أمراض القلب والأوعية الدموية هي السبب الرئيسي للوفاة على الصعيد العالمي. نماذج الماوس هي أدوات مفيدة لدراسة هذا المرض ويمكن استخدام بروتوكول لدينا لتحديد تصلب الشرايين في الفئران. باستخدام هذا البروتوكول، يمكن قياس حجم الآفة في ثلاثة مواقع الأوعية الدموية.
جذر الأبهري، القوس الأبهري والشريان brachiocephalic. يمكن أن يكون القياس الكمي لتصلب الشرايين في الفئران مهمة شاقة. وقد قدمنا خطوات مفصلة نأمل أن تسرع العملية.
ومن الصعب وصف بعض هذه الخطوات كتابة. نأمل أن يساعدك هذا الفيديو في الحصول على تحليل قوي لحجم الآفة التهتر. بعد حصاد قلب الماوس وفقا للبروتوكولات القياسية، ووضع القلب على سرير الفلين، الجانب البطني تحت المجهر تشريح واستخدام إبرة لإصلاح القلب إلى الفلين من خلال قمة.
عقد قاعدة القلب مع ملقط التشريحية، واستخدام مشرط عقد في زاوية 20 درجة caudally في الطائرة القوس، و 20 درجة الجمجمة في الطائرة عرضية، لقطع بعيدا apical ثلثي القلب. تضمين جذر الأبهري وقاعدة القلب في مجمع درجة الحرارة القطع الأمثل، أو أكتوبر، والضغط بلطف على القلب مع ملقط لملء الجذر الأبهري مع مركب وإزالة أي فقاعات الهواء. نقل العينة إلى الجزء السفلي من cryomold مليئة أكتوبر مع الجذر الأبهري عمودي على السطح السفلي وتجميد المجمع على الجليد الجاف.
ثم تخزين عينة الأنسجة في كيس الفريزر في ناقص 80 درجة مئوية حتى اكيت. لإعداد سرير التثبيت لتحليل الوجه en، أضعاف جزء من فيلم الشمع البارافين ثماني مرات لجعل سطح مسطحة 25 من 25 ملم والتفاف شريط العزل الكهربائي الأسود حول الفيلم لجعل خلفية داكنة للأبهر. ضع ملصقًا على الجانب الخلفي من سرير التثبيت واستخدم قلم رصاص لتسجيل رقم تعريف الماوس.
نقل القوس الأبهري إلى السرير التثبيت وإضافة قطرة من برنامج تلفزيوني إلى الأنسجة. باستخدام مجهر ستيريو، تنظيف الشريان الأورطي من الأنسجة الدهنية periadventitial المتبقية واستخدام مقص Vannas والملقط دومون لقشر بلطف بعيدا كل من الأنسجة الدهنية المحيطة دون التلاعب أو إتلاف الشريان الأبهر. المقبل، أدخل مقص Vannas في تجويف الأبهر لفضح سطح intimal.
ابدأ في قطع الانحناء الخارجي للقوس الصاعد في الاتجاه القعد، والاستمرار في قطع الفروع المفتوحة، بما في ذلك الشريان البرازي والجزئي وتجنيب الجزء الظهري من المنطقة الصدرية النازلة. لعرض سطح intimal، وقطع فتح انحناء أقل وأضعاف فتح الشريان الأبهر. باستخدام حامل إبرة كاستروفيجو الصغيرة ، قم بتأمين القوس المفتوح على السرير المعلق مع الطرف الحاد لدبابيس الحشرات مينين دون تمديد العينة ، وثني الدبابيس بلطف بعيدًا عن العينة حيث يتم الاحتفاظ بالأنسجة في مكانها.
ثم تخزين القوس المعلقة facedown في طبق بيتري من برنامج تلفزيوني في أربع درجات مئوية. بالنسبة إلى تلطيخ السودان الرابع، شطف العينة لمدة خمس دقائق في طبق بيتري من 70٪ الإيثانول مع القوس المواجهة إلى أسفل، قبل نقل العينة إلى طبق من السودان الرابع حل العمل لمدة سبع دقائق. في نهاية الحضانة، شطف العينة مع اثنين من يغسل لمدة ثلاث دقائق في 80٪ الإيثانول لإزالة وصمة عار سطح إيثي العادي، تليها شطف النهائي في برنامج تلفزيوني قبل إعادة الأنسجة إلى طبق بيتري الأصلي.
ثم الحصول على micrographs تحت مجهر ستيريو متصلة بكاميرا رقمية في التكبير 10X، والحصول على صور من القوس المعلقة المغمورة في برنامج تلفزيوني، وذلك باستخدام الأوزان المعدنية الصغيرة لعقد السرير التثبيت إلى الجزء السفلي من طبق بيتري. للحصول على اكشنات اسخائية من الجذر الاههري المضمّن، قم بتعيين درجة حرارة البُرَث إلى ناقص 20 درجة مئوية وسمك القسم إلى 10 ميكرومترات. جبل كتلة أكتوبر التي تحتوي على الجذر الأبهري على حامل العينة مع الأنسجة البطينية التي تواجه الخارج.
تأمين تحديد المواقع مع بعض OCT إضافية إذا لزم الأمر. يجب الآن وضع الجذر الأبهري عمودي على شفرة السكين. جمع أقسام التحكم الأولية التي تحتوي على أنسجة عضلة القلب على شرائح المجهر العادية، والتحقق من التقدم من خلال الأنسجة كل 200 ميكرومتر تحت مجهر خفيف.
عندما يظهر أول أعتاب الأبهر، إمالة العينة نحو نقطة الصفر cusp لمحاذاة مستوى القسم مع اثنين من cusps الأخرى والعد كل قسم 10 ميكرومتر التي يتم قطع من نقطة الصفر فصاعدا. البدء في جمع أقسام للتحليل من 90 ميكرومتر وما بعدها وفقا للشريحة المخطط لها، حتى تم التوصل إلى 800 ميكرومتر من نقطة الصفر. حساب جزء الآفة من مجموع مساحة السفينة من الجذر الأبهري يجعل البيانات أقل حساسية للاختلافات زاوية ممكن أثناء تجزئة.
وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يكون من التوضيحي لحساب المنطقة تحت المنحنى أو حجم آفة atheroto لكل فأرة وتقديم البيانات في مؤامرة نقطة لمزيد من تصور الاختلافات الفردية داخل المجموعات. يمكن قياس تراكم الدهون الآفة عن طريق اللون عتبة النفط الأحمر O المناطق الإيجابية من منطقة الآفة الكلية. الشرايين التاجية اليمنى واليسرى عادة ما تختلف عن الشريان الأورطي حوالي 250 ميكرومتر من الجيوب الأنفية الأبهري الذي يتزامن في كثير من الأحيان مع أحجام الآفة الأكثر بروزا.
إزالة الخلفية الداكنة في صور تمثيلية للأقواس الأبهرية في مواجهة en يمكن أن تعزز العرض المرئي. عادة ما يتم توزيع حجم الآفة داخل المجموعات ، مما يسمح بإجراء تحليل إحصائي باستخدام اختبار t للطالب بين المجموعات. نوصي بممارسة بعض المواد الاختبارية حتى تحصل على مهارات كافية لمعالجة العينات التجريبية الخاصة بك.
إذا كان حجم الآفة يختلف بين المجموعات ، فيجب عليك تحديد الآلية ، حيث أن تحليل تكوين الآفة عادة ما يكون الخطوة التالية لمتابعة.
