقم 5" src="/files/ftp_upload/50627/50627fig5.jpg" /> الشكل 5: تحليل الآفة والتجويف ملامح يشير متفاوتة مدى انتشار neointimal ردا على الطرق المختلفة للإصابات الشرايين الإسقاط الضوئي المقطعي يسمح الآفة والتجويف عبر measuremen المقطعية.نهاية الخبر أن تآمر ضد المسافة على طول الشريان الفخذي. هذا يدل بوضوح على أنه، مقارنة مع الشريان لم يصب (A)، ربط الجزئي (B) تنتج، والآفات منفصلة نسبيا صغيرة، في حين ربط الكلي (C) وتنتج انسداد كامل في موقع ربط لكن الآفة لا تمتد بعيدا على طول الشريان . إصابة سلك داخل اللمعة (D) تنتج الآفة التي تسبب انسداد شبه كامل في الجزء الأعلى من العينة، ويمتد على طول القسم ممسوحة ضوئيا من الشريان. مقتبس من كيركبي وآخرون 11 الرقم S1. التعمير المتحركة من الصور مستعرضة تم الحصول عليها من شريان الفخذ الماوس بعد إصابة ربط هذا النوع من صورة متحركة مفيد لكلا التحليل الكيفي والكمي. كما ينتقل للرسوم المتحركة من الأقرب إلى أقسام البعيدة للشريان التطور التدريجي لneointima انسداد، القرصernible من التجويف وسائل الإعلام، غير بادية للعيان. فروع جانبية يمكن التعرف عليها بسهولة، وهناك انسداد اللمعية واضحا وإعادة الخارج من الشريان كما يزيد الآفة في الحجم. يحدث انسداد كامل للسفينة وعند الوصول إلى الموقع من الربط. مقتبس من كيركبي وآخرون 11 . الرقم S2 إعادة الإعمار رسوم متحركة من صور مقطعية للقوس الأبهر من الماوس عرضة للتصلب الشرايين والرسوم المتحركة تبدأ مع المقاطع العرضية للتصاعدي (من اليسار - الذي يظهر لأول مرة) وتنازلي (يمين) الشريان الأورطي. تظهر الآفات الصغيرة في الأبهر الصاعد بينما يتحرك المسح الضوئي في اتجاه قوس الأبهر. الصور ثم التحرك من خلال القوس لإظهار ثغرات lesioned بشدة من عضدي رأسي (يسار)، السباتي الأيسر (وسط) وتحت الترقوة اليسرى (يمين) الشرايين. كما يتحرك الفحص بشكل أقصى طول هذه الفروع الآفات يقلل تدريجيا وتختفي، لأول مرة في subcالشريان lavian، ثم في الشريان السباتي، وأخيرا في الشريان العضدي الرأسي. ومن المثير للاهتمام، والآفة في التحركات الشريان العضدية الرأسية على المفرق تدفق كما هذه السفينة يقسم إلى الشريان السباتي الأيمن والشرايين تحت الترقوة اليمنى. مقتبس من كيركبي وآخرون 11 الرقم S3. المتحركة، صورة-أصدرت حجم قوس الأبهر من الماوس عرضة للتصلب الشرايين. الإسقاط الضوئي المقطعي يسمح توليد الصور 3-الأبعاد، في هذه الحالة يدل توزيع الآفة في قوس الأبهر لئي E الماوس ناقص. (A) عصيدة غير موجودة في المواقع المتوقع (في جميع أنحاء الشريان العضدي الرأسي، في أوستيا من الشريان السباتي وتحت الترقوة اليسرى والشرايين في انحناء أقل من قوس الأبهر). (B) الإنقسام وجعل من الآفة (كما هو موضح باللون الأحمر) تحمل المقاطع العرضية يشدد على توزيع اللوحات عندما فرضه على الصورة الأصلية.مقتبس من كيركبي وآخرون 11

Watch this Scientific Journal Video about Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography at JoVE.com

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

Ex vivo analysis of arterial lesions from animal models of cardiovascular disease classically relies on histological and immunohistochemical techniques. These provide 2-dimensional measurements in 3-dimensional lesions. This manuscript describes the generation of arterial lesions for quantitative analysis in 3-dimensions using optical projection tomography.

جيل والكميات 3-الأبعاد من الآفات الشرياني في الفئران عن طريق الإسقاط الضوئي المقطعي

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

generation-3-dimensional-quantitation-arterial-lesions-mice-using

Research

JoVE Journal

Medicine

9.7K Views.  The Queen's Medical Research Institute. Ex vivo analysis of arterial lesions from animal models of cardiovascular disease classically relies on histological and immunohistochemical techniques. These provide 2-dimensional measurements in 3-dimensional lesions. This manuscript describes the generation of arterial lesions for quantitative analysis in 3-dimensions using optical projection tomography.

Video: Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

Doppler Optical Coherence Tomography of Retinal Circulation

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double circular scan (CDCS) that scans around the optic nerve head at 3.40 mm and 3.75 mm diameters. The double concentric circles are performed 6 times consecutively over 2 sec. The CDCS scan is saved with Doppler shift information from which flow can be calculated. The standard clinical protocol calls for 3 CDCS scans made with the OCT beam passing through the superonasal edge of the pupil and 3 CDCS scan through the inferonal pupil. This double-angle protocol ensures that acceptable Doppler angle is obtained on each retinal branch vessel in at least 1 scan. The CDCS scan data, a 3-dimensional volumetric OCT scan of the optic disc scan, and a color photograph of the optic disc are used together to obtain retinal blood flow measurement on an eye. We have developed a blood flow measurement software called "Doppler optical coherence tomography of retinal circulation" (DOCTORC). This semi-automated software is used to measure total retinal blood flow, vessel cross section area, and average blood velocity. The flow of each vessel is calculated from the Doppler shift in the vessel cross-sectional area and the Doppler angle between the vessel and the OCT beam. Total retinal blood flow measurement is summed from the veins around the optic disc. The results obtained at our Doppler OCT reading center showed good reproducibility between graders and methods (&lt;10%). Total retinal blood flow could be useful in the management of glaucoma, other retinal diseases, and retinal diseases. In glaucoma patients, OCT retinal blood flow measurement was highly correlated with visual field loss (R2&gt;0.57 with visual field pattern deviation). Doppler OCT is a new method to perform rapid, noncontact, and repeatable measurement of total retinal blood flow using widely available Fourier-domain OCT instrumentation. This new technology may improve the practicality of making these measurements in clinical studies and routine clinical practice.

Total retinal blood flow is measured by Doppler optical coherence tomography and semi-automated grading software.

دوبلر التصوير المقطعي التماسك البصري للتداول الشبكية

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double ...

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy tissue is the root cause of disease and death. For other cancers (e.g. breast, lung, etc.), it is the process of metastasis, in which tumor cells move from a primary tumor mass, colonize distal sites and ultimately contribute to organ failure, that eventually leads to morbidity and mortality 3. It has been estimated that invasion and metastasis are responsible for 90&#37; of cancer deaths 4. As a result, there has been intense interest in identifying the molecular processes and critical protein mediators of invasion and metastasis for the purposes of improving diagnosis and treatment 5.
A challenge for cancer scientists is to develop invasion assays that sufficiently resemble the in vivo situation to enable accurate disease modeling 6. Two-dimensional cell motility assays are only informative about one aspect of invasion and do not take into account extracellular matrix (ECM) protein remodeling which is also a critical element. Recently, research has refined our understanding of tumor cell invasion and revealed that individual cells may move by elongated or rounded modes 7. In addition, there has been greater appreciation of the contribution of collective invasion, in which cells invade in strands, sheets and clusters, particularly in highly differentiated tumors that maintain epithelial characteristics, to the spread of cancer 8.
We present a refined method 9 for examining the contributions of candidate proteins to collective invasion 10. In particular, by engineering separate pools of cells to express different fluorescent proteins, it is possible to molecularly dissect the activities and proteins required in leading cells versus those required in following cells. The use of RNAi provides the molecular tool to experimentally disassemble the processes involved in individual cell invasion as well as in different positions of collective invasion. In this procedure, mixtures of fluorescently-labeled cells are plated on the bottom of a Transwell insert previously filled with Matrigel ECM protein, then allowed to invade "upwards" through the filter and into the Matrigel. Reconstruction of z-series image stacks, obtained by confocal imaging, into three-dimensional representations allows for visualization of collectively invading strands and analysis of the representation of fluorescently-labeled cells in leading versus following positions.

Models of tumor cell invasion into three-dimensional extracellular matrix better reflect the in vivo situation than two-dimensional motility assays. Using matrix invasion assays combined with confocal imaging of fluorescently-labeled cells, detailed information on invasion modes and the distinct contributions of leading versus following cells can be obtained.

النمذجة والتصوير 3 الأبعاد غزو الخلية الجماعية

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

In organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is indispensable for proper physiological function, and the formation and maintenance of these structures is a highly regulated process. The analysis of these complex, 3-dimensional structures has greatly depended on either 2-dimensional examination in section or on dye injection studies. These techniques, however, are not able to provide a complete and quantifiable representation of the ductal or vascular structures they are intended to elucidate. Alternatively, the nature of 3-dimensional plastic resin casts generates a permanent snapshot of the system and is a novel and widely useful technique for visualizing and quantifying 3-dimensional structures and networks.
A crucial advantage of the resin casting system is the ability to determine the intact and connected, or communicating, structure of a blood vessel or duct. The structure of vascular and ductal networks are crucial for organ function, and this technique has the potential to aid study of vascular and ductal networks in several ways. Resin casting may be used to analyze normal morphology and functional architecture of a luminal structure, identify developmental morphogenetic changes, and uncover morphological differences in tissue architecture between normal and disease states. Previous work has utilized resin casting to study, for example, architectural and functional defects within the mouse intrahepatic bile duct system that were not reflected in 2-dimensional analysis of the structure1,2, alterations in brain vasculature of a Alzheimer's disease mouse model3, portal vein abnormalities in portal hypertensive and cirrhotic mice4, developmental steps in rat lymphatic maturation between immature and adult lungs5, immediate microvascular changes in the rat liver, pancreas, and kidney in response in to chemical injury6.
Here we present a method of generating a 3-dimensional resin cast of a mouse vascular or ductal network, focusing specifically on the portal vein and intrahepatic bile duct. These casts can be visualized by clearing or macerating the tissue and can then be analyzed. This technique can be applied to virtually any vascular or ductal system and would be directly applicable to any study inquiring into the development, function, maintenance, or injury of a 3-dimensional ductal or vascular structure.

A method of visualizing and quantifying the 3-dimensional structure of mouse hepatic portal vein or intrahepatic bile duct is described. This resin cast technique can also be applied to other ductal or vascular systems and allows for in situ visualization or quantification of a system's intact communicating architecture.

الأبعاد 3-صب الراتنج والتصوير من الوريد البابي داخل الكبد أو ماوس نظام القناة الصفراوية

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of &beta;-cell Mass Distribution in Diabetes Research

By adapting OPT to include the capability of imaging in the near infrared (NIR) spectrum, we here illustrate the possibility to image larger bodies of pancreatic tissue, such as the rat pancreas, and to increase the number of channels (cell types) that may be studied in a single specimen. We further describe the implementation of a number of computational tools that provide: 1/ accurate positioning of a specimen's (in our case the pancreas) centre of mass (COM) at the axis of rotation (AR)2; 2/ improved algorithms for post-alignment tuning which prevents geometric distortions during the tomographic reconstruction2 and 3/ a protocol for intensity equalization to increase signal to noise ratios in OPT-based BCM determinations3. In addition, we describe a sample holder that minimizes the risk for unintentional movements of the specimen during image acquisition. Together, these protocols enable assessments of BCM distribution and other features, to be performed throughout the volume of intact pancreata or other organs (e.g. in studies of islet transplantation), with a resolution down to the level of individual islets of Langerhans.

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of &amp;#946;-cell Mass Distribution in Diabetes Research

We describe the adaptation of optical projection tomography (OPT)1 to imaging in the near infrared spectrum, and the implementation of a number of computational tools. These protocols enable assessments of pancreatic &beta;-cell mass (BCM) in larger specimens, increase the multichannel capacity of the technique and increase the quality of OPT data.

بالقرب من الأشعة تحت الحمراء التصوير المقطعي الإسقاط الضوئي لتقييم التوزيع الشامل β خلايا في أبحاث السكري

By adapting OPT to include the capability of imaging in the near infrared (NIR) spectrum, we here illustrate the possibility to image larger bodies of ...

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real time images with a 15 &#181;m axial resolution at an effective tissue penetration of 2-3 mm. Within the OCT images the loss of signal intensity per millimeter of tissue penetration, the attenuation coefficient, is calculated. The attenuation coefficient is a tissue specific property, providing a quantitative parameter for tissue differentiation. 
Until now, renal mass treatment decisions have been made primarily on the basis of MRI and CT imaging characteristics, age and comorbidity. However these parameters and diagnostic methods lack the finesse to truly detect the malignant potential of a renal mass. A successful core biopsy or fine needle aspiration provides objective tumor differentiation with both sensitivity and specificity in the range of 95-100%. However, a non-diagnostic rate of 10-20% overall, and even up to 30% in SRMs, is to be expected, delaying the diagnostic process due to the frequent necessity for additional biopsy procedures. 
We aim to develop OCT into an optical biopsy, providing real-time imaging combined with on-the-spot tumor differentiation. This publication provides a detailed step-by-step approach for percutaneous, needle based, OCT of renal masses.

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

Optical coherence tomography (OCT) is a high resolution imaging technique that allows analysis of tissue specific optical properties providing the means for tissue differentiation. We developed needle based OCT, providing real-time imaging combined with on-the-spot tumor differentiation. This publication describes a method for percutaneous, needle based OCT of renal masses.

في فيفو، عن طريق الجلد، إبرة وبناء، بصري تماسك التصوير المقطعي من الجماهير الكلى

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real ...

Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the subretinal space, and to evaluate toxicity and efficacy in vivo. HR-SD-OCT uses near infrared light (800-880 nm) and has optics specifically designed for the unique optics of the mouse eye with sub-2-micron axial resolution. Transgenic mouse models of outer retinal (photoreceptor) degeneration and controls were imaged to assess the disease progression. Pulled glass microneedles were used to deliver sub retinal injections of adeno-associated virus (AAV) or nanoparticles (NP) via a trans-scleral and trans-choroidal approach. Careful positioning of the needle into the subretinal space was required prior to a calibrated pressure injection, which delivers fluid into the sub retinal space. Real time subretinal surgery was conducted on our retinal imaging system (RIS). HR-SD-OCT demonstrated progressive uniform retinal degeneration due to expression of a toxic mutant human mutant rhodopsin (P347S) (RHOP347S) transgene in mice. HR-SD-OCT allows rigorous quantification of all the retinal layers. Outer nuclear layer (ONL) thickness and photoreceptor outer segment length (OSL) measurements correlate with photoreceptor vitality, degeneration, or rescue. The RIS delivery system allows real-time visualization of subretinal injections in neonatal (~P10-14) or adult mice, and HR-SD-OCT immediately determines success of delivery and maps areal extent. HR-SD-OCT is a powerful tool that can evaluate the success of subretinal surgery in mice, in addition to measuring vitality of photoreceptors in vivo. HR-SD-OCT can also be used to identify uniform animal cohorts to evaluate the extent of retinal degeneration, toxicity, and therapeutic rescue in preclinical gene therapy research studies.

Here we demonstrate a novel approach to using high resolution spectral-domain optical coherence tomography (HR-SD-OCT) to assist delivery of gene therapy agents into the subretinal space, assess its areal coverage, and characterize photoreceptor vitality.

القرار أولتراهيغ الماوس الضوئية التماسك التصوير المقطعي لمساعدة الحقن داخل مقلة العين في أبحاث العلاج الجيني الشبكية

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the present protocol, mice expressing green fluorescent protein (gfp) under the promoter of Cx3cr1 (BALB/c-Cx3cr1gfp/gfp) were used to image microglia cells in vivo in the retina. Microglia are resident macrophages of the retina and have been implicated in several retinal diseases1,2,3,4,5,6. This protocol provides a detailed approach for generation of retinal B-scans, with SD-OCT, and imaging of microglia cell distribution in Cx3cr1gfp/gfp mice with SLO in vivo, using an ophthalmic imaging platform system. The protocol can be used in several reporter mouse lines. However, there are some limitations to the protocol presented here. First, both SLO and SD-OCT, when used in the high-resolution mode, collect data with high axial resolution but the lateral resolution is lower (3.5 &#181;m and 6 &#181;m, respectively). Moreover, the focus and saturation level in SLO is highly dependent on parameter selection and correct alignment of the eye. Additionally, using devices designed for human patients in mice is challenging due to the higher total optical power of the mouse eye compared to the human eye; this can lead to lateral magnification inaccuracies7, which are also dependent on the magnification by the mouse lens among others. However, despite that the axial scan position is dependent upon lateral magnification, the axial SD-OCT measurements are accurate8.

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

This protocol describes how high-resolution imaging techniques such as spectral domain optical coherence tomography and scanning laser ophthalmoscopy can be utilized in small rodents, using an ophthalmic imaging platform system, to obtain information on retinal thickness and microglial cell distribution, respectively.

في فيفو التصوير من "الفئران مراسل" Cx3cr1التجارة والنقل/التجارة والنقل مع المجالات الطيفية الضوئية التماسك التصوير المقطعي وفحص تنظير العين الليزر

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the ...

Ablation of Ischemic Ventricular Tachycardia Using a Multipolar Catheter and 3-dimensional Mapping System for High-density Electro-anatomical Reconstruction

Ventricular tachycardia (VT) in patients with ischemic cardiomyopathy mainly results from endocardial scars after myocardial infarction; those scars represent zones of slow conduction that allow the occurrence and maintenance of reentrant circuits. Catheter ablation enables substrate modification of those low voltage areas and thus can help to alter the scar tissue in such a way that arrhythmias cannot appear anymore. Hospitalizations of concerned patients decrease, quality of life and outcome rise. Consequently, VT ablation represents a growing field in electrophysiology, especially for patients with endocardial scars in ischemic heart disease after myocardial infarction. However, ablation of ventricular tachycardia remains one of the most challenging procedures in the electrophysiology lab. Precise scar definition and localization of abnormal potentials are critical for ablation success. The following manuscript describes the use of a multipolar mapping catheter and 3-dimensional (3D) mapping system to create a high density electro-anatomical map of the left ventricle including a precise scar representation as well as mapping of fractionated and late potentials in order to allow a highly accurate substrate modification.

With the following protocol, we provide an approach to Ventricular Tachycardia (VT) ablation using high density mapping with a multipolar catheter and 3D mapping system enhancing the success of the procedure.

الاجتثاث خفقان البطين الدماغية باستخدام القسطرة متعدد الأقطاب ونظام رسم خرائط ثلاثية الأبعاد للتعمير الكهربائية التشريحية عالي الكثافة

Ventricular tachycardia (VT) in patients with ischemic cardiomyopathy mainly results from endocardial scars after myocardial infarction; those scars ...

Quantitative Analysis of Cellular Composition in Advanced Atherosclerotic Lesions of Smooth Muscle Cell Lineage-Tracing Mice

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel interventions have remained elusive. This is likely due, in part, to a reliance on preclinical prevention models investigating the effects of genetic manipulations or pharmacological treatments on atherosclerosis development rather than the established disease. Also, results of these studies are often confounding because of the use of superficial lesion analyses and a lack of characterization of lesion cell populations. To help overcome these translational hurdles, we propose an increased reliance on intervention models that employ investigation of changes in cellular composition at a single cell level by immunofluorescent staining and confocal microscopy. To this end, we describe a protocol for testing a putative therapeutic agent in a murine intervention model including a systematic approach for animal dissection, embedding, sectioning, staining, and quantification of brachiocephalic artery lesions. In addition, due to the phenotypic diversity of cells within late-stage atherosclerotic lesions, we describe the importance of using cell-specific, inducible lineage tracing mouse systems and how this can be leveraged for unbiased characterization of atherosclerotic lesion cell populations. Together, these strategies may assist vascular biologists to more accurately model therapeutic interventions and analyze atherosclerotic disease and will hopefully translate into a higher rate of success in clinical trials.

We propose a standardized protocol to characterize the cellular composition of late-stage murine atherosclerotic lesions including systematic methods of animal dissection, tissue embedding, sectioning, staining, and analysis of brachiocephalic arteries from atheroprone smooth muscle cell lineage tracing mice.

التحليل الكمي لتكوينها الخلوي في الآفات تصلب الشرايين المتقدمة للعضلات الملساء خلية تتبع النسب الفئران

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel ...

High-Throughput Analysis of Optical Mapping Data Using ElectroMap

Optical mapping is an established technique for high spatio-temporal resolution study of cardiac electrophysiology in multi-cellular preparations. Here we present, in a step-by-step guide, the use of ElectroMap for analysis, quantification, and mapping of high-resolution voltage and calcium datasets acquired by optical mapping. ElectroMap analysis options cover a wide variety of key electrophysiological parameters, and the graphical user interface allows straightforward modification of pre-processing and parameter definitions, making ElectroMap applicable to a wide range of experimental models. We show how built-in pacing frequency detection and signal segmentation allows high-throughput analysis of entire experimental recordings, acute responses, and single beat-to-beat variability. Additionally, ElectroMap incorporates automated multi-beat averaging to improve signal quality of noisy datasets, and here we demonstrate how this feature can help elucidate electrophysiological changes that might otherwise go undetected when using single beat analysis. Custom modules are included within the software for detailed investigation of conduction, single file analysis, and alternans, as demonstrated here. This software platform can be used to enable and accelerate the processing, analysis, and mapping of complex cardiac electrophysiology.

This protocol describes the setup and use of ElectroMap, a MATLAB-based open-source software platform for analysis of cardiac optical mapping data. ElectroMap provides a versatile high-throughput tool for analysis of optical mapping voltage and calcium datasets across a wide range of cardiac experimental models.

تحليل عالي الإنتاجية لبيانات الخرائط البصرية باستخدام الخريطة الكهربائية

Optical mapping is an established technique for high spatio-temporal resolution study of cardiac electrophysiology in multi-cellular preparations. Here we ...